В этом исследовании сообщается о выборке крови из хвостовой вены у мышей с помощью системы вакуумной трубки извлечения с увеличенным стеклом. Наш метод прост в практике и может быть использован для повторного отбора проб крови у мышей. Мышь помещается в пластиковый удерживающее держатель на первый взгляд.
Хвост очищается и протирается 70%этанолом. Затем оператор носит увеличитель очков, чтобы улучшить просмотр хвоста мыши. Кончик иглы бабочки затем вставляется в одну из расширенных вен бокового хвоста, и кровь собирается в вакуумную трубку сбора через резиновый конец иглы бабочки.
Наконец игла удаляется и процесс сбора крови закончен. Хвост вены является предпочтительным местом для отбора проб крови. Этот метод отбора проб крови связан с минимальной травмой мышей, однако хвостовая вена мышей очень тонкая, так что иногда трудно проколоть, здесь мы описываем простой метод отбора проб крови хвостовой вены на лабораторных мышах с помощью системы вакуумной извлечения трубки.
Этот метод прост и эффективен, и он может быть использован для получения необходимой крови неоднократно у мышей. Процедура будет продемонстрирована двумя членами нашей лаборатории, Сяоян Лю и Усон Цзоу Для начала, мы поместим пластиковый удерживающее держатель, вакуумные трубки с резиновой пробкой, и двойной остроконечной иглой, и очки увеличитель на стерильной поверхности. Затем поместите мышь в пластиковый удерживающее держатель.
Передние и задние лапы мыши должны быть в удобном положении. Чтобы получить образец крови, мыть хвост теплой водой от 20 до 30 градусов по Цельсию, протрите хвост с 70% этанола насыщенных хлопчатобумажных шариков, чтобы расширить вену. Выберите правую или левую вену хвоста для взятия проб крови.
Аккуратно возьмите нижнюю часть хвоста и держите хвост прямо во время сбора образцов крови. Носите очки увеличитель для улучшения просмотра для облегчения прокола хвостовой вены. Вставьте 22 калибра иглы бабочки кончик в один из боковой хвост вены около одной половины дистальной от кончика хвоста под углом около 10 градусов, двигаясь к основанию хвоста для нескольких образцов.
Соберите кровь в трубку вакуумной коллекции, вставив резиновый конец иглы бабочки в вакуумную трубку сбора крови. Хвост мышей может быть использован для нескольких коллекций крови, так часто, как это необходимо, в соответствии с утвержденным протоколом. Не всегда легко получить достаточное количество крови из тонкой и низкой вены хвоста кровотока мышей традиционным методом.
Наш метод прост и эффективен и может быть использован для получения достаточного объема крови неоднократно у мышей. Сообщается, что до 10% от общего объема крови можно безопасно удалить у здорового животного с интервалом в две недели, поэтому каждый раз в соответствии с принципами этики собирается около 175 микролитров крови мышей. Во-ве, очень важно расширить хвост, чтобы избежать его движения в процессе взятия проб крови.
Для того, чтобы избежать свертывания крови в игле, другое положение прокола должно быть выбрано, если кровь перестает вытекать в течение 15 секунд. Успешный сбор крови был определен как получение 175 микролитров крови каждый раз. Максимальное время прокола было установлено до трех испытаний.
Если общий объем крови был ниже, чем 175 микролитров после третьего прокола, он был определен как неудачный сбор крови. Когда будет собран достаточный объем образца, вывихните иглу из вены и кратко нанесите давление на место вставки, чтобы остановить кровотечение. Для сбора плазмы используйте трубки, содержащие ЭДТА, антикоагулянт, несколько раз аккуратно инвертировать трубку, чтобы смешать антикоагулянт с кровью и поместить образцы на лед вертикально.
Спин весь образец крови сбора труб в охлажденной центрифуге в течение 10 минут. Извлекайте плазму, заботясь о том, чтобы не нарушить красные и белые слои клеток крови. Для сбора серина используйте трубки без антикоагулянта.
Оба типа образцов могут быть использованы немедленно или храниться при температурах до 80 градусов по Цельсию в течение одного года. Это исследование было направлено на изучение превосходства повторного сбора образцов крови из хвостовой вены мышей через вакуумную систему сбора крови и увеличитель очков. Экспериментальная группа по сравнению с обычным методом отбора проб крови.
Обычная группа, по начинающим и экспертам, соответственно, собранный объем крови и продолжительность выборки были похожи между двумя группами для экспертов, однако, увеличение собранного объема крови и более короткая продолжительность выборки были замечены в экспериментальной группе по сравнению с обычной группой для начинающих. Более высокий уровень успеха был также замечен в экспериментальной группе по сравнению с обычной группой для начинающих. Этот метод отбора проб крови прост в освоении и имеет высокий уровень успеха.
Число неудачных проколов можно было бы сократить по сравнению с использованием традиционного метода. Более того, эта процедура наносит лишь минимальные травмы мышам, это просто хвостовая лента мышей без необходимости анестезии, что влияния стрессовой реакции при анестезии на образец крови можно было бы избежать.
