Cosecha, descelularización y digestión de pepsinas de tejidos pulmonares bovinos para la formación de hidrogel de matriz extracelular pulmonar descelularizada

1 Para comenzar, retire los tejidos pulmonares bovinos congelados2 de 80 grados centígrados 3 y deje que se descongelen a temperatura ambiente. 4 Diseccione el tejido con bisturíes estériles y tijeras 5 para eliminar la tráquea y las vías respiratorias cartilaginosas, 6 luego acuñe el tejido en pedazos pequeños. 7 Lave el pañuelo tres veces 8 con agua ultrapura 9 que contenga 2% de penicilina y estreptomicina.

10 Sumerja la muestra de tejido picado 11 en una solución de yodo al 2% durante un minuto, 12 luego realice dos lavados consecutivos 13 en agua destilada estéril. 14 Transfiere los pedazos de tejido a un tubo de 50 mililitros 15 hasta la marca de 15 mililitros. 16 Llene el tubo hasta arriba con agua destilada 17 y congélelo en nitrógeno líquido durante dos minutos.

18 A continuación, transfiera inmediatamente el tubo a un vaso de precipitados 19 que contenga 37 grados centígrados de agua durante 10 minutos. 20 Después de cinco ciclos de congelación y descongelación, 21 incubar la muestra en 30 mililitros 22 de solución de DNasa durante una hora 23 a 37 grados centígrados con agitación constante. 24 Congelar las muestras de matriz extracelular descelularizada húmeda 25 a 80 grados centígrados durante 24 horas.

26 Transfiera las muestras congeladas a un liofilizador 27 y opere en modo de secado al vacío 28 durante tres o cuatro días hasta que se sequen por completo. 29 Después de la liofilización, 30 moler las muestras hasta obtener un polvo fino 31 en un aparato de molienda que contenga hielo seco. 32 Tratar los tejidos pulmonares con 1%Triton-X-100 33 durante tres días bajo rotación suave 34 a cuatro grados centígrados, 35 cambiando la solución cada 24 horas.

36 Incubar la muestra en la solución de DNasa 37 durante una hora a 37 grados centígrados con agitación constante. 38 Lavar el pañuelo con agua destilada 39 durante tres días bajo rodillo constante, 40 reponiendo el agua cada 24 horas. 41 Después del último lavado, realice la liofilización y la criomolienda 42 como se demostró anteriormente.

43 Digiera 15 miligramos por mililitro 44 muestras de matriz extracelular descelularizada en polvo 45 en una solución de pepsina de miligramo por mililitro 46 a temperatura ambiente bajo agitación constante durante 48 horas. 47 Mantenga el pH de la solución en dos para una digestión efectiva. 48 Centrifugar el tejido digerir a 5.000 g durante 10 minutos 49 y retirar el sobrenadante.