Un trattamento rigenerativo per le malattie arteriosa periferiche sarebbe estremamente vantaggioso e questo modello animale potrebbe essere in grado di testare meglio se i trattamenti sperimentali potrebbero funzionare in pazienti umani. La nostra procedura mira a presentare un modello migliore. Uno che replica più accuratamente la resistenza terapeutica riscontrata nei pazienti con diabete o iperlipidemia.
Questo modello animale può essere utilizzato per testare nuove terapie per l'ischemia periferica e fornisce un modello pre-clinico che ha compromesso la neovascolarizzazione all'ischemia. Dopo aver confermato la mancanza di risposta al pizzico della zampa posteriore in un coniglio diabetico e iperlipidemico anestetizzato di quattro-sei mesi, usa un bisturi con una lama numero 15 per fare un'incisione lunga da quattro a cinque centimetri appena laterale sul lato destro della trachea e usa la dissezione smussata per esporre la giusta arteria carotide comune. Utilizzare piccoli retrattori Weitlaner per aprire l'incisione e isolare accuratamente l'arteria carotide dalla vena giugulare e dal nervo vago.
Quando l'arteria carotide è stata completamente separata dal nervo e dalla vena giugulare, posizionare una sutura di seta 4-O alle estremità prossimali e distali dell'arteria esposta e legare l'estremità distale della carotide con un nodo del chirurgo e quattro nodi quadrati. All'estremità prossimale, utilizzare una cravatta in silicone vascolare per consentire il serraggio o l'allentamento del vaso, se necessario. Successivamente, applicare circa 0,5 millilitri di 1%lidocaina lungo l'arteria carotide esposta e il nervo per promuovere la vasodilatazione e ridurre l'irritazione nervosa.
Amministrare 500 unità internazionali di eparina IV.Posizionare uno strumento di inserimento del filo da quattro pollici nell'arteria. Alimentare un filo guida di 0,014 pollici per 185 centimetri attraverso lo strumento di inserimento alla biforcazione aortica alla cresta iliaca nell'aorta discendente e far avanzare un catetere angiografico a tre code sul filo. Far avanzare il catetere a coda di maiale a due centimetri prossimale alla biforcazione aortica alla cresta iliaca nell'aorta discendente, posizionando la punta del catetere tra la settima vertebra lombare e la prima vertebra sacrale.
Testare la posizione del catetere iniettando manualmente da due a quattro millilitri di agente di contrasto. Una volta confermato il corretto posizionamento, somministrare un'iniezione intraarteriale di 100 microgrammi di nitroglicerina attraverso il catetere per aumentare la vasodilatazione. Quindi somministrare da 0,8 a un millilitro di lidocaina all'1% attraverso il catetere per aiutare con la vasodilatazione e sciacquare il catetere con soluzione salina eparinizzata.
Collegare i tubi per l'iniettore angiografico automatizzato al catetere, assicurandosi di rimuovere l'aria dalla linea. Utilizzare l'iniettore angiografico automatico per fornire nove millilitri di mezzo di contrasto attraverso il catetere a tre millilitri al secondo ed eseguire l'angiografia di sottrazione digitale a sei fotogrammi al secondo. Selezionare le immagini seriali e modificare l'immagine dell'angiogramma utilizzando l'impostazione meno 40% per ridurre al minimo l'aspetto dell'osso e acquisire un quadro completo della perfusione del vaso con contrasto.
Per isolare l'arteria femorale, utilizzare una lama bisturi numero 15 per fare un'incisione longitudinale della pelle sull'arteria femorale destra, assicurandosi che l'incisione si estenda in modo inferiore dal legamento inguinale e finisca nell'area appena prossimale alla rotula. Utilizzare la dissezione smussata per esporre l'arteria femorale e aprire l'incisione con i retrattori Weitlaner. Applicare localmente circa 0,5 millilitri di lidocaina all'1% per ridurre l'irritazione nervosa e promuovere la vasodilatazione.
Continuare la dissezione smussata dei tessuti per liberare l'intera lunghezza dell'arteria femorale insieme a tutti i suoi rami, comprese le arterie epigastriche, femorali profonde, circumflesse laterali e epigastriche superficiali inferiori. Sezionare lungo le arterie poplitee e saphenous, così come l'arteria iliaca esterna, idratando periodicamente l'area con soluzione salina per proteggere dai danni ai tessuti. Separare accuratamente l'arteria femorale dalla vena femorale e dal nervo e posizionare due suture di seta 4-O sull'arteria femorale con abbastanza spazio tra le suture per consentire la recisa dell'arteria.
Quindi usa piccole forbici Metzenbaum per tagliare tra le due cravatte dell'arteria legata. Asportare l'arteria femorale da dove l'arteria biforca per formare le arterie safenose e poplitee, lavorando prossimalmente, legando qualsiasi rami laterali per asportare il resto dell'arteria femorale appena sotto l'arteria epigastrica. Per l'angiografia ripetuta, utilizzare un foglio silastico con una sfera montata in acciaio inossidabile da tre millimetri.
Per attaccare la palla in acciaio inossidabile nella parte superiore del muscolo quadricipite con suture di seta 4-O. Tirare la pelle sopra la palla quando è in posizione. Somministrare un'iniezione intraarteriale di 100 microgrammi di nitroglicerina attraverso il catetere per aumentare la vasodilatazione.
Se necessario, somministrare un altro 0,8 a un millilitro di 1%lidocaina attraverso il catetere per aiutare con vasodilatazione e lavare con soluzione salina eparinizzata. Utilizzare l'iniettore angiografico automatico alle stesse impostazioni per iniettare altri nove millilitri di mezzo di contrasto. Quindi eseguire un altro angiogramma, come dimostrato.
Al termine della procedura, rimuovere il catetere dall'arteria destra e legare l'arteria utilizzando la sutura di seta 4-O già in posizione intorno all'arteria. Quindi chiudere gli strati muscolari e sottocuticolari con suture 4-O polidioxanone o poliglactina 3-O 910 su un ago di cono in un modello di sutura continua e chiudere la pelle usando suture 4-O polidiossanone o 4-O poliglactina 910 su un ago da taglio inverso in un modello di sutura sottocuticolare continua sepolta. Negli animali non diabetici, anche con colesterolo più alto, c'è un aumento del recupero della pressione sanguigna nell'arto ischemico e vascolarizzazione negli angiogrammi nel momento finale rispetto agli animali diabetici.
Istologicamente, i cambiamenti nella struttura muscolare coerenti con l'edema e il danno ischemico sono osservati come perdita o interruzione delle fibre muscolari. Inoltre, l'immunostaining per PECAM one e alfa smooth muscle actin può essere utilizzato per identificare il numero e le dimensioni dei vasi nelle sezioni tissutali. Altri metodi di imaging, come gli ultrasuoni Doppler, l'imaging doppler laser, la termografia a infrarossi e la risonanza magnetica possono essere aggiunti per un ulteriore monitoraggio della riperfusione degli arti ischemici.
Con questa incorporazione della resistenza terapeutica, il nostro modello imita più accuratamente l'ischemia in uno stato mato, avanzando la valutazione di nuove terapie per le malattie arteriosa periferiche.
