Canlı farelerin bozulmamış kafatası ndan floresan BOS izlerinin gerçek zamanlı mezoskopik görüntülemesi için bu yeni teknik glenfatik taşımayı değerlendirmek için kullanılabilir. En büyük avantajı, bu tekniğin diğer görüntüleme yöntemlerinin maliyetinin çok altında in-vivo intrassternal izleyicilerin dinamik ölçümlerini sağlamasıdır. Kafa plakasını sarnıç magna kanülüne yerleştirmek için gerekli prosedürler basit ve minimal invaziv olmakla birlikte, doğru bir şekilde uygulanması nı gerektirir.
Görüntü kalitesini en üst düzeye çıkarmak ve farklı fareler ve deney grupları arasında tekrarlanabilir karşılaştırmalar sağlamak için bu yöntemin kritik adımlarının görsel olarak gösterilmesi gerekir. Parmak ucurluğuna tepki eksikliğini doğruladıktan sonra boyun ve baş steril su ile ıslatın ve nemlendirilmiş kürk tıraş. Kalan tüyleri çıkarmak için maruz kalan deriyi alkol beziyle silin ve fareyi sıcaklık kontrollü bir yastığın üzerine stereotaktik bir çerçeveye yerleştirin.
Hayvanların gözlerine merhem uygulayın ve klorheksidin bezi ile maruz kalan cildi temizleyin. 2 dakika sonra bir alkol silme ile Klorheksidin çıkarın ve bir iyodone çözeltisi uygulayın. Ne zaman iodone kafatası ve boyun üst içine deri altı analjezi enjekte kurudu.
Oksipital kabuğu kaplayan boyun kısmından başlayarak, intraorbital çizgidoğru rostrally devam örten deride bir orta hat kesim yapmak. Kesiği yanal olarak temporal kasın kafatasına soktuğü sınıra doğru uzatın ve hem frontal hem de parietal kemikleri ortaya çıkarmak için fusiform kesinin tüm derisini çıkarın. Kafatasını steril salinle sulandırın ve yüzeyi enkaz ve saçsız hale gelene kadar temizlemek için pamuklu bezler kullanın.
Sarnıç magna kanül taktıktan sonra sınır etrafında baş plaka ventral tarafına diş çimentosu ve siyanoakrilat tutkal karışımı uygulayın. Kafa plakasını kafatasının üzerine yerleştirin, böylece plakanın ön sınırı burun kemiğinin arka ucuyla hizalanır ve arka sınır interparietal kemiğin ön kısmıyla hizalanır ve yay sütüne göre ortalanır ve düz dürbündür. Bu kafa plakası güvenli olduğundan emin olmak için önemlidir ve sarnıç magna kanülasyon görüş alanı engellemez.
Baş plaka konumunu düzeltmek ve çimento karışımı ile kalan boşlukları doldurmak için tutkal hızlandırıcı damla bir çift kullanın. Sarnıç magna kanüllerini baş plakasına yapıştırın ve fareyi sabit bir pozisyonda baş tutucuya yerleştirmek için baş plakayı kullanın. Fareyi ve kanüle bağlı infüzyon pompasını makroskopa taşınması için bir sepete dikkatlice yerleştirin ve baş tutucuyu makroskop un sahnesine yerleştirin.
Şırınga pompasından sarnıç magna kanülüne kadar olan hattın gergin olmadığından ve kıvrık olmadığından emin olun. İyi bir oksijenlenmeyi doğrulamak için mukus zarlarının solunum hızını ve pembe rengini gözlemleyin. Makroskop kamerasını ve ışık yayan diyot'u açın ve canlı modu başlatın.
Görüntüleme alanının büyütülmesini, alanın üst kısmındaki nasofrontal sütürve alttaki lambdoid sütüraçıkça görselleştirilebilsin şekilde ayarlayın. Bir kez yerinde makroskop aşamasına baş tutucu bant ve odak düzlemi koronal dikişler posterior parietal kemiklerin lateral taraflarında bulunana kadar maruz kafatası üzerinde makroskop odak. BOS izleyici infüzyonu için infüzyon pompasını uygun hız ve hacime ayarlayın ve her kanal için izleyici için uygun uyarma dalga boyu ve pozlama süresini ayarlayın.
Ardından, izleyici infüzyonunu ve görüntülemeyi aynı anda başlatmadan önce makroskoptaki tetikleme işlevinin doğru olup olmadığını kontrol edin. Görüntüleme sırasında naso frontal, sagittal, koronal ve lambdoid dikişler kolayca tespit edilebilir. BOS izleyicisi sarnıç magna içine aşılanmış sonra tracer floresan ilk olfactofrontal sarnıç ve pineal girinti yakın quadrigeminal sarnıç ve sonunda orta serebral arterleri çevreleyen subaraknoid BOS büyük havuzlarda gözlenir.
BOS izleyiciler sonra orta serebral arter kortikal peal dalları peri vasküler boşluklar boyunca beyin girin. Travmatik beyin hasarı sonrası BOS nakil görüntüleme siperilkte olfactofrontal sarnıçta ilk olarak ortaya çıkar, ancak kortikal perivasküler boşluklar boyunca glenfatik akını tamamen yaralanma tarafında kaldırılır. In-vivo görüntülerde kantitatif analiz ipsilateral akını alanı kontralateral hemisfer ile karşılaştırıldığında yaklaşık üçte bir azaldığını göstermektedir.
Hareket yapıları ve odak düzleminde değişiklikler önlemek için doğru baş plaka ve baş plaka sahibi güvenli ve hayvanın anestezi düzeyini kontrol unutmayın. Deney in-vivo görüntüleme sonuçları daha gerçek bu tekniği kullanarak izleyici penetrasyonu quantifying tarafından doğrulanabilir sonra bu teknik fizyolojik ve minimal invaziv bir şekilde glenfatik sistemin çalışma sağlar ve sağlık ve hastalık BOS hidrodinamik hakkında gelecekteki sorulara hitap yardımcı olabilir.
