Para comenzar, coloque el medio celular Sf1Ep precalentado recién preparado y las células Sf1Ep descongeladas en un vial criogénico en una plataforma de trabajo. Agregue un mililitro de medio celular Sf1Ep al vial criogénico y mezcle suavemente. Transfiera la mezcla a un tubo de centrífuga cónico estéril de 15 mililitros que contenga cinco mililitros de medio celular Sf1Ep y mezcle suavemente.
Centrifugar la suspensión celular a 100 G durante siete minutos y desechar el sobrenadante antes de volver a suspender el pellet en 15 mililitros de medio celular Sf1Ep fresco. Transfiera la suspensión celular a un matraz de cultivo de tejidos T75 y colóquelo en una incubadora de cultivo de tejidos humidificada estándar durante una semana. Después de la incubación, aspire el medio del matraz y enjuague la capa de células con cinco mililitros de PBS estéril.
Después de aspirar el PBS, agregue 2,5 mililitros de tripsina-EDTA al matraz y selle la tapa. Incubar el matraz a 37 grados centígrados durante cinco minutos. Golpee suavemente el matraz para desalojar las células y observe bajo un microscopio invertido para confirmar la dispersión de las células.
Agregue cinco mililitros de medio de crecimiento Sf1Ep y mezcle el matraz con la tripsina-EDTA. Transfiera la suspensión celular a un tubo cónico y cuantifique las células usando un hemocitómetro o un contador de células automatizado. Para congelar las células Sf1Ep, gire las células a 100 G durante siete minutos y vuelva a suspender el pellet en medio Sf1Ep suplementado con DMSO al 10%.
Distribuya un mililitro de suspensión celular a cada vial criogénico y congele durante la noche a menos 70 a menos 80 grados Celsius.