Questo studio riporta il prelievo di sangue dalla vena di coda nei topi utilizzando un sistema di tubi di estrazione sottovuoto con lente d'ingrandimento degli occhiali. Il nostro metodo è facile da praticare e potrebbe essere utilizzato per ripetere il prelievo del sangue nei topi. All'inizio un topo viene posto nel supporto di contenimento della plastica.
La coda viene pulita e pulita con il 70% di etanolo. Quindi l'operatore indossa la lente d'ingrandimento per migliorare la visualizzazione della coda del mouse. Una punta dell'ago farfalla viene quindi inserita in una delle vene della coda laterale dilatate e il sangue viene raccolto nel tubo di raccolta del vuoto attraverso l'estremità in gomma dell'ago della farfalla.
Infine l'ago viene rimosso e il processo di raccolta del sangue è terminato. La vena di coda è una posizione preferita per il prelievo del sangue. Questo metodo di prelievo del sangue è correlato a lesioni minime ai topi, tuttavia la vena di coda dei topi è molto sottile, quindi a volte è difficile da forare, qui descriviamo un semplice metodo di prelievo del sangue delle vene della coda nei topi di prova di laboratorio utilizzando un sistema di tubi di estrazione sottovuoto.
Questo metodo è semplice ed efficiente e può essere utilizzato per ottenere ripetutamente il sangue richiesto nei topi. La procedura sarà dimostrata da due membri del nostro laboratorio, Xiaoyan Liu e Wusong Zou Per iniziare, posizionare un supporto di contenimento della plastica, tubi a vuoto con tappo di gomma e un ago a doppia punta e lente d'ingrandimento degli occhiali su una superficie sterile. Quindi, posizionare un mouse nel supporto di contenimento della plastica.
Le zampe anteriori e posteriori del mouse dovrebbero essere in una posizione comoda. Per ottenere il campione di sangue, lavare la coda con acqua tiepida da 20 a 30 gradi Celsius, pulire la coda con 70% di etanolo satura di batuffoli di cotone per espandere la vena. Selezionare la vena della coda destra o sinistra per il prelievo del sangue.
Afferrare delicatamente la parte inferiore della coda e mantenere la coda dritta durante la raccolta del campione di sangue. Indossare la lente d'ingrandimento degli occhiali per migliorare la visualizzazione per facilitare la puntura della vena della coda. Inserire la punta dell'ago farfalla calibro 22 in una delle vene posteriori laterale circa una metà distatale dalla punta della coda con un angolo di circa 10 gradi, spostandosi verso la base della coda per più campioni.
Raccogliere il sangue nel tubo di raccolta del vuoto inserendo l'estremità in gomma dell'ago farfalla nel tubo di raccolta del sangue sottovuoto. La coda dei topi può essere utilizzata per diverse raccolte di sangue, tutte le volte che è necessario, secondo il protocollo approvato. Non è sempre facile ottenere abbastanza volume di sangue dalla vena di coda sottile e bassa del flusso sanguigno dei topi con il metodo tradizionale.
Il nostro metodo è semplice ed efficiente e può essere utilizzato per ottenere ripetutamente un volume di sangue adeguato nei topi. È stato riferito che fino al 10% del volume totale del sangue può essere tranquillamente rimosso da un animale sano a intervalli di due settimane, quindi circa 175 microlitri campione di sangue di topi sono stati raccolti ogni volta in conformità con i principi etici. In secondo luogo, è fondamentale estendere la coda per evitare il suo movimento nel processo di prelievo del sangue.
Per evitare la coagulazione del sangue nell'ago, è necessario selezionare un'altra posizione di puntura se il sangue smette di scorrere per 15 secondi. Una raccolta del sangue riuscita è stata definita come l'ottenimento di 175 microlitri di sangue ogni volta. I tempi massimi di puntura sono stati fissati a tre prove.
Se il volume totale del sangue era inferiore a quello di 175 microlitri dopo la terza puntura, è stato definito come una raccolta del sangue fallita. Quando è stato raccolto un volume adeguato del campione, ritirare l'ago dalla vena e applicare brevemente la pressione sul sito di inserimento per fermare il sanguinamento. Per raccogliere il plasma, utilizzare tubi contenenti EDTA, un anticoagulante, invertire delicatamente il tubo più volte per mescolare l'anticoagulante con il sangue e posizionare i campioni sul ghiaccio verticalmente.
Girare i tubi di raccolta dei campioni di sangue intero nella centrifuga refrigerata per 10 minuti. Estrarre il plasma, facendo attenzione a non disturbare gli strati di globuli rossi e bianchi. Per raccogliere la serina, utilizzare tubi senza anticoagulante.
Entrambi i tipi di campioni possono essere utilizzati immediatamente o conservati a meno di 80 gradi Celsius per un massimo di un anno. Questo studio mirava a studiare la superiorità della raccolta ripetuta di campioni di sangue dalla vena di coda dei topi attraverso il sistema di raccolta del sangue sottovuoto e la lente d'ingrandimento degli occhiali. Gruppo sperimentale rispetto al metodo convenzionale di prelievo del sangue.
Il gruppo convenzionale, rispettivamente da principianti ed esperti, ha raccolto il volume del sangue e la durata del campionamento era simile tra due gruppi per esperti, tuttavia, l'aumento del volume del sangue raccolto e la durata del campionamento più breve sono stati osservati in gruppo sperimentale rispetto al gruppo convenzionale per principianti. Un tasso di successo più elevato è stato visto anche nel gruppo sperimentale rispetto al gruppo convenzionale per principianti. Questo metodo di prelievo del sangue è facile da padroneggiare e ha un alto tasso di successo.
Il numero di for once non riuscite potrebbe essere ridotto a un confronto con quello dell'utilizzo del metodo tradizionale. Inoltre questa procedura causa solo lesioni minime ai topi, è solo il nastro di coda dei topi senza la necessità di anestetici, che l'influenza della risposta allo stress negli anestetici sul campione di sangue potrebbe essere evitata.
