Esta nova técnica para imagens mesoscópicas em tempo real de traços florescente de CSF através do crânio intacto de ratos vivos pode ser usada para avaliar o transporte glifático. A principal vantagem é que essa técnica permite medições dinâmicas de rastreadores intracisternais in-vivo a uma fração do custo de outras modalidades de imagem. Os procedimentos necessários para colocar a placa da cabeça na cisterna magna cânula são simples e minimamente invasivos, mas exigem que a prática seja realizada corretamente.
A demonstração visual das etapas críticas deste método é necessária para maximizar a qualidade da imagem e permitir comparações reprodutíveis entre diferentes camundongos e grupos experimentais. Depois de confirmar a falta de resposta ao dedo do pé, molhar o pescoço e a cabeça com água estéril e raspar a pele umedeçada. Limpe a pele exposta com um cotonete de álcool para remover qualquer cabelo residual e coloque o mouse em uma moldura estereotática em cima de uma almofada controlada pela temperatura.
Aplique pomada nos olhos dos animais e limpe a pele exposta com um cotonete de Clorhexidine. Após 2 minutos, remova a Clorhexidine com um lenço de álcool e aplique uma solução de iodona. Quando a iodota tiver injetado analgesia subcutânea no topo do crânio e pescoço.
Começando na parte do pescoço que cobre a crosta occipital, faça um corte médio na pele sobreposta continuando rostrally em direção à linha intraorbital. Estenda a incisão lateralmente até a borda onde o músculo temporal insere no crânio e remova toda a pele da incisão fusiforme para expor os ossos frontal e parietal. Irrigar o crânio com soro fisiológico estéril, e use cotonetes de algodão para limpar a superfície até que esteja livre de detritos e cabelos.
Após inserir a cisterna magna cânula aplique uma mistura de cimento dental e cola cianoacrilato no lado ventral da placa da cabeça ao redor da borda. Coloque a placa da cabeça sobre o crânio para que a borda anterior da placa se alinhe com a ponta posterior do osso nasal e a borda posterior se alinhe com o aspecto anterior do osso interparietal certificando-se de que a sutura sagital esteja centrada e reta em relação à janela. É importante garantir que a placa da cabeça esteja presa e que não obstrua o campo de visão da cisterna magna cannulation.
Use algumas gotas de acelerador de cola para fixar a posição da placa da cabeça e preencher quaisquer lacunas restantes com a mistura de cimento. Cole a cisterna magna cânula na placa da cabeça e use a placa da cabeça para colocar o mouse no suporte da cabeça em uma posição fixa. Coloque cuidadosamente o mouse e a bomba de infusão presa à cânula em um carrinho para transporte ao macroscópio e coloque o porta-cabeça no palco do macroscópio.
Certifique-se de que a linha da bomba de seringa até a cisterna magna cânula não está esticada e que não tem dobras. Observe a taxa respiratória e coloração rosa das membranas mucosas para confirmar uma boa oxigenação. Ligue a câmera do macroscópio e o diodo emissor de luz e inicie o modo ao vivo.
Ajuste a ampliação do campo de imagem para que a sutura nasofrontal na parte superior do campo e a sutura lambdoid na parte inferior possam ser claramente visualizadas. Uma vez no lugar, tape o suporte da cabeça para o estágio do macroscópio e concentre o macroscópio no crânio exposto até que o plano focal esteja localizado nas laterais laterais dos ossos parietal posteriores às suturas coronais. Para a infusão do rastreador CSF, ajuste a bomba de infusão na taxa e volume apropriados e defina o comprimento de onda de excitação apropriado e o tempo de exposição do rastreador para cada canal.
Em seguida, verifique se a função de acionamento no macroscópio está correta antes de iniciar simultaneamente a infusão do rastreador e a imagem. Durante a imagem, as suturas naso frontal, sagital, coronal e lambdoid podem ser prontamente identificadas. Uma vez que o rastreador CSF tenha sido infundido na cisterna magna, a fluorescência do rastreador é observada pela primeira vez em grandes piscinas de CSF subaracnóide na cisterna olfactofrontal e na cisterna quadrigeminal perto do recesso pineal e eventualmente em torno das artérias cerebrais médias.
Os rastreadores CSF então entram em seu cérebro ao longo de espaços vasculares peri dos ramos de peal cortical da artéria cerebral média. Imagens de transporte csf após lesão cerebral traumática revelam rastreador inicialmente na cisterna olfactofrontal, mas o fluxo glicênico ao longo dos espaços perivasculares cortical é completamente abolido na lateral da lesão. A análise quantitativa nas imagens in vivo demonstra que a área de influxo ipsilateral é reduzida quase um terço em comparação com o hemisfério contralateral.
Para evitar artefatos de movimento e as mudanças no plano focal lembre-se de fixar corretamente a placa da cabeça e o porta-cabeça e verificar o nível de anestesia do animal. Após o experimento, os resultados de imagem in vivo podem ser validados quantificando ainda mais a penetração do rastreador usando a real Esta técnica permite o estudo do sistema glicêmático de forma fisiológica e minimamente invasiva e pode ajudar a abordar questões futuras sobre hidrodinâmica CSF em saúde e doenças.
