Un tratamiento regenerativo para la enfermedad arterial periférica sería extremadamente beneficioso y este modelo animal puede ser capaz de probar mejor si los tratamientos experimentales podrían funcionar en pacientes humanos. Nuestro procedimiento tiene como objetivo presentar un modelo mejorado. Uno que replica con mayor precisión la resistencia terapéutica encontrada en pacientes con diabetes o hiperlipidemia.
Este modelo animal se puede utilizar para probar nuevas terapias para la isquemia periférica y proporciona un modelo preclínico que ha comprometido la neovascularización a la isquemia. Después de confirmar la falta de respuesta al pellizco de la pata trasera en un conejo diabético e hiperlipidémico anestesado de cuatro a seis meses de edad, utilice un bisturí con una hoja número 15 para hacer una incisión de cuatro a cinco centímetros de largo justo lateralmente en el lado derecho de la tráquea y utilice la disección contundente para exponer la arteria carótida común derecha. Utilice pequeños retractores weitlaner para abrir la incisión y aislar cuidadosamente la arteria carótida de la vena yugular y el nervio vago.
Cuando la arteria carótida se haya separado completamente del nervio y la vena yugular, coloque una sutura de seda de 4 O en los extremos proximal y distal de la arteria expuesta y ate el extremo distal de la carótida con un nudo de cirujano y cuatro nudos cuadrados. En el extremo proximal, utilice una corbata de silicona vascular para permitir el apriete o aflojamiento del vaso, según sea necesario. A continuación, aplicar aproximadamente 0,5 mililitros de 1%lidocaína a lo largo de la arteria carótida expuesta y nervio para promover la vasodilatación y reducir la irritación nerviosa.
Administrar 500 unidades internacionales de heparina IV.Coloque una herramienta de inserción de alambre de cuatro pulgadas en la arteria. Alimente un cable guía de 0,014 pulgadas por 185 centímetros a través de la herramienta de inserción a la bifurcación aórtica en la cresta ilíaca en la aorta descendente, y avance un catéter angiográfico de tres coletas francesa sobre el alambre. Avanzar el catéter de cola de cerdo a dos centímetros proximal a la bifurcación aórtica en la cresta ilíaca en la aorta descendente, colocando la punta del catéter entre la séptima vértebra lumbar y la primera vértebra sacra.
Pruebe la ubicación del catéter inyectando manualmente de dos a cuatro mililitros de agente de contraste. Una vez confirmado el posicionamiento correcto, administrar una inyección intraarterial de 100 microgramos de nitroglicerina a través del catéter para aumentar la vasodilatación. Luego administre de 0,8 a un mililitro de 1%lidocaína a través del catéter para ayudar con la vasodilatación y lavar el catéter con solución salina heparinizada.
Fije el tubo para el inyector angiográfico automatizado al catéter, asegurándose de eliminar cualquier aire de la línea. Utilice el inyector angiográfico automatizado para entregar nueve mililitros de medio de contraste a través del catéter a tres mililitros por segundo y realizar angiografía por resta digital a seis fotogramas por segundo. Seleccione las imágenes en serie y modifique la imagen del angiograma utilizando un ajuste de menos 40% para minimizar la apariencia del hueso y capturar una imagen completa de la perfusión del vaso con contraste.
Para aislar la arteria femoral, utilice una hoja de bisturí número 15 para hacer una incisión longitudinal de la piel sobre la arteria femoral derecha, asegurándose de que la incisión se extienda inferiormente desde el ligamento inguinal y termine en la zona sólo proximal a la rótula. Utilice la disección contundente para exponer la arteria femoral y abrir la incisión con los retractores de Weitlaner. Aplicar aproximadamente 0,5 mililitros de 1%lidocaína localmente para reducir la irritación nerviosa y promover la vasodilatación.
Continuar la disección contundente de los tejidos para liberar toda la longitud de la arteria femoral junto con todas sus ramas, incluyendo las arterias epigástricas inferiores, femorales profundas, circunflejo lateral y epigástricas superficiales. Diseccionar a lo largo de las arterias popliteales y safenosas, así como la arteria ilíaca externa, hidratando periódicamente la zona con solución salina para proteger contra el daño tisular. Separe cuidadosamente la arteria femoral de la vena femoral y el nervio y coloque dos suturas de seda 4-O en la arteria femoral con suficiente espacio entre las suturas para permitir que la arteria se se teje.
Luego usa pequeñas tijeras Metzenbaum para cortar entre las dos corbatas de la arteria ligada. Exclusa la arteria femoral desde donde la arteria se bifurca para formar las arterias safenosas y popliteales, trabajando cerca, atando cualquier rama lateral para extirpar el resto de la arteria femoral justo debajo de la arteria epigástrica. Para la angiografía repetida, utilice una hoja silástica con una bola de acero inoxidable de tres milímetros montada.
Para fijar la bola de acero inoxidable en la parte superior del músculo del cuádriceps con suturas de seda 4-O. Tire de la piel sobre la pelota cuando esté en su lugar. Administrar una inyección intraarterial de 100 microgramos de nitroglicerina a través del catéter para aumentar la vasodilatación.
Si es necesario, administre otro 0,8 a un mililitro de 1%lidocaína a través del catéter para ayudar con la vasodilatación y lavar con solución salina heparinizada. Utilice el inyector angiográfico automatizado en los mismos ajustes para inyectar otros nueve mililitros de medio de contraste. A continuación, realice otra angiografía, como se ha demostrado.
Al final del procedimiento, retire el catéter de la arteria derecha y ate la arteria usando la sutura de seda 4-O ya en su lugar alrededor de la arteria. A continuación, cierre las capas musculares y subcuticulares con 4-O polidioxanona o 3-O poliglactitina 910 suturas en una aguja cónica en un patrón de sutura continua y cierre la piel usando 4-O polidioxanona o 4-O poliglactina 910 suturas en una aguja de corte inverso en un patrón de sutura subcuticular continua enterrada. En animales no diabéticos, incluso con colesterol más alto, hay una mayor recuperación de la presión arterial en la extremidad isquémica y la vascularización en las angiografías en el punto final en comparación con los animales diabéticos.
Histológicamente, cambios en la estructura muscular consistentes con edema y daño isquémico se observan como una pérdida o interrupción de las fibras musculares. Además, la inmunostaining para PECAM uno y alfa fuerza muscular actina se puede utilizar para identificar el número y tamaño de los vasos en las secciones de tejido. Se pueden agregar otros métodos de diagnóstico por imágenes, como el ultrasonido Doppler, la imagen Doppler láser, la termografía infrarroja y la RMN para un mayor seguimiento de la reperfusión isquémica de las extremidades.
Con esta incorporación de resistencia terapéutica, nuestro modelo imita con mayor precisión la isquemia en un estado enfermo, avanzando en la evaluación de nuevas terapias para la enfermedad arterial periférica.
