Damos las gracias a S. Robertson Jinks y Heidenreich E. para proporcionar plásmidos y cepas de levadura, P. Pham y Goodman MF ayuda conel ensayo TLS. Este trabajo fue apoyado, en parte, por la Federación Americana para la Investigación del Envejecimiento de subvención y por el NIH AG20642, AG025135.

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No hay conflictos de interés declarado.

Líquido culturas envejecimiento en algún momento presentan el nuevo crecimiento / fenotipo jadeando 13, lo que complica el análisis CLS. Nuevo crecimiento se produce normalmente cuando más de 90-99% de la población ha perdido su viabilidad. Este fenotipo se asocia a menudo con aumento del estrés oxidativo y / o disminución de la protección de la célula. Por ejemplo, la frecuencia de este fenotipo es más del doble en las células que carecen de la superóxido dismutasa citosólica y reduce en gran medida en el de larga duración mutantes (por ejemplo, Sch9 Δ Δ o RAS2) o mutantes que sobreexpresan superóxido dismutasas 22. En la práctica, se define el nuevo crecimiento como un aumento de la viabilidad o la estabilización de la viabilidad de tres muestreos consecutivos en la fase de alta mortalidad durante el envejecimiento cronológico. Dependiente de la edad la frecuencia de las mutaciones del ADN varían mucho dependiendo de la cepa de antecedentes, la manipulación genética, las condiciones de cultivo, así como la regeneración jadeando / y la supervivencia muy baja. Pre-experimentos deben llevarse a cabo en momentos tales como la supervivencia media y la máxima densidad de la galvanización de varios ensayos de mutación para determinar el rango de frecuencia de mutación antes de su análisis a gran escala performingthe vida. La cepa de tipo salvaje siempre se debe incluir en un período de vida o estudio de la frecuencia de mutación en paralelo a cualquier tratamiento o mutantes genéticos, de tal manera que entre experimentar variaciones pueden ser explicadas. Múltiples réplicas biológicos deben ser incluidos en el estudio, y, tanto líquidos como in situ la viabilidad / mutación de los ensayos deben realizarse para corroborar los resultados. En lugar de centrarse en un tipo específico de mutación del ADN, el perfil de la inestabilidad genómica dependiente de la edad mediante ensayos múltiples en combinación, pueden arrojar luz sobre el daño del ADN específica y daños en el ADN de reparación del sistema (s) que contribuyen a la inestabilidad genómica dependiente de la edad. Por ejemplo, un aumento significativo en bruto reordenamientos cromosómicos (GCR), en comparación con los de otras mutaciones en el ADN, se observa en la levadura de tipo salvaje que sugiere una ruptura elevationof doble cadena y / o deterioro de una de extremos no homólogos de unión (NHEJ) en la levadura envejecimiento cronológico (Tabla 2). El espectro de mutación can1 (secuenciación del gen CAN1) obtenidos en el envejecimiento de la levadura de tipo salvaje sugiere un incremento en el daño oxidativo durante el envejecimiento cronológico y propenso a errores de reparación del ADN, mientras que, en la larga vida Sch9 mutantes Δ, daños en el ADN menos oxidativo y propenso a errores muy reducida síntesis translesión se observaron 20. Los métodos descritos aquí pueden ser aún más gastada de estudio dependiente de la edad inestabilidad genómica. Por ejemplo, las células pasivas, y no en reposo, puede ser aislado de la levadura de la fase estacionaria culturas utilizando el método de gradiente de densidad descrita por Allen et al. 23. Combinado con los ensayos de mutación descrita aquí, nos han informado de que una gran parte de los dependientes de la edad se debe a mutaciones en células en reposo, en lugar de la división, las células dañadas o apoptosis 20,24.

studying age-dependent genomic instability using the s. cerevisiae chronological lifespan model

Los estudios que utilizan el modelo de Saccharomyces cerevisiae envejecimiento han descubierto vías vida útil reguladoras que están parcialmente conservadas en eucariotas superiores 1-2. La simplicidad y el poder del modelo de levadura de envejecimiento también se pueden explorar para estudiar el daño del ADN y el mantenimiento del genoma, así como sus contribuciones a las enfermedades durante el envejecimiento. Aquí se describe un sistema para estudiar la edad que dependen de mutaciones en el ADN, incluyendo la sustitución de la base, las mutaciones de cambio de marco, bruto reordenamientos cromosómicos, y homólogas / recombinación homeologous, así como la actividad de reparación del ADN nuclear mediante la combinación de la levadura de esperanza de vida cronológica con el ADN sencillo daños y los ensayos de mutación. Los métodos descritos aquí deben facilitar la identificación de genes / vías que regulan la inestabilidad genómica y los mecanismos que subyacen dependiente de la edad mutaciones en el ADN y el cáncer en mamíferos.

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Studying Age-dependent Genomic Instability using the S. cerevisiae Chronological Lifespan Model

Aquí se describe un conjunto de ensayos de mutación del ADN que se pueden combinar con el modelo cronológico levadura vida a estudiar los genes / vías que regulan o contribuir a la inestabilidad del ADN genómico durante el envejecimiento.

El estudio de dependientes de la edad de Inestabilidad Genómica con el S. cerevisiae Cronológica Modelo Longevidad

Studies using the Saccharomyces cerevisiae aging model have uncovered life span regulatory pathways that are partially conserved in higher eukaryotes1-2. ...

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Studying Age-dependent Genomic Instability using the S. cerevisiae Chronological Lifespan Model

15.5K vistas.  University of Southern California, Los Angeles. Aquí se describe un conjunto de ensayos de mutación del ADN que se pueden combinar con el modelo cronológico levadura vida a estudiar los genes / vías que regulan o contribuir a la inestabilidad del ADN genómico durante el envejecimiento.