1. información necesaria cuando se están emparejando animales incluye cepa/stock del animal utilizando la nomenclatura adecuada, las fechas de nacimiento para el criador masculino y femenino y la fecha de instalación. Mantenimiento de registros precisos es imprescindible con colonias de cría.

2. sexo determinación de ratones y ratas se realiza comparando las distancias anogenitales. En las hembras, la distancia entre el ano y los genitales externos es más corta que es para los hombres. La presencia de un saco escrotal en machos es otro indicador de sexo.

3. seleccionar y establecer el esquema de apareamiento

Nota: Hay dos esquemas de apareamiento que se pueden utilizar.

1. Proestro/estro tiempo acoplamiento: este método se basa en pelado las hembras con los machos en el momento de máxima receptividad y fertilidad.
   1. Debe controlarse el ciclo estral en las hembras por la examinación visual de los genitales externos para los cambios que son indicativos de proestro y estro, o citología de las secreciones vaginales (véase abajo).
   2. Cuando una mujer está decidida a estar en proestro o estro, ella está emparejada con un hombre al final del día, como los animales se aparean generalmente en la noche.
   3. A la mañana siguiente, la mujer se examina un enchufe copulatoria (véase abajo). Si no hay enchufe está presente, la mujer puede permanecer con el macho durante el día y comprobada para un enchufe copula al final del día. Por otra parte, si se determina que ya no está en proestro o estro, ella se retira de la jaula de cría.
2. Al azar tiempo acoplamiento: este método se basa en el hecho el ciclo estral de roedores es muy corto, 4-5 días.
   1. Para este método, apareamientos se pueden configurar en cualquier momento, y las hembras entonces se comprueban copula enchufes cada mañana y tarde hasta que se observe un enchufe.
   2. Una hembra se empareja con un hombre en la noche.
   3. Ella está marcada por un enchufe consistieron al principio y al final de cada día hasta que se observe un enchufe. Comúnmente se toma 3 o más días de un enchufe ser visto cuando se utiliza este método.

4. predecir embarazo

Puesto que la palpación de los cachorros es difícil hasta más tarde durante el embarazo, alrededor de 10 a 12 del día, se han desarrollado sistemas de ultrasonido comercial para roedores; sin embargo, algunos centros de investigación animal con esta tecnología. Por lo tanto, visualización de tapones copulador, observación de cambios vaginales o citología vaginal se utilizan para ayudar en la predicción de cuándo una mujer ha concebido una camada (véase abajo). Sin embargo, ninguno de estos métodos son capaces de confirmar el embarazo. Una vez que se observa un tapón de copulación, la hembra debe ser vigilada para detectar signos de embarazo, como aumento de peso.

5. determinar la fase del ciclo estral

1. Inspección visual
   Nota: Para el tiempo de apareamiento de ratones y ratas, observación visual de la vagina para los cambios que son indicativos de proestro y estro es el método más rápido para determinar la etapa del ciclo estral, y no requiere ningún equipo especial.
   1. Al evaluar el ciclo estral mediante el método visual, es importante realizar la inspección visual en la misma zona con respecto a la iluminación de la sala, como la fuente de luz puede cambiar el color percibido de los tejidos vaginales y hacer difícil la evaluación. Por ejemplo, la tonalidad púrpura por luces dificulta la detección visual.
   2. Para evaluar la etapa del ciclo estral por observación visual, cada ratón debe manualmente restringida por la cola, con las patas delanteras apoyadas sobre una tapa de la jaula.
   3. La abertura vaginal de cada mujer se evalúa basado en la condición del tejido que rodea el área vaginal y el tamaño de la abertura vaginal. ²
      1. Durante el proestro, la abertura vaginal es amplia y se caracteriza por la hinchazón de los tejidos circundantes. El tejido es en color rosa y muy húmedo. A menudo hay arrugas o estrías a lo largo de los bordes dorsales y ventrales de la abertura.
      2. Durante el celo, la hinchazón de los tejidos que rodean la abertura vaginal se reduce y los tejidos no son tan húmedos y rosados.
      3. Durante el metestro la abertura vaginal es mínima y hay inflamación insignificante.
      4. Durante el diestro, no hay ninguna hinchazón de los tejidos alrededor del área vaginal, y la abertura vaginal es pequeña y cerrada.
2. Citología vaginal
   Como ratones y ratas son polyestrous, la duración del ciclo estral es muy corta, que van desde 4-5 días. A veces es necesario identificar todas las cuatro etapas del estro: proestro, estro, metestro y el diestro. La citología vaginal es un método muy preciso para determinar estas etapas. También existen dos métodos de recolección de muestras: el método no invasivo de lavado vaginal y el método de hisopado de vagina.
   1. Lavado vaginal
      1. Los materiales necesarios son puntas de pipetas μl 200 estériles, bulbos de látex, estéril doble (ddH₂0) de agua destilación y limpiar portaobjetos de vidrio.
      2. Coloque un bulbo de látex en el extremo de una punta de 200 μL estériles. Elaborar aproximadamente 100 μl de ddH estéril₂O con la pipeta.
      3. Levante el ratón fuera de la jaula y le coloque encima el alambre barra jaula con su cola hacia usted.
      4. Sujete la cola firmemente y elevar los cuartos traseros del ratón. El ratón tendrá ahora sólo las patas delanteras sujetando la tapa.
      5. Si orina de ratón, espere hasta que deje de orinar. Debe haber orina a la izquierda en la entrada a la vagina, la abertura puede ser aclarada con una pequeña cantidad de ddH₂O. cambio la punta que se utilizó para el enjuague.
      6. Coloque el extremo de la punta de llenado O ddH₂en la apertura de la vagina sin penetrar en el orificio.
      7. Presione suavemente la bombilla para expulsar a un cuarto a la mitad del volumen de agua (~ 25-50 μL) en la apertura del canal vaginal. Espontáneamente se aspire el líquido en el canal sin la inserción de la punta. Suelte lentamente la presión ejercida sobre el foco. El líquido se retirará hacia la punta.
      8. Evitar la liberación de presión demasiado rápido para evitar la aspiración del líquido en el bulbo. Una punta de filtrado puede ser útil para este propósito.
      9. Repita el paso anterior 4 - 5 veces con la misma punta, bulbo y fluido para obtener un número suficiente de células en una sola muestra.
      10. Colocar el líquido en portaobjetos de vidrio y permitir el frotis a completamente seco a temperatura ambiente.
      11. Utilice una nueva pipeta para cada ratón.
      12. Una vez seco, estos frotis estros pueden manchadas inmediatamente o almacenados y manchados en una fecha posterior. Tinción de Wright-Giemsa es más comúnmente utilizado para las diapositivas de la mancha. Esta mancha está disponible comercialmente como una mancha de un solo paso que no requiere la fijación de la corredera para evitar que las células del lavado durante el proceso de tinción. La diapositiva se coloca en la mancha durante 45-60 segundos, según las instrucciones del fabricante.
      13. Las diapositivas son luego examinados bajo el microscopio y las células vistas corresponden a la etapa del ciclo: 1) si la mujer está en proestro, las células se ven como racimos de redondo, bien formado nucleated células epiteliales con un núcleo que las manchas más oscuras que la citoplasma; 2) si la hembra está en celo, la mayoría de las células son las células epiteliales squamous cornified que carecen de un núcleo, son angulares en apariencia y ocurren en racimos densamente; 3) si la mujer está en metestro, las células son glóbulos blancos (especialmente neutrófilos con algunas células epiteliales squamous cornified presente) con núcleos teñidos de oscuro que se forman de dos salchichas Unidas entre sí; 4) durante el diestro, las células presentes son normalmente las células blancas de la sangre con la aparición de algunas células epiteliales nucleadas...
   2. Hisopado vaginal
      1. Los materiales necesarios son aplicadores con punta de algodón estériles con una punta de 2 mm de diámetro, portaobjetos de vidrio limpio y solución salina fisiológica estéril.
      2. Moje un aplicador con punta de algodón con solución salina.
      3. Introduzca la punta del aplicador en la vagina del ratón restringida.
      4. Suavemente gire y ruede la punta contra la pared vaginal. Retire con cuidado la torunda.
      5. Las células se transfieren a un portaobjetos de vidrio seca girando la torunda a través de la diapositiva.
      6. Una vez seca la diapositiva, puede ser teñido con tinción de Wright-Giemsa.
         Aplicador se considera un procedimiento estresante, y -cuando ratones subrayó pueden haber interrumpido ciclos estruales. Estimulación vaginal y del cuello uterino causada por hisopado puede inducir seudoembarazo. Repetidos frotis de la mucosa vaginal pueden causar daño si no es realizaron, con el alojamiento adecuado y con los hisopos de algodón de tamaño correcto. ^{3, 4}

Figura 2. Citología vaginal--diferentes fases del estro roedor ciclo

6. visualizar un enchufe copulatoria

Este enchufe consta de semen y fluido vaginal y persiste en la vagina para postcopulation de 12-24 h. La presencia del tapón confirma el apareamiento, pero no garantiza que la mujer está embarazada. Si la mujer tapada está embarazada, el primer día de gestación se considera el día después de que el enchufe se encuentra.

1. Levante el ratón fuera de la jaula y le coloque encima el alambre barra jaula con su cola hacia usted.
2. Posición del ratón mediante la aplicación de presión justo por encima de la cola a arquear la espalda para permitir la mejor presentación de la abertura vaginal.
3. Observar su abertura vaginal de una masa blanquecina. El enchufe copula no puede ser visualmente evidente pero puede confirmarse con el uso de una sonda Roma.
4. Suavemente con la punta de la sonda, introduzca en la abertura vaginal. La presencia de un tapón de copula impedirá el avance de la sonda dentro de 0.5 cm de la abertura vaginal.
5. La sonda debe desinfectarse con alcohol y secar completamente antes de cada uso.

Como la hembra tiene camadas, la fecha de nacimiento, el tamaño de camada, el número de nacidos, el número de destetados, la proporción de hombres y mujeres cachorros y la proporción de los genotipos debe ser registrada. Si los genotipos dentro de una camada no corresponden a los genotipos de los padres, repetir el análisis debe hacerse para verificar el verdadero genotipo.

7. el destete

La gestación de ratones y ratas es de aproximadamente 21 días. Los jóvenes son destetados a los 21-28 días de edad. Ambos ratones y ratas pueden reproducirse tan pronto como 8 semanas de edad, por lo tanto es imperativo que las crías están separadas por sexo a una edad temprana. Cría intensiva requiere que los cachorros de cada camada se destetan a día 20 para evitar que los cachorros mayores de estar presente cuando nace la siguiente camada. Para la cría de nonintensive, los cachorros pueden dejarse con la madre pasados 20 días de edad, a menudo hasta 28 días de edad. Esto puede ser muy beneficioso para muchas variedades genéticamente modificadas, pues los cachorros pueden no ser tan vigorosos como nonengineered o animales de tipo salvaje.

Cachorros machos y hembras se separan al destete. Siempre que sea posible, los cachorros recién destetados deben no alojados individualmente. Si una camada contiene sólo un cachorro de un sexo determinado, deben hacerse intentos para albergar este cachorro con otros del mismo género. Opciones de alojamiento posibles son: 1) una sola cría hembra puede permanecer con la madre, si no en una jaula de cría intensiva; 2) una sola cría hombre o mujer puede colocarse con otros cachorros del mismo género de una camada diferente de la misma edad; 3) si los padres son una pareja monógama, se puede quitar la hembra de la jaula para permitir que una sola cría macho que se encuentra con el padre; y 4) una sola cría macho puede ubicada con hermanos femeninos hasta 5 semanas de edad. El sexo de los cachorros debe ser verificado una semana posdestete para evitar camadas no deseadas de crías mal segregados.

Ratas y ratones destetados se deben revisar diariamente para asegurar que están prosperando. Aunque la Guía para el cuidado y uso de animales de laboratorio⁵ indica que alimentos deben presentarse a los animales de tal manera para evitar ser manchado por las heces y la orina, se deberá una cantidad pequeña de comida (un perdigón por a ratones recién destetados ratón) se coloca en un plato de vidrio (placa Petri) en el piso de la jaula. Esto animará a los animales a la transición a tener roedor chow como su fuente de alimento único. Incluso para los animales que se encuentran en los estantes que proporcionan agua a las jaulas a través de un sistema de riego automático, una botella de agua puede añadirse a la jaula si los ratones parecen estar deshidratado.

Tabla 1. Usan con manchas de ratón y las acciones.

Tabla 2. Las acciones y las tensiones de la rata utilizado