Esta nueva técnica para la toma de imágenes mesoscópicas en tiempo real de trazas florescentes de lesc a través del cráneo intacto de ratones vivos se puede utilizar para evaluar el transporte glimático. La principal ventaja es que esta técnica permite mediciones dinámicas de trazadores intracisternales in-vivo a una fracción del costo de otras modalidades de imagen. Los procedimientos necesarios para colocar la placa de la cabeza en la cánula magna cisterna son simples y mínimamente invasivos, pero requieren que la práctica se realice correctamente.
La demostración visual de los pasos críticos de este método es necesaria para maximizar la calidad de la imagen y permitir comparaciones reproducibles entre diferentes ratones y grupos experimentales. Después de confirmar una falta de respuesta a la pellizca del dedo del pies mojar el cuello y la cabeza con agua estéril y afeitar el pelaje humedecido. Limpie la piel expuesta con un hisopo de alcohol para eliminar cualquier vello residual y coloque el ratón en un marco estereotáctico encima de una almohadilla de temperatura controlada.
Aplicar pomada en los ojos de los animales y limpiar la piel expuesta con un hisopo de clorhexidina. Después de 2 minutos, retire la clorhexidina con una toallita con alcohol y aplique una solución de iodona. Cuando la iodona se ha secado inyectar analgesia subcutánea en la parte superior del cráneo y el cuello.
Comenzando en la parte del cuello que cubre la corteza occipital, haz un corte de línea media en la piel superada continuando rostralmente hacia la línea intraorbital. Extiende la incisión lateralmente hasta el borde donde el músculo temporal se inserta en el cráneo y extrae toda la piel de la incisión fusiforme para exponer los huesos frontal y parietal. Irrigar el cráneo con solución salina estéril, y utilizar hisopos de algodón para limpiar la superficie hasta que esté libre de escombros y pelo.
Después de insertar la cánula magna cisterna aplicar una mezcla de cemento dental y pegamento de cianoacrilato en el lado ventral de la placa de la cabeza alrededor del borde. Coloque la placa de la cabeza sobre el cráneo de modo que el borde anterior de la placa se alinee con la punta posterior del hueso nasal y el borde posterior se alinee con el aspecto anterior del hueso interparietal asegurándose de que la sutura sagital esté centrada y recta en relación con la ventana. Es importante asegurarse de que la placa de la cabeza está asegurada y que no obstruye el campo de visión de la cánula magna de las cisternas.
Utilice un par de gotas de acelerador de pegamento para fijar la posición de la placa de la cabeza y llenar los huecos restantes con la mezcla de cemento. Pegue la cánula diferencial magna a la placa de la cabeza y utilice la placa de la cabeza para colocar el ratón en el soporte de la cabeza en una posición fija. Coloque cuidadosamente el ratón y la bomba de infusión unidas a la cánula en un carro para su transporte al macrósco y coloque el soporte de cabeza en el escenario del macroscopio.
Asegúrese de que la línea de la bomba de la jeringa a la cánula magna cisterna no esté tensa y que no tenga torceduras. Observe la frecuencia respiratoria y la coloración rosa de las membranas mucosas para confirmar una buena oxigenación. Encienda la cámara del macroscopio y el diodo emisor de luz e inicie el modo en vivo.
Ajuste el aumento del campo de imagen para que se pueda visualizar claramente la sutura nasofrontal en la parte superior del campo y la sutura lambdoid en la parte inferior. Una vez en su lugar, el soporte de la cabeza a la etapa del macroscopio y enfoca el macroscopio en el cráneo expuesto hasta que el plano focal se encuentre en los lados laterales de los huesos parietales posteriores a las suturas coronales. Para la perfusión del trazador CSF, ajuste la bomba de perfusión a la velocidad y el volumen adecuados y establezca la longitud de onda de excitación y el tiempo de exposición adecuados para el trazador para cada canal.
A continuación, compruebe que la función de activación del macroscopio es correcta antes de iniciar simultáneamente la perfusión del trazador y la toma de imágenes. Durante la toma de imágenes se pueden identificar fácilmente las suturas naso frontal, sagital, coronal y lambdoide. Una vez que el trazador de líquido cefaéreo se ha infundido en la cisterna magna, la fluorescencia trazadora se observa por primera vez en grandes piscinas de lecnteide CSF en la cisterna olftica y la cisterna cuadreminal cerca del receso pineal y, finalmente, rodeando las arterias cerebrales medias.
Luego, los trazadores de líquido cefasequiífos entran en su cerebro a lo largo de los espacios perículares de las ramas pelales corticales de la arteria cerebral media. Las imágenes de transporte de líquido cefalofes después de una lesión cerebral traumática revelan un trazador inicialmente en la cisterna oxifrontal, pero la afluencia glimática a lo largo de los espacios perivasculares corticales se suprime por completo en el lado de la lesión. El análisis cuantitativo en las imágenes in-vivo demuestra que el área de afluencia ipsilateral se reduce casi un tercio en comparación con el hemisferio contralateral.
Para evitar artefactos de movimiento y los cambios en el plano focal, recuerde fijar correctamente la placa de la cabeza y el soporte de la placa de la cabeza y comprobar el nivel de anestesia del animal. Después del experimento, los resultados de las imágenes in-vivo se pueden validar aún más cuantificando la penetración del trazador utilizando la técnica real Esta técnica permite el estudio del sistema glimático de una manera fisiológica y mínimamente invasiva y puede ayudar a abordar futuras preguntas sobre la hidrodinámica del SEF en la salud y la enfermedad.
