FACS Enrichment of Zebrafish Gut Cell Suspension for scRNAseq

Para realizar la clasificación celular activada por fluorescencia, o FACS, en las células intestinales aisladas de larvas de pez cebra, utilice la muestra de larvas enteras de tipo salvaje para establecer las puertas de la población celular clasificada mediante el registro de 3.000 células en el citómetro de flujo. Use una boquilla de 100 micras y establezca Precisión de clasificación en Pureza de 4 vías. Coloque el tubo de recolección que contiene 200 microlitros de PBS con un 5% de suero fetal para terneros en la máquina de fax.

Cargue la suspensión celular preparada a partir de los intestinos aislados y, después de excluir los dobletes en las células muertas, clasifique las células individuales vivas o negativas para DAPI en el tubo de recolección. Mantenga el tubo de recolección en hielo después de la clasificación de las células, empleando una verificación de viabilidad con azul de tripano. Cuente el número de células en la suspensión con un hemocitómetro.

Las células ya están listas para ser procesadas para la secuenciación de ARN de una sola célula. Utilice aproximadamente 20.000 células por muestra.