Recolección de sangre a través de la punción de la vena subclavia en ratones. La recolección de muestras de sangre de ratones es esencial en la mayoría de los laboratorios de investigación. Los enfoques convencionales para la recolección de sangre en ratones es el corte de cola, cuando se necesita menos de 100 muestras de microlitro.
Sin embargo, si se requieren más de 100 microlitro de sangre en un punto de tiempo no terminal, el sangrado retro-orbital, submandibular o la extracción de sangre submental, son las técnicas más comúnmente consideradas. En algunos lugares se adoptó la incisión de la vena yugular o el cateterismo como métodos alternativos. Sin embargo, los métodos anteriores son hirientes para los ratones.
Sobre la base de nuestras investigaciones formales, aquí introducimos una nueva estrategia económica y suave para la recolección de sangre de la vena subclavia en ratones. Se presentan y discuten la seguridad y viabilidad, y el volumen sanguíneo obtenido con esta técnica. Después de la anestesia general, acostar el ratón en posición supina.
Limpie el espacio infraclavicular con 75% de etanol. Confirme la clavícula y las fosas supraesternales antes de pinchar. Identifique el sitio de punción en medio de la clavícula.
Mueva las agujas superiores y hacia arriba hacia las fosas supraesternales, justo des adelante a la clavícula. Después de mover de tres a cuatro milímetros hacia adelante, mantenga la presión negativa en la jeringa y retire lentamente la aguja. La sangre se drenará en la jeringa durante el curso de la retirada.
Después de la recolección de sangre, presione el lugar de la punción suavemente durante uno o dos minutos para detener el sangrado. Prepare los materiales necesarios, incluyendo 75%etanol, cinta adhesiva, agente depiladora, tubos, jeringa de 1,0 mililitros conectada con aguja, báscula electrónica, heparina y solución salina. Después de una anestesia general satisfactoria, coloque el ratón sobre la mesa de operaciones en posición supina, y de dos a cuatro centímetros del borde de la mesa para facilitar la punción venosa.
Fije las extremidades en una posición cómoda, como se muestra en la Figura 2. No se necesitó intubación ni ventilación mecánica en todo el procedimiento. Aplicar agente depilante alrededor del espacio infraclavicular con hisopo de algodón.
Tres minutos más tarde, lave el agente depilante con un hisopo de algodón húmedo, para eliminar el pelaje y cualquier suciedad visible. Esterilice el espacio infraclavicular con 75% de etanol, y luego seque con gasa limpia. Identificar la ubicación del hueso de la clavícula y las fosas supraesternales con un dedo.
Localice el sitio de la punción, cerca del centro del hueso de la clavícula, y atrapado en él. Coloque el dedo índice izquierdo lateralmente en el sitio de la punción para fijar la piel y el tejido subcutáneo. Mueva la aguja hacia arriba en un nivel craneal hacia las fosas supraesternas.
Una vez que la aguja entra en el tejido subcutáneo, el dedo anular de la mano derecha debe moverse hacia atrás para formar presión negativa. Avance la jeringa durante tres a cuatro milímetros, pero deténgase si no hay drenaje de sangre en la jeringa. A continuación, retire lentamente la jeringa y mantenga la presión negativa en ella.
En la mayoría de las ocasiones, la sangre entrará en la jeringa en el curso de la devolución. Una vez que la sangre entre en la jeringa, fije la jeringa y mantenga la presión negativa, hasta que se recoja el volumen de sangre requerido en la jeringa. Después de la recolección de sangre, retire la aguja de punción y presione el lugar de la punción con un hisopo de algodón ligeramente durante uno o dos minutos para detener el sangrado, luego envíe los ratones de vuelta a las jaulas.
Transfiera la muestra de sangre a nuestro tubo de heparina. Repetimos este procedimiento en 10 ratones Quimi. Nueve procedimientos tuvieron éxito en el lado derecho.
Un caso falló dentro de tres intentos en el lado derecho, y la recolección de sangre tuvo éxito en el lado izquierdo. El curso de tiempo osciló entre 35 y 126 segundos. El volumen de recolección de sangre se estableció en alrededor de 200 microlitros.
La recolección de sangre fue sucedida con uno o cuatro intentos. El muestreo de sangre tuvo éxito en el primer intento en dos ratones, y a cuatro intentos en un ratón, a dos o tres intentos en otros ratones. Todos los datos se ilustraron en el Cuadro 1.
Todos los animales sobrevivieron y se recuperaron dentro de los 30 minutos después del muestreo de sangre. No hubo diferencia significativa entre el sexo para todos los parámetros observados. En conclusión, la punción de la vena subclavia es un método seguro y eficaz para la recolección de sangre en ratones.
Además del corte de venas de cola y la recolección de sangre del plexo retro-orbital, este método es factible y adecuado para investigaciones observacionales en varios puntos de tiempo en ratones.
