Los autores desean agradecer a John Grazul (Cornell University), Marziali Andre (de la Universidad de British Columbia en Vancouver) y Vincent Tabard-Cossa (de la Universidad de Ottawa) por su asesoramiento. Este trabajo está financiado en parte por subvenciones de los EE.UU. National Science Foundation (DMR-0706517 y 1006332-DMR) y los Institutos Nacionales de Salud (R01-GM088403). La perforación nanopore se realizó en el Servicio de Microscopía Electrónica del Centro de Cornell para la Investigación de Materiales (CCAM), con el apoyo de la Fundación Nacional de Ciencias - Ciencias de los Materiales de Investigación y Centros de Ingeniería (MRSEC) programa (DMR 0520404). La preparación de las membranas de nitruro de silicio se llevó a cabo en el Centro de Cornell nanoescala, un miembro de la Red de Nanotecnología Nacional de Infraestructura, que es apoyada por la National Science Foundation (Grant ECS-0335765).

1. Fabricación de estado sólido nanoporos en las membranas de nitruro de silicio <ol><li> Llevar / la FEI Tecnai F20 S TEM a un voltaje de aceleración de 200 kV. Si se utiliza un diferente S / TEM, la tensión de aceleración debe ser mayor o igual a 200 kV 9 </li><li> Carga de 20 nm de espesor de nitruro de silicio SPI cuadrícula de la ventana en el soporte de muestras TEM y limpio, con plasma de oxígeno durante 30 segundos para eliminar los contaminantes de la titular. </li><li> Cargar la muestra en el S / TEM y permitir que el vacío de la bomba hacia abajo. Una vez que el S / TEM ha bombeado al vacío, encontrar la ventana de nitruro en el modo TEM de campo claro mediante la búsqueda de un cuadrado luminoso en el Ronchigram. Asegúrese de que el TEM se alinea correctamente, alinear y enfocar la muestra. </li><li> El modificador / S en modo TEM STEM. Utilice el HAADF (o equivalente) detector de la imagen de la muestra y asegúrese de que está correctamente alineado. </li><li> Establecer el monocromador a un valor bajo. Un valor más bajo del monocromador permite una mayor monedast de electrones disponibles para la perforación. Si la S / TEM no tiene un monocromador, ignore este paso. </li><li> Seleccione un tamaño de punto apropiado para la perforación de la nanopore. Esto se corresponde con el diámetro de la sonda electrónica. Una sonda de 3 nm funciona bien para la perforación de 5 poros nm de diámetro. Una investigación más grandes (5 mn) a perforar con mayor rapidez y crear un poro más grande. Una sonda más pequeña (1 nm) tomará más tiempo para perforar y crear un poro más pequeño. </li><li> Ajustar las alineaciones de STEM, si es necesario. </li><li> El enfoque de la membrana de nitruro y llevarlo a un aumento de x1.3M. Enfoque de precisión debe ser realizado por el control de la Ronchigram. </li><li> Si hay algún movimiento de la muestra, y luego esperar a que la muestra se estabilice. Esto puede tomar hasta una hora. En blanco el haz de electrones, mientras que espera a fin de no dañar el nitruro. </li><li> Coloque la sonda de electrones sobre la muestra y comenzar a perforar. </li><li> Revise periódicamente la muestra mediante el escaneo con el detector de HAADF, tanto para asegurarse de que la nanopore se drilled (que se verá como una mancha oscura) y para comprobar que no hay movimiento de la muestra. Si la muestra se desplaza un poco, ajustar la posición de la sonda electrónica para el nanopore. </li><li> Vea el Ronchigram para identificar cuando el poro se ha formado. Cuando en el enfoque, la película de nitruro tiene una apariencia brillante. Esto va a desaparecer cuando se forma el nanopore. Poner el Ronchigram ligeramente fuera de foco permite ver una franja de Fresnel asociada con el nanopore. </li><li> Tomar una imagen de la nanopore con la HAADF. </li><li> Hacer un perfil de intensidad de la imagen nanopore. El diámetro de la nanopore puede ser estimado por la región más oscura del perfil. </li><li> Ampliación de la nanopore puede realizar moviendo la sonda de electrones a lo largo de los bordes de los poros. </li><li> Una vez que el nanopore es del diámetro deseado, poner la S / TEM en modo TEM. </li><li> Llevar el monocromador a su establecimiento de normas y la imagen de la nanopore utilizando TEM de campo claro para confirmar el tamaño <strong&gt; (Fig. 1). </li></ol> 2. Humectación de la nanopore de estado sólido <ol><li> De gas-agua desionizada con 1 M KCl, 10 mM fosfato de potasio, pH 7,4. Esto puede hacerse poniendo las soluciones al vacío y colocarlos en un baño de ultrasonido durante 20 minutos. </li><li> Coloque el nanopore chip que contiene nitruro de silicio en un vaso de 10 ml Pyrex. Tenga cuidado de no romper la ventana de nitruro ya que es muy delicado. Colocar el vaso en una placa bajo una campana extractora y se puso a 100 ° C. </li><li> Limpie el chip nanopore con una solución de pirañas con mucho cuidado. Primero se debe agregar 3 ml de ácido sulfúrico en el recipiente con una pipeta de vidrio. A continuación, añadir con cuidado 1 ml de peróxido de hidrógeno en el ácido sulfúrico para hacer una solución de pirañas 14. Por favor, tomar todas las precauciones. </li><li> Permita que el chip nanopore en remojo en una solución de pirañas durante 10 minutos. </li><li> Eliminar la solución de pirañas del vaso con una pipeta de vidrio. Colóquelo en un recipiente de almacenamiento adecuado. </li><li> Fill el vaso con el de-cámaras de gas, agua desionizada con una pipeta de vidrio limpio. Vaso de agua vacías y repetir por lo menos 5 veces. </li><li> Retire el chip nanopore con pinzas limpia y seca por succión ligera </li><li> Inmediatamente, el sello del chip nanopore en la cámara (Fig. 2a, 2b). El chip puede ser asegurado en la cámara por las juntas tóricas o sellador de silicona. </li><li> Llenar la cámara con una solución de KCl </li><li> Conectar los electrodos de Ag / AgCl a la cámara (Figura 2b). Electrodos puede ser hecha empapando alambre de plata en la lejía durante la noche. </li><li> Aplicar un potencial de membrana a través de los electrodos y el seguimiento de la respuesta actual con un axón 200 mil millones de patch-clamp amplificador en el modo de voltaje-clamp. </li><li> Construir una curva I / V (corriente-voltaje) a partir de las mediciones. La curva I / V debe ser muy lineal cuando se utiliza KCl 1 M (Fig. 3). La conductancia de la nanopore debe corresponder a su diámetro. Si el nanopore no muestra unalineales de E / V de curva, la conductividad es muy baja, o la corriente abierta de la nanopore no es estable (Fig. 4a), que significa que el nanopore no está bien mojado y lavado de pirañas se debe repetir. </li></ol> 3. Monitoreo adsorción de proteínas <ol><li> Es de vital importancia para llevar a cabo experimentos de control con una sola membrana o matriz-nanopore paralelo de nanoporos (ver abajo) para controlar la corriente de las condiciones de amortiguación que carecen de la proteína de la muestra. Le recomendamos los siguientes dos pasos: (i) el uso de una alta pureza a nivel de buffer (pureza&gt; 99,9%, cromatografía de grado), y (ii) el uso de un tampón, cuya interacción con la nanopore de estado sólido no producir un solo canal de eventos. Además, se recomienda la obtención de una muestra de proteína de alta pureza, utilizando los procedimientos estándar de la química de proteínas. La pureza de la muestra de la proteína debe ser revisado por dodecil sulfato-poliacrilamida análisis en gel (SDS-PAGE) y ma de alta resoluciónss espectrometría de 15. </li><li> Añadir una muestra purificada de la proteína a estudiar en el baño de tierra de la cámara. Dé tiempo para que la muestra difusa por todo el baño. Las concentraciones típicas de proteína que se puede medir en decenas de nM a la gama M 7,15-21. </li><li> Aplicar un sesgo potencial transmembrana voltaje con polaridad opuesta a la de la carga total de la proteína en estudio. Por ejemplo, BSA cuenta con un eficaz carga neta negativa a pH 7,4, y por lo tanto, una tensión de polarización positiva se debe aplicar. El voltaje aplicado crea gradiente de potencial en el interior nanopore y las proteínas de las cargas opuestas se verán impulsadas por fuerzas opuestas. Sólo polaridades de voltaje que conducen a las proteínas en el nanopore creará señales medibles. </li><li> Un potencial aplicado de magnitud de 200 mV debe ser lo suficientemente grande como para observar la mayoría de los analitos de proteínas. Los eventos aparecen como desviaciones transitorias de la actual línea de base (Fig. 4B).Si no hay señal que se observa, el aumento de la concentración de la proteína en la cámara. Voltajes más altos mejorar la relación señal a ruido. Nanoporos nitruro puede soportar varios voltios. </li><li> Adsorciones proteína aparecerá como de larga duración cambios en la línea de base actual de la nanopore (Fig. 4C). </li></ol> 4. Posibilidades de funcionalización de los nanoporos Existen varios métodos para la aplicación de los grupos funcionales de nitruro de silicio 22,23. La mayoría de las películas de nitruro de una fina capa de óxido en el exterior y la exposición al ozono puede crear una capa de óxido adicional, si es necesario. Organosilanos se pueden utilizar diferentes y la auto-ensamblado en tales capas. De particular interés es aminosilano, que auto-ensambla y se puede modificar aún más (es decir, ácido, ácidos y aldehídos), lo que permite la inspección de una amplia gama de superficies orgánicas. Después de un nanopore se ha lavado con pirañas y se asegura en el Chamber, aminas se pueden añadir directamente a la cámara de baño con un electrolito de soporte de 0,5 M TBACl (tetrabutilamonio) y MeOH anhidro (metanol) se usa como solvente. La formación de monocapa se puede controlar mediante la aplicación de un sesgo de voltaje 400 mV y la medición de los índices actuales de 23. 5. Determinación de la aparente de primer orden la velocidad de reacción constante y la constante de Langmuir de adsorción utilizando matrices en paralelo nanopore 5.1 El aparente de primer orden las constantes de velocidad de reacción para la absorción y desorción Hacemos hincapié en que el aspecto positivo de esta metodología es su capacidad de observar adsorciones individuales a nivel de moléculas individuales. Las mediciones de una sola molécula de la adsorción de proteínas sobre una superficie inorgánicos se pueden ampliar mediante el empleo de arrays paralelos de estado sólido nanoporos. La matriz paralela de nanoporos es necesario debido a la necesidad de muchos poros ensayo para obtener estadísticas fiabless. Con este fin, el uso de una amplia nanopore permitiera el seguimiento de adsorciones individuales, así como la medición de múltiples eventos para su posterior análisis. Una serie de nanoporos en el nitruro de silicio puede ser formado por el protocolo anterior, simplemente mediante la perforación de orificios múltiples en la muestra. Cada nanopore deben ser de tamaño similar. Las matrices de nanoporos de 6x6 o 7x7 debe ser adecuada. Tras la adición de analito de proteína en la cámara, la corriente se deteriorará de manera exponencial con la siguiente expresión: I t = ∞ I - (I ∞ - I 0) exp (-k t &#39;) Aquí, t, denota la corriente en un tiempo t experimental. I 0 es el paso inicial corriente a través de la matriz nanopore. ∞ I indica la intensidad en el nivel de saturación (es decir, infinito). K &#39;es la aparente de primer orden la velocidad de reacción constante, lo que puede determinarse a partir ªe ajuste de la curva experimental. A mayor k &#39;se puede interpretar como una mayor velocidad de absorción. La relación que ∞ / I 0, también llamado la saturación normalizado actual, es un número sin dimensiones entre 0 y 1. Este parámetro es una medida de la ocupación por los analitos de proteínas adsorbidas. Por lo tanto, cada una de las condiciones experimentales distintas debe estar asociado con dos parámetros de salida específica que ∞ / I 0 y k &#39;. Cabe señalar que la aparente de primer orden constantes de velocidad de absorción y las corrientes normalizadas son impactados por el tiempo efectivo dedicado por las proteínas dentro de los nanoporos. Este tiempo depende de la concentración de los analitos de proteínas en fase acuosa a granel 24. Por lo tanto, una corrección adicional de estos números debe aplicarse en base al tiempo efectivo dedicado por las proteínas en el interior nanopore. Le sugerimos medir la frecuencia de las FASt (translocación) eventos y multiplicándolo por el tiempo medio de permanencia de tales eventos. Esto le dará el tiempo promedio de proteínas pasado en el interior nanopore por unidad de tiempo. La constante de velocidad de desorción se puede determinar mediante una matriz paralela de nanoporos también. Tan pronto como el nivel actual alcanza la saturación (I ∞), la tensión debe ser revertida, por lo que no más proteínas se encuentran atrapados en los nanoporos. Desorción de las proteínas individuales serán acompañados por la alteración de la corriente registró hacia valores mayores. La constante de velocidad se extrae a continuación de la subida del nivel actual. 5.2 La constante de Langmuir de adsorción La absorción de los analitos de proteínas en las superficies inorgánicas de los nanoporos depende de la concentración de proteínas en fase acuosa. Este fenómeno ya se ha observado a nivel de moléculas individuales 13. Si θ representan<html> s la corriente de saturación normalizada (I ∞ / I 0), entonces una típica ecuación de Langmuir isoterma está dada por la siguiente expresión: <img alt="Figura 5.2" src="/files/ftp_upload/3560/3560fig5_2.jpg" /> donde C es la concentración de proteínas en la fase acuosa. α es la constante de adsorción de Langmuir. Esto aumenta la constante con un aumento en la energía de enlace de adsorción y con una disminución de la temperatura. La recogida de los puntos de datos θ se emplean mediciones con matrices paralelas llevadas a cabo en las concentraciones de proteínas diferentes en la fase acuosa. Los datos deben ser analizados en combinación con otras técnicas para verificar la magnitud de la adsorción de Langmuir equipado constante. Además, todo el atomista simulaciones de dinámica molecular 25,26 también se puede utilizar para ayudar a las interpretaciones de los datos experimentales obtenidos. título &quot;&gt; 6. Resultados Representante Los resultados típicos de estado sólido nanoporos será el siguiente. La corriente de poro abierto debe ser muy estable, como se ve en la fig. 4a. El I / V características de la nanopore debe ser muy lineal en KCl 1 M, 10 fosfato de potasio, pH 7,4, como se ve en la fig. 2. La pendiente de un ajuste lineal a la curva I / V proporcionará la conductancia unitaria de la nanopore. La conductancia tiene una relación directa con el diámetro nanopore y debe coincidir con la ecuación: <img alt="Figura ecuación" src="/files/ftp_upload/3560/3560figeqn.jpg" /> , Donde G es la conductancia de la nanopore, d es su diámetro, l es su longitud, y σ es la conductividad de la solución en la cámara 14. Este valor debe coincidir con el plazo de 30%. Si es demasiado pequeño, el poro es probable que no mojada. Con la adición de proteínas, eventos rápida debe producirse, como se ve en la fig. 4b. Protein adsorción es una caída de corriente de larga duración como se muestra en la fig. 4c. Algunas proteínas son muy lábiles y se someten a una transformación estructural en el interior de los poros. En este caso, la caída de tensión de larga duración estará acompañado por las rápidas fluctuaciones. <img alt="Figura 1" src="/files/ftp_upload/3560/3560fig1.jpg" /> Figura 1. De estado sólido nanopore fabricado con un F20 Tecnai S / TEM. El poro se perforó en modo STEM a un diámetro de 20 nm. La imagen fue tomada en el modo TEM de campo claro. Nitruro fue de 30 nm de espesor. <img alt="Figura 2" src="/files/ftp_upload/3560/3560fig2.jpg" /> Figura 2. Cámara utilizada para alojar un único estado sólido nanopore en las mediciones de resistencia de pulso. Una Cámara) y un chip de silicio con ventana de nitruro independiente (rejilla TEM). El nanopore es perforado en el nitruro de antes de la carga. Red O-rings se utilizan para formar una buena seal sobre el chip, que separa dos baños de solución iónica. B) Representación esquemática de la cámara que muestra la ubicación de los baños de solución y los electrodos con respecto a la nanopore. <img alt="Figura 3" src="/files/ftp_upload/3560/3560fig3.jpg" /> Figura 3. Típicos de E / V rastros de estado sólido nanoporos de diferentes diámetros. Trazas de un solo canal eléctrico fueron tomadas en 1 M KCl, 20 mM Tris, pH 8,5. Nanoporos fueron perforados en 30 de nitruro de silicio nm de espesor. Nota de nitruro de espesor afectará la conductancia unitaria de la nanopore. <img alt="Figura 4" src="/files/ftp_upload/3560/3560fig4.jpg" /> Figura 4. Medida de un solo canal trazas actuales y la detección de la adsorción de proteínas. A) Un rastro de un solo canal eléctrico que indica la corriente abierta de un diámetro de 10 nm nanopore. B) las desviaciones actuales representan la partición de albúmina de suero bovino (BSA) en el interior de la nanopore. C) La adsorción de BSA sobre la superficie de nitruro de silicio. Todos los restos son de la misma nanopore en KCl 1 M, fosfato de potasio 10 mM, pH 7,4. El potencial de membrana se aplicó 40 mV y BSA se añadió al baño de la cámara conectada a tierra en una concentración de 120 nM.

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K., Franzen, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Probing+BSA+binding+to+citrate-coated+gold+nanoparticles+and+surfaces.">Probing BSA binding to citrate-coated gold nanoparticles and surfaces.</a> Langmuir. 21, 9303-9307 (2005).</li><li>Schon, P., Gorlich, M., Coenen, M. J., Heus, H. A., Speller, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nonspecific+protein+adsorption+at+the+single+molecule+level+studied+by+atomic+force+microscopy.">Nonspecific protein adsorption at the single molecule level studied by atomic force microscopy.</a> Langmuir. 23, 9921-9923 (2007).</li><li>Rabe, M., Verdes, D., Zimmermann, J., Seeger, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Surface+organization+and+cooperativity+during+nonspecific+protein+adsorption+events.">Surface organization and cooperativity during nonspecific protein adsorption events.</a> J. Phys. Chem. B. 112, 13971-13980 (2008).</li><li>Rabe, M., Verdes, D., Rankl, M., Artus, G. R., Seeger, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+comprehensive+study+of+concepts+and+phenomena+of+the+nonspecific+adsorption+of+beta-lactoglobulin.">A comprehensive study of concepts and phenomena of the nonspecific adsorption of beta-lactoglobulin.</a> Chemphyschem. 8, 862-872 (2007).</li><li>Micic, M., Chen, A., Leblanc, R. M., Moy, V. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Scanning+Electron+Microscopy+Studies+of+Protein-Functionalized+Atomic+Force+Microscopy+Cantilever+Tips.">Scanning Electron Microscopy Studies of Protein-Functionalized Atomic Force Microscopy Cantilever Tips.</a> Scanning. 21, 394-397 (1999).</li><li>Grant, A. W., Hu, Q. H., Kasemo, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transmission+electron+microscopy+'windows'+for+nanofabricated+structures.">Transmission electron microscopy 'windows' for nanofabricated structures.</a> Nanotechnology. 15, 1175-1181 (2004).</li><li>Giannoulis, C. S., Desai, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+proteins+and+fibroblasts+on+thin+inorganic+films.">Characterization of proteins and fibroblasts on thin inorganic films.</a> J. Mater. Sci: Mater. Med. 13, 75-80 (2002).</li><li>Gustavsson, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Surface+modifications+of+silicon+nitride+for+cellular+biosensors+applications.">Surface modifications of silicon nitride for cellular biosensors applications.</a> J. Mater. Sci: Mater. Med. 19, 1839-1850 (2008).</li><li>Shirshov, Y. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+the+response+of+planar+polarization+interferometer+to+molecular+layer+formation:+fibrinogen+adsorption+on+silicon+nitride+surface.">Analysis of the response of planar polarization interferometer to molecular layer formation: fibrinogen adsorption on silicon nitride surface.</a> Biosens. Bioelectron. 16, 381-390 (2001).</li><li>Chen, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Atomic+layer+deposition+to+fine-tune+the+surface+properties+and+diamters+of+fabricated+nanopores.">Atomic layer deposition to fine-tune the surface properties and diamters of fabricated nanopores.</a> Nano. Lett. 4, 1333-1337 (2004).</li><li>Siwy, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protein+biosensors+based+on+biofunctionalized+conical+gold+nanotubes.">Protein biosensors based on biofunctionalized conical gold nanotubes.</a> J. Am. Chem. Soc. 127, 5000-5001 (2005).</li><li>Ding, S., Gao, C., Gu, L. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Capturing+Single+Molecules+of+Immunoglobulin+and+Ricin+with+an+Aptamer-Encoded+Glass+Nanopore.">Capturing Single Molecules of Immunoglobulin and Ricin with an Aptamer-Encoded Glass Nanopore.</a> Anal. Chem. , (2009).</li><li>Kim, M. -. J., Wanunu, M., Bell, C. D., Meller, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+Fabrication+of+Uniform+Size+Nanopores+and+Nanopore+Arrays+for+Parallel+DNA+Analysis.">Rapid Fabrication of Uniform Size Nanopores and Nanopore Arrays for Parallel DNA Analysis.</a> Adv. Mater. 18, 3149-3153 (2006).</li><li>Bezrukov, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ion+channels+as+molecular+Coulter+counters+to+probe+metabolite+transport.">Ion channels as molecular Coulter counters to probe metabolite transport.</a> J. Membr. Biol. 174, 1-13 (2000).</li></ol>

No tenemos nada que revelar.

Espontánea de adsorción de las proteínas en estado sólido de superficies 27-29 es de fundamental importancia en una serie de áreas, como las aplicaciones biochip y el diseño de una nueva clase de biomateriales híbridos funcionales. Estudios previos han demostrado que las proteínas adsorbidas a las superficies de estado sólido no muestran la movilidad lateral o tasas significativas de desorción, y por lo tanto la adsorción de proteínas generalmente se considera un proceso irreversible y no específ...

<table border="1"><tr><td> Nombre del reactivo </td><td> Empresa </td><td> Número de catálogo </td><td> Comentarios </td></tr><tr><td> Tecnai F20 S / TEM </td><td> FEI </td><td></td><td> S / TEM requiere fuente de voltaje de aceleración ≥ 200kV y de emisión de campo. </td></tr><tr><td> 20 nm de espesor de nitruro de silicio para TEM membrana de la ventana </td><td> SPI </td><td> 4163SN-BA </td><td></td></tr><tr><td> Axón Axopatch 200 mil millones de patch-clamp amplificador </td><td> Molecular Devices </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Axón Digidata 1440A </td><td> Molecular Devices </td><td></td><td></td></tr><tr><td> pCLAMP 10 software </td><td> Molecular Devices </td><td></td><td> Electrofisiología de Adquisición de Datos y Análisis de Software </td></tr><tr><td> Ácido sulfúrico </td><td> Fclasificador Científico </td><td> A300 </td><td></td></tr><tr><td> peróxido de hidrógeno </td><td> Fisher Scientific </td><td> H325 </td><td></td></tr><tr><td> silicona las juntas tóricas </td><td> McMaster-Carr </td><td> 003 S70 </td><td> Alternativamente, puede utilizar PDMS </td></tr><tr><td> alambre de plata </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> 348759 </td><td> Para los electrodos </td></tr><tr><td> SPC Tecnología, D-sub de contacto, pin </td><td> Newark </td><td> 9K4978 </td><td> Para los electrodos </td></tr><tr><td> cloruro de potasio </td><td> Sigma </td><td> P9541 </td><td></td></tr><tr><td> fosfato de potasio dibásico </td><td> Sigma </td><td> P2222 </td><td></td></tr><tr><td> fosfato de potasio monobásico </td><td> Sigma </td><td> P5379 </td><td></td></tr><tr><td> PDMS </td><td> Dow Corning </td><td></td><td> Sylgar 184 Elastomer conjunto. Para la toma de la cámara. </td></tr><tr><td> Kwik-Cast sellador </td><td> Mundial de Instrumentos de Precisión </td><td> KWIK-CAST </td><td> Rápida actuación de silicona sellante </td></tr><tr><td> plato caliente </td><td> Fisher Scientific </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Jaula de Faraday </td><td></td><td></td><td></td></tr></table>

monitoring protein adsorption with solid-state nanopores

De estado sólido nanoporos se han utilizado para realizar mediciones en el nivel de moléculas individuales para examinar la estructura local y la flexibilidad de los ácidos nucleicos 1-6, el despliegue de las proteínas de 7, y la afinidad de unión de diferentes ligandos 8. Mediante el acoplamiento de estos nanoporos para la técnica de resistencia de pulso 9-12, estas mediciones se puede hacer en una amplia variedad de condiciones y sin necesidad de etiquetado 3. En la técnica de resistencia de pulso, una solución de sal iónica se presenta en ambos lados de la nanopore. Por lo tanto, los iones son expulsados ​​de un lado de la cámara a la otra por un potencial de membrana aplicada, dando lugar a una corriente constante. La partición de un analito en el nanopore causa una deflexión bien definidas en esta corriente, que pueden ser analizados para extraer una sola molécula de la información. Usando esta técnica, la adsorción de proteínas individuales a las paredes nanopore puede ser monitoreado en una amplia gama decondiciones 13. Adsorción de proteínas está creciendo en importancia, ya que como dispositivos de microfluidos disminuye de tamaño, la interacción de estos sistemas con proteínas individuales se convierte en una preocupación. Este protocolo describe un ensayo rápido para la proteína de unión a las películas de nitruro, que puede extenderse fácilmente a otras películas delgadas susceptibles a la perforación nanopore, ni a las superficies de nitruro de funcionalizado. Una gran variedad de proteínas puede ser explorado en una amplia gama de soluciones y las condiciones de desnaturalización. Además, este protocolo podrá ser utilizado para explorar problemas más básicos de uso de la espectroscopia nanopore.

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Monitoring Protein Adsorption with Solid-state Nanopores

Un método de utilización de estado sólido nanoporos para controlar la adsorción inespecífica de proteínas en una superficie inorgánica se describe. El método emplea el principio de resistencia de pulso, lo que permite la absorción que se probaron en tiempo real y en el nivel de moléculas individuales. Debido a que el proceso de adsorción sola proteína está lejos del equilibrio, se propone el empleo de arrays paralelos de nanoporos sintéticos, lo que para la determinación cuantitativa de la velocidad de reacción aparente de primer orden constante de adsorción de proteínas, así como la constante de Langmuir de adsorción.

Monitoreo adsorción de proteínas de estado sólido Nanoporos

Solid-state nanopores have been used to perform measurements at the single-molecule level to examine the local structure and flexibility of nucleic acids ...

monitoring-protein-adsorption-with-solid-state-nanopores

Research

JoVE Journal

Bioengineering

13.5K vistas.  Syracuse University. Un método de utilización de estado sólido nanoporos para controlar la adsorción inespecífica de proteínas en una superficie inorgánica se describe. El método emplea el principio de resistencia de pulso, lo que permite la absorción que se probaron en tiempo real y en el nivel de moléculas individuales. Debido a que el proceso de adsorción sola proteína está lejos del equilibrio, se propone el empleo de arrays paralelos de nanoporos sintéticos, lo que para la ...

Video: Monitoring Protein Adsorption with Solid-state Nanopores

Registered Bioimaging of Nanomaterials for Diagnostic and Therapeutic Monitoring

Nanomedications can be carried by blood borne monocyte-macrophages into the reticuloendothelial system (RES; spleen, liver, lymph nodes) and to end organs. The latter include the lung, RES, and brain and are operative during human immunodeficiency virus type one (HIV-1) infection. Macrophage entry into tissues is notable in areas of active HIV-1 replication and sites of inflammation. In order to assess the potential of macrophages as nanocarriers, superparamagnetic iron-oxide and/or drug laden particles coated with surfactants were parenterally injected into HIV-1 encephalitic mice. This was done to quantitatively assess particle and drug biodistribution. Magnetic resonance imaging (MRI) test results were validated by histological coregistration and enhanced image processing. End organ disease as typified by altered brain histology were assessed by MRI. The demonstration of robust migration of nanoformulations into areas of focal encephalitis provides '"proof of concept" for the use of advanced bioimaging techniques to monitor macrophage migration. Importantly, histopathological aberrations in brain correlate with bioimaging parameters making the general utility of MRI in studies of cell distribution in disease feasible. We posit that using such methods can provide a real time index of disease burden and therapeutic efficacy with translational potential to humans.

Bioimaging methods used to assess cell biodistribution of nanoparticles are applicable for therapeutic and diagnostic monitoring of nanoformulated compounds. The methods described herein are sensitive and specific when assessed by histological coregistration. The methodologies provide a translational pathway from rodent to human applications.

Bioimagen registradas de Nanomateriales para el Monitoreo de Diagnóstico y Terapéutica

Nanomedications can be carried by blood borne monocyte-macrophages into the reticuloendothelial system (RES; spleen, liver, lymph nodes) and to end ...

Investigación

Bioingeniería

Fluorescence detection methods for microfluidic droplet platforms

The development of microfluidic platforms for performing chemistry and biology has in large part been driven by a range of potential benefits that accompany system miniaturisation. Advantages include the ability to efficiently process nano- to femoto- liter volumes of sample, facile integration of functional components, an intrinsic predisposition towards large-scale multiplexing, enhanced analytical throughput, improved control and reduced instrumental footprints.1
In recent years much interest has focussed on the development of droplet-based (or segmented flow) microfluidic systems and their potential as platforms in high-throughput experimentation.2-4 Here water-in-oil emulsions are made to spontaneously form in microfluidic channels as a result of capillary instabilities between the two immiscible phases. Importantly, microdroplets of precisely defined volumes and compositions can be generated at frequencies of several kHz. Furthermore, by encapsulating reagents of interest within isolated compartments separated by a continuous immiscible phase, both sample cross-talk and dispersion (diffusion- and Taylor-based) can be eliminated, which leads to minimal cross-contamination and the ability to time analytical processes with great accuracy. Additionally, since there is no contact between the contents of the droplets and the channel walls (which are wetted by the continuous phase) absorption and loss of reagents on the channel walls is prevented.
Once droplets of this kind have been generated and processed, it is necessary to extract the required analytical information. In this respect the detection method of choice should be rapid, provide high-sensitivity and low limits of detection, be applicable to a range of molecular species, be non-destructive and be able to be integrated with microfluidic devices in a facile manner. To address this need we have developed a suite of experimental tools and protocols that enable the extraction of large amounts of photophysical information from small-volume environments, and are applicable to the analysis of a wide range of physical, chemical and biological parameters. Herein two examples of these methods are presented and applied to the detection of single cells and the mapping of mixing processes inside picoliter-volume droplets. We report the entire experimental process including microfluidic chip fabrication, the optical setup and the process of droplet generation and detection.

Droplet-based microfluidic platforms are promising candidates for high throughput experimentation since they are able to generate picoliter, self-compartmentalized vessels inexpensively at kHz rates. Through integration with fast, sensitive and high resolution fluorescence spectroscopic methods, the large amounts of information generated within these systems can be efficiently extracted, harnessed and utilized.

Métodos de detección de fluorescencia para las plataformas de las gotas de microfluidos

The development of microfluidic platforms for performing chemistry and biology has in large part been driven by a range of potential benefits that ...

Mass Cytometry: Protocol for Daily Tuning and Running Cell Samples on a CyTOF Mass Cytometer

In recent years, the rapid analysis of single cells has commonly been performed using flow cytometry and fluorescently-labeled antibodies. However, the issue of spectral overlap of fluorophore emissions has limited the number of simultaneous probes. In contrast, the new CyTOF mass cytometer by DVS Sciences couples a liquid single-cell introduction system to an ICP-MS.1 Rather than fluorophores, chelating polymers containing highly-enriched metal isotopes are coupled to antibodies or other specific probes.2-5 Because of the metal purity and mass resolution of the mass cytometer, there is no "spectral overlap" from neighboring isotopes, and therefore no need for compensation matrices. Additionally, due to the use of lanthanide metals, there is no biological background and therefore no equivalent of autofluorescence. With a mass window spanning atomic mass 103-203, theoretically up to 100 labels could be distinguished simultaneously. Currently, more than 35 channels are available using the chelating reagents available from DVS Sciences, allowing unprecedented dissection of the immunological profile of samples.6-7
Disadvantages to mass cytometry include the strict requirement for a separate metal isotope per probe (no equivalent of forward or side scatter), and the fact that it is a destructive technique (no possibility of sorting recovery). The current configuration of the mass cytometer also has a cell transmission rate of only ~25%, thus requiring a higher input number of cells.
Optimal daily performance of the mass cytometer requires several steps. The basic goal of the optimization is to maximize the measured signal intensity of the desired metal isotopes (M) while minimizing the formation of oxides (M+16) that will decrease the M signal intensity and interfere with any desired signal at M+16. The first step is to warm up the machine so a hot, stable ICP plasma has been established. Second, the settings for current and make-up gas flow rate must be optimized on a daily basis. During sample collection, the maximum cell event rate is limited by detector efficiency and processing speed to 1000 cells/sec. However, depending on the sample quality, a slower cell event rate (300-500 cells/sec) is usually desirable to allow better resolution between cells events and thus maximize intact singlets over doublets and debris. Finally, adequate cleaning of the machine at the end of the day helps minimize background signal due to free metal.

The steps necessary for daily tuning and optimization of the performance of a CyTOF mass cytometer are described. Comments on optimal sample preparation and flow rate are discussed

Citometría de masas: Protocolo para la afinación y servicio diario muestras de células en un citómetro de masas CyTOF

In recent years, the rapid analysis of single cells has commonly been performed using flow cytometry and fluorescently-labeled antibodies. However, the ...

Multi-analyte Biochip (MAB) Based on All-solid-state Ion-selective Electrodes (ASSISE) for Physiological Research

Lab-on-a-chip (LOC) applications in environmental, biomedical, agricultural, biological, and spaceflight research require an ion-selective electrode (ISE) that can withstand prolonged storage in complex biological media 1-4. An all-solid-state ion-selective-electrode (ASSISE) is especially attractive for the aforementioned applications. The electrode should have the following favorable characteristics: easy construction, low maintenance, and (potential for) miniaturization, allowing for batch processing. A microfabricated ASSISE intended for quantifying H+, Ca2+, and CO32- ions was constructed. It consists of a noble-metal electrode layer (i.e. Pt), a transduction layer, and an ion-selective membrane (ISM) layer. The transduction layer functions to transduce the concentration-dependent chemical potential of the ion-selective membrane into a measurable electrical signal.
The lifetime of an ASSISE is found to depend on maintaining the potential at the conductive layer/membrane interface 5-7. To extend the ASSISE working lifetime and thereby maintain stable potentials at the interfacial layers, we utilized the conductive polymer (CP) poly(3,4-ethylenedioxythiophene) (PEDOT) 7-9 in place of silver/silver chloride (Ag/AgCl) as the transducer layer. We constructed the ASSISE in a lab-on-a-chip format, which we called the multi-analyte biochip (MAB) (Figure 1).
Calibrations in test solutions demonstrated that the MAB can monitor pH (operational range pH 4-9), CO32- (measured range 0.01 mM - 1 mM), and Ca2+ (log-linear range 0.01 mM to 1 mM). The MAB for pH provides a near-Nernstian slope response after almost one month storage in algal medium. The carbonate biochips show a potentiometric profile similar to that of a conventional ion-selective electrode. Physiological measurements were employed to monitor biological activity of the model system, the microalga Chlorella vulgaris.
The MAB conveys an advantage in size, versatility, and multiplexed analyte sensing capability, making it applicable to many confined monitoring situations, on Earth or in space.
Biochip Design and Experimental Methods
The biochip is 10 x 11 mm in dimension and has 9 ASSISEs designated as working electrodes (WEs) and 5 Ag/AgCl reference electrodes (REs). Each working electrode (WE) is 240 &mu;m in diameter and is equally spaced at 1.4 mm from the REs, which are 480 &mu;m in diameter. These electrodes are connected to electrical contact pads with a dimension of 0.5 mm x 0.5 mm. The schematic is shown in Figure 2.
Cyclic voltammetry (CV) and galvanostatic deposition methods are used to electropolymerize the PEDOT films using a Bioanalytical Systems Inc. (BASI) C3 cell stand (Figure 3). The counter-ion for the PEDOT film is tailored to suit the analyte ion of interest. A PEDOT with poly(styrenesulfonate) counter ion (PEDOT/PSS) is utilized for H+ and CO32-, while one with sulphate (added to the solution as CaSO4) is utilized for Ca2+. The electrochemical properties of the PEDOT-coated WE is analyzed using CVs in redox-active solution (i.e. 2 mM potassium ferricyanide (K3Fe(CN)6)). Based on the CV profile, Randles-Sevcik analysis was used to determine the effective surface area 10. Spin-coating at 1,500 rpm is used to cast ~2 &mu;m thick ion-selective membranes (ISMs) on the MAB working electrodes (WEs).
The MAB is contained in a microfluidic flow-cell chamber filled with a 150 &mu;l volume of algal medium; the contact pads are electrically connected to the BASI system (Figure 4). The photosynthetic activity of Chlorella vulgaris is monitored in ambient light and dark conditions.

Multi-analyte Biochip MAB Based on All-solid-state Ion-selective Electrodes ASSISE for Physiological Research

All-solid-state ion-selective electrodes (ASSISEs) constructed from a conductive polymer (CP) transducer provide several months of functional lifetime in liquid media. Here, we describe the fabrication and calibration process of ASSISEs in a lab-on-a-chip format. The ASSISE is demonstrated to have maintained a near-Nernstian slope profile after prolonged storage in complex biological media.

Biochip Multi-analito (MAB) Basado en electrodos selectivos de iones todo de estado sólido (ASSISE) para la investigación fisiológica

Lab-on-a-chip (LOC) applications in environmental, biomedical, agricultural, biological, and spaceflight research require an ion-selective electrode (ISE) ...

Multi-Scale Modification of Metallic Implants With Pore Gradients, Polyelectrolytes and Their Indirect Monitoring In vivo

Metallic implants, especially titanium implants, are widely used in clinical applications. Tissue in-growth and integration to these implants in the tissues are important parameters for successful clinical outcomes. In order to improve tissue integration, porous metallic implants have being developed. Open porosity of metallic foams is very advantageous, since the pore areas can be functionalized without compromising the mechanical properties of the whole structure. Here we describe such modifications using porous titanium implants based on titanium microbeads. By using inherent physical properties such as hydrophobicity of titanium, it is possible to obtain hydrophobic pore gradients within microbead based metallic implants and at the same time to have a basement membrane mimic based on hydrophilic, natural polymers. 3D pore gradients are formed by synthetic polymers such as Poly-L-lactic acid (PLLA) by freeze-extraction method. 2D nanofibrillar surfaces are formed by using collagen/alginate followed by a crosslinking step with a natural crosslinker (genipin). This nanofibrillar film was built up by layer by layer (LbL) deposition method of the two oppositely charged molecules, collagen and alginate. Finally, an implant where different areas can accommodate different cell types, as this is necessary for many multicellular tissues, can be obtained. By, this way cellular movement in different directions by different cell types can be controlled. Such a system is described for the specific case of trachea regeneration, but it can be modified for other target organs. Analysis of cell migration and the possible methods for creating different pore gradients are elaborated. The next step in the analysis of such implants is their characterization after implantation. However, histological analysis of metallic implants is a long and cumbersome process, thus for monitoring host reaction to metallic implants in vivo an alternative method based on monitoring CGA and different blood proteins is also described. These methods can be used for developing in vitro custom-made migration and colonization tests and also be used for analysis of functionalized metallic implants in vivo without histology.

Multi-Scale Modification of Metallic Implants With Pore Gradients, Polyelectrolytes and Their Indirect Monitoring In vivo

In this video, we will demonstrate modification techniques for porous metallic implants to improve their functionality and to control cell migration. Techniques include development of pore gradients to control cell movement in 3D and production of basement membrane mimics to control cell movement in 2-D. Also, a HPLC-based method for monitoring implant integration in-vivo via analysis of blood proteins is described.

Modificación Multi-Escala de implantes metálicos con gradientes de poro, polielectrolitos y su control indirecto<em&gt; En vivo</em

Metallic implants, especially titanium implants, are widely used in  clinical applications. Tissue in-growth and integration to these implants in  the ...

Construction and Setup of a Bench-scale Algal Photosynthetic Bioreactor with Temperature, Light, and pH Monitoring for Kinetic Growth Tests

The optimal design and operation of photosynthetic bioreactors (PBRs) for microalgal cultivation is essential for improving the environmental and economic performance of microalgae-based biofuel production. Models that estimate microalgal growth under different conditions can help to optimize PBR design and operation. To be effective, the growth parameters used in these models must be accurately determined. Algal growth experiments are often constrained by the dynamic nature of the culture environment, and control systems are needed to accurately determine the kinetic parameters. The first step in setting up a controlled batch experiment is live data acquisition and monitoring. This protocol outlines a process for the assembly and operation of a bench-scale photosynthetic bioreactor that can be used to conduct microalgal growth experiments. This protocol describes how to size and assemble a flat-plate, bench-scale PBR from acrylic. It also details how to configure a PBR with continuous pH, light, and temperature monitoring using a data acquisition and control unit, analog sensors, and open-source data acquisition software.

This paper describes the assembly process and operation of a bench-scale photosynthetic bioreactor that can be used, in conjunction with other methods, to estimate pertinent kinetic growth parameters. This system continuously monitors the pH, light, and temperature using sensors, a data acquisition and control unit, and open-source data acquisition software.

Construcción y configuración de un biorreactor fotosintético de algas a escala de banco con control de temperatura, luz y pH para pruebas de crecimiento cinético

The optimal design and operation of photosynthetic bioreactors (PBRs) for microalgal cultivation is essential for improving the environmental and economic ...

In Vesiculo Synthesis of Peptide Membrane Precursors for Autonomous Vesicle Growth

Compartmentalization of biochemical reactions is a central aspect of synthetic cells. For this purpose, peptide-based reaction compartments serve as an attractive alternative to liposomes or fatty acid-based vesicles. Externally or within the vesicles, peptides can be easily expressed and simplify the synthesis of membrane precursors. Provided here is a protocol for the creation of vesicles with diameters of ~200 nm based on the amphiphilic elastin-like polypeptides (ELP) utilizing dehydration-rehydration from glass beads. Also presented are protocols for bacterial ELP expression and purification via inverse temperature cycling, as well as their covalent functionalization with fluorescent dyes. Furthermore, this report describes a protocol to enable the transcription of RNA aptamer dBroccoli inside ELP vesicles as a less complex example for a biochemical reaction. Finally, a protocol is provided, which allows in vesiculo expression of fluorescent proteins and the membrane peptide, whereas synthesis of the latter results in vesicle growth.

Presented here are protocols for the creation of peptide-based small unilamellar vesicles capable of growth. To facilitate in vesiculo production of the membrane peptide, these vesicles are equipped with a transcription-translation system and the peptide-encoding plasmid.

En Vesiculo Síntesis de Precursores de Membrana De péptido para crecimiento de la vesícula Autónoma

Compartmentalization of biochemical reactions is a central aspect of synthetic cells. For this purpose, peptide-based reaction compartments serve as an ...

Construction of a Wireless-Enabled Endoscopically Implantable Sensor for pH Monitoring with Zero-Bias Schottky Diode-based Receiver

Ambulatory pH monitoring of pathological reflux is an opportunity to observe the relationship between symptoms and exposure of the esophagus to acidic or non-acidic refluxate. This paper describes a method for the development, manufacturing, and implantation of a miniature wireless-enabled pH sensor. The sensor is designed to be implanted endoscopically with a single hemostatic clip. A fully passive rectenna-based receiver based on a zero-bias Schottky diode is also constructed and tested. To construct the device, a two-layer printed circuit board and off-the-shelf components were used. A miniature microcontroller with integrated analog peripherals is used as an analog front end for the ion-sensitive field-effect transistor (ISFET) sensor and to generate a digital signal which is transmitted with an amplitude shift keying transmitter chip. The device is powered by two primary alkaline cells. The implantable device has a total volume of 0.6 cm3 and a weight of 1.2 grams, and its performance was verified in an ex vivo model (porcine esophagus and stomach). Next, a small footprint passive rectenna-based receiver which can be easily integrated either into an external receiver or the implantable neurostimulator, was constructed and proven to receive the RF signal from the implant when in proximity (20 cm) to it. The small size of the sensor provides continuous pH monitoring with minimal obstruction of the esophagus. The sensor could be used in routine clinical practice for 24/96 h esophageal pH monitoring without the need to insert a nasal catheter. The &#34;zero-power&#34; nature of the receiver also enables the use of the sensor for automatic in-vivo calibration of miniature lower esophageal sphincter neurostimulation devices. An active sensor-based control enables the development of advanced algorithms to minimize the used energy to achieve a desirable clinical outcome. One of the examples of such an algorithm would be a closed-loop system for on-demand neurostimulation therapy of gastroesophageal reflux disease (GERD).

The manuscript presents a miniature implantable pH sensor with ASK modulated wireless output together with a fully passive receiver circuit based on zero-bias Schottky diodes. This solution can be used as a basis in the development of in vivo calibrated electrostimulation therapy devices and for ambulatory pH monitoring.

Construcción de un sensor implantable endoscópicamente habilitado para la tecnología inalámbrica para el monitoreo del pH con receptor basado en diodo Schottky de sesgo cero

Ambulatory pH monitoring of pathological reflux is an opportunity to observe the relationship between symptoms and exposure of the esophagus to acidic or ...

Dispositivo microfluídico para el aislamiento continuo de vesículas extracelulares de orina humana

Single Step Isolation of Extracellular Vesicles from Large-Volume Samples with a Bifurcated A4F Microfluidic Device

Extracellular vesicles (EVs) hold immense potential for various biomedical applications, including diagnostics, drug delivery, and regenerative medicine. Nevertheless, the current methodologies for isolating EVs present significant challenges, such as complexity, time consumption, and the need for bulky equipment, which hinders their clinical translation. To address these limitations, we aimed to develop an innovative microfluidic system based on cyclic olefin copolymer-off-stoichiometry thiol-ene (COC-OSTE) for the efficient isolation of EVs from large-volume samples in a continuous manner. By utilizing size and buoyancy-based separation, the technology used in this study achieved a significantly narrower size distribution compared to existing approaches from urine and cell media samples, enabling the targeting of specific EV size fractions in future applications. Our innovative COC-OSTE microfluidic device design, utilizing bifurcated asymmetric flow field-flow fractionation technology, offers a straightforward and continuous EV isolation approach for large-volume samples. Furthermore, the potential for mass manufacturing of this microfluidic device offers scalability and consistency, making it feasible to integrate EV isolation into routine clinical diagnostics and industrial processes, where high consistency and throughput are essential requirements.

Autor destacado: Fraccionamiento de flujo de campo asimétrico para la integración de biorreactores

Extracellular vesicles hold immense promise for biomedical applications, but current isolation methods are time-consuming and impractical for clinical use. In this study, we present a microfluidic device that enables the direct isolation of extracellular vesicles from large volumes of biofluids in a continuous manner with minimal steps.

Aislamiento en un solo paso de vesículas extracelulares a partir de muestras de gran volumen con un dispositivo microfluídico A4F bifurcado

Extracellular vesicles (EVs) hold immense potential for various biomedical applications, including diagnostics, drug delivery, and regenerative medicine. ...

Methods Article

Monitoreo adsorción de proteínas de estado sólido Nanoporos