Inyección de Dextran-FITC y colección de tapones de gel matriciales del ratón para el ensayo de tapones de gel matriciales

Para inyectar al ratón Dextrano, FITC siete días después de la inyección en gel de matriz, RESUSPENDER 0,5 miligramos de Dextrano, FITC en 500 microlitros de agua bidestilada. Vórdelo a fondo para obtener una solución de Dextrano y FITC de un microgramo por microlitro. Llene una jeringa de calibre 29 con 50 microlitros de la solución Dextran FITC.

Asegure el ratón en el instrumento de inyección de la vena de la cola, desinfecte la cola con una bola de algodón empapada en alcohol al 75% antes de inyectar con cuidado 50 microlitros de la solución Dextran FITC en la jeringa en la vena de la cola. Aplique presión en el lugar de la inyección con el hisopo de algodón durante un minuto para detener el sangrado. Regrese el ratón a su jaula y déjelo relajar durante 30 minutos antes de recoger el tapón de gel de matriz.

Para recoger el tapón de gel, corte la piel del ratón sacrificado a lo largo del borde marcado del tapón, utilizando unas tijeras quirúrgicas. Y retire la piel por encima del tapón de gel de matriz. Recoja el tapón y enjuáguelo en un vaso de precipitados con solución salina tamponada con fosfato para eliminar el exceso de sangre.

A continuación, cubra la parte inferior del casete de inclusión de tejido con aproximadamente 0,5 mililitros de gel de inclusión de tejido. A continuación, coloque rápidamente el tapón de gel de matriz sobre el gel de inclusión de tejido en la orientación planificada. Inserte el tapón con gel de inclusión de tejido adicional.

Solidifique los casetes a menos 80 grados centígrados durante 12 horas. Después de quitar el bloque de tapón solidificado, corte secciones de 12 micras de espesor con un micrótomo de congelación. A continuación, monte las secciones en portaobjetos de microscopio.