Este estudio informa de la toma de muestras de sangre de la vena de la cola en ratones utilizando un sistema de tubo de extracción de vacío con lupa de anteojos. Nuestro método es fácil de practicar y podría utilizarse para repetir la toma de muestras de sangre en ratones. Al principio se coloca un ratón en el soporte de sujeción de plástico.
La cola se limpia y se limpia con 70% de etanol. A continuación, el operador lleva la lupa de gafas para mejorar la visualización de la cola del ratón. Luego se inserta una punta de aguja de mariposa en una de las venas laterales dilatadas de la cola, y la sangre se recoge en el tubo de recolección de vacío a través del extremo de goma de la aguja de la mariposa.
Finalmente se retira la aguja y se termina el proceso de recolección de sangre. La vena de la cola es un lugar preferido para el muestreo de sangre. Este método de muestreo de sangre está relacionado con lesiones mínimas a ratones, sin embargo la vena de cola de los ratones es muy delgada por lo que a veces es difícil de perforar, aquí describimos un método simple de muestreo de sangre de vena de cola en ratones de prueba de laboratorio utilizando un sistema de tubo de extracción de vacío.
Este método es simple y eficiente y se puede utilizar para obtener la sangre necesaria repetidamente en ratones. El procedimiento será demostrado por dos miembros de nuestro laboratorio, Xiaoyan Liu y Wusong Zou Para empezar, colocamos un soporte de retención de plástico, tubos de vacío con tapón de goma, y una aguja de doble punta, y lupas en una superficie estéril. A continuación, coloque un ratón en el soporte de sujeción de plástico.
Las patas delanteras y traseras del ratón deben estar en una posición cómoda. Para obtener una muestra de sangre, lave la cola con agua tibia de 20 a 30 grados Celsius, limpie la cola con bolas de algodón saturadas de etanol al 70% para expandir la vena. Seleccione la vena de cola derecha o izquierda para el muestreo de sangre.
Agarre suavemente la parte inferior de la cola y mantenga la cola recta durante la recolección de muestras de sangre. Use la lupa para mejorar la visualización para facilitar la punción de la vena de la cola. Inserte la punta de aguja de mariposa calibre 22 en una de las venas laterales de la cola alrededor de la mitad distal de la punta de la cola en ángulo de aproximadamente 10 grados, moviéndose hacia la base de la cola para múltiples muestras.
Recoja la sangre en el tubo de recogida de vacío insertando el extremo de goma de la aguja de mariposa en el tubo de recolección de sangre al vacío. La cola de ratones se puede utilizar para varias colecciones de sangre, tan a menudo como sea necesario, de acuerdo con el protocolo aprobado. No siempre es fácil obtener suficiente volumen sanguíneo de la vena de cola de flujo sanguíneo delgado y bajo de ratones con el método tradicional.
Nuestro método es simple y eficiente y se puede utilizar para obtener un volumen sanguíneo adecuado repetidamente en ratones. Se informa que hasta el 10% del volumen sanguíneo total se puede eliminar de forma segura de un animal sano a intervalos de dos semanas, por lo que alrededor de 175 microlitros se recogió una muestra de sangre de ratones cada vez de acuerdo con los principios de ética. Dos, es vital extender la cola para evitar su movimiento en el proceso de muestreo de sangre.
Con el fin de evitar la coagulación de la sangre en la aguja, se debe seleccionar otra posición de punción si la sangre deja de fluir durante 15 segundos. La recolección exitosa de sangre se definió como la obtención de 175 microlitros de sangre cada vez. Los tiempos máximos de punción se establecieron en tres pruebas.
Si el volumen total de sangre fue menor que 175 microlitros después de la tercera punción, se definió como una recolección de sangre fallida. Cuando se haya recogido un volumen de muestra adecuado, retire la aguja de la vena y aplique brevemente presión en el sitio de inserción para detener el sangrado. Para recoger plasma, utilice tubos que contengan EDTA, un anticoagulante, invierta suavemente el tubo varias veces para mezclar el anticoagulante con la sangre y colocar las muestras en hielo verticalmente.
Gire los tubos de recolección de muestras de sangre entera en la centrífuga refrigerada durante 10 minutos. Extraiga el plasma, teniendo cuidado de no perturbar las capas de glóbulos rojos y blancos. Para recoger la serina, utilice tubos sin anticoagulante.
Ambos tipos de muestras se pueden utilizar inmediatamente o almacenar a menos de 80 grados Centígrados durante un año. Este estudio tuvo como objetivo investigar la superioridad de la recolección repetida de muestras de sangre de la vena de la cola de ratones a través del sistema de recolección de sangre al vacío y la lupa de las gafas. Grupo experimental en comparación con el método de muestreo de sangre convencional.
El grupo convencional, por principiantes y expertos respectivamente, el volumen sanguíneo recogido y la duración del muestreo fueron similares entre dos grupos para los expertos, sin embargo, el aumento del volumen sanguíneo recogido y la duración más corta del muestreo se observaron en grupo experimental en comparación con el grupo convencional para principiantes. Una mayor tasa de éxito también se vio en el grupo experimental en comparación con el grupo convencional para principiantes. Este método de muestreo de sangre es fácil de dominar y tiene una alta tasa de éxito.
El número de punción fallida podría reducirse a un comparación con el del uso del método tradicional. Además, este procedimiento sólo causa lesiones mínimas a los ratones, es sólo la cinta de cola de los ratones sin la necesidad de anestésicos, que la influencia de la respuesta al estrés en los anestésicos en la muestra de sangre podría evitarse.
