Para comenzar, prepare 10 veces el medio de cultivo M199 disolviendo el polvo de M199 a una concentración 10 veces mayor en 90 mililitros de agua desionizada, seguido de la adición de 10 mililitros de FBS. Filtre la solución a través de un filtro de 0,22 micras. El medio filtrado se puede almacenar a cuatro grados centígrados durante un máximo de dos meses.
Para preparar el gel de matriz con células vasculares, utilice alrededor de 2 millones de células vasculares. Enfríe el tubo estéril de 1,5 mililitros que contiene el gránulo celular debidamente preparado en un baño de hielo. Descongele el gel de matriz completamente en un baño de hielo sin mezclarlo ni vórtice.
Del mismo modo, enfríe el medio de cultivo preparado 10 veces M199 junto con el reactivo de prueba o el fármaco de interés a cuatro grados centígrados. A continuación, manteniendo una relación de volumen de 8,8 a 1 a 0,2, combine el gel de matriz preenfriado con el medio M199 preenfriado 10 veces que contiene 10% de FBS y el reactivo de prueba preenfriado para producir la mezcla de gel de matriz. Finalmente, vuelva a suspender las celdas preenfriadas en 400 microlitros de la mezcla de gel de matriz preparada mezclando suavemente para evitar la formación de burbujas.
Mantenga el tubo que contiene las células en gel de matriz en hielo hasta que los ratones estén listos para la inyección de gel de matriz.
