Evaluación rápida de la citotoxicidad in vitro del receptor de antígeno quimérico que expresa jurkat mediante imágenes fluorescentes

Las células T con CAR se mejoran constantemente para lograr mejores respuestas en ensayos clínicos en humanos. Estamos identificando formas de evaluar esto en nuestro laboratorio utilizando un método imparcial de alto rendimiento, como el uso de imágenes fluorescentes para detectar las combinaciones que funcionan mejor. Hay varias combinaciones de construcciones que se pueden diseñar para cualquier fragmento de variable de cadena única modificando la geometría de los dominios extracelular y bisagra.

Hemos diseñado este protocolo para identificar las combinaciones con mejor eficacia en la eliminación de células diana utilizando células Jurkat. Se trata de un protocolo rápido y de alto rendimiento para cribar construcciones de CAR en función de su citotoxicidad en las células diana utilizando células Jurkat, que luego se validan con células T convencionales. Se pueden probar una docena de construcciones diferentes de CAR en una placa de 96 pocillos simultáneamente utilizando esta técnica.

Aquí, en Akhavan Lab, cuantificamos en números absolutos la ciclosis directa de las células diana por las células Jurkat que expresan CAR de una manera de alto rendimiento para detectar múltiples construcciones de CAR. El objetivo principal de nuestro laboratorio es mejorar la traslación clínica de la terapia de células T con CAR contra tumores cerebrales de alto grado. Aprovechamos los cribados de fármacos de alto rendimiento como una modalidad para mejorar la citotoxicidad de las células T con CAR, así como para dirigirnos al microambiente tumoral.