Este método es fiable para estudiar la generación de infarto de miocardio y una excelente plataforma para investigar la recuperación cardíaca después, por ejemplo, del trasplante de células madre. La principal ventaja de este procedimiento es que se puede utilizar para generar tamaños de infarto uniformes de una manera rápida, fácil y reproducible. En este modelo se pueden probar nuevas intervenciones experimentales, como las estrategias farmacológicas o las estrategias basadas en la ingeniería tisular.
Y probar con éxito que las opciones se pueden confirmar aún más en modelos de animales grandes. Después de confirmar una falta de respuesta al reflejo del dolor en un ratón anestesiado de 27 gramos y 14 semanas de edad, utilice una recortadora de pelo para eliminar el pelaje del pecho y el cuello del animal y coloque el ratón en una posición supina sobre una almohadilla calentada. Tape las extremidades posteriores y las extremidades delanteras en una posición de águila extendida y utilice povidona-yodo secuencial y 80%exfoliantes de etanol para desinfectar la piel expuesta.
Haga una incisión de la piel de la línea media desde el tercio inferior del esternón hasta la barbilla, y use fórceps curvos para separar cuidadosamente los músculos alrededor del cuello para exponer la tráquea. Utilice micro tijeras para realizar una traqueotomía entre el segundo y tercer anillo de cartílago. Y ajuste el ventilador a una frecuencia de ventilación de 110 por minuto con un volumen de marea de 0,5 mililitros.
A continuación, inserte una cánula de plástico de calibre 20 conectada al ventilador en la tráquea. A continuación, utilice la cautela para separar el músculo pectoral derecho de su origen esternal entre la tercera y la séptima costillas. Y utilice tijeras de resorte en ángulo lateral para cortar las costillas de cuarta a seis lo más cerca posible del esternón.
Disecciona el tejido conectivo subyacente para obtener una visión clara de la cavidad torácica, cauterizando la arteria mamaria para frenar el sangrado según sea necesario. Inserte un mini retractor de manchas de oro para extender las costillas y mantener la cavidad torácica abierta. Y usa fórceps contundentes para abrir el pericardio para exponer el corazón.
Utilice una varilla contundente para levantar el corazón de la cavidad torácica y disminuir la tensión del retractor para reducir la abertura del pecho y evitar que el corazón vuelva a caer en la cavidad abdominal. Pre-enfriar una criosonda de tres milímetros de diámetro durante 10 segundos, y aplicar la criosonda en la pared interior del ventrículo izquierdo durante 10 segundos para generar un ventricular izquierdo, infarto de crioinjurio. Separar la criosonda de la pared ventricular izquierda con riego salino a temperatura ambiente y reenlazar la abertura del pecho con el retractor.
Utilice la varilla para devolver suavemente el corazón a la cavidad torácica y retire el retractor. Utilice una sutura 6-0 para conectar la esternotomía con un solo nudo. Y usa una sutura 6-0 para cerrar la cavidad torácica.
Utilice una jeringa de 10 mililitros para evacuar el aire restante del pecho antes de atar el nudo y adaptar la piel en el borde caudal antes de usar una sutura de 5-0 para cerrar el tejido hasta el punto de la abertura traqueal. Después de reducir el isoflurano y el animal gana respiración espontánea eliminar el catéter traqueal y cerrar la incisión traqueal con uno 8-0 Sutura. Sustituya los músculos del cuello ventral a su posición anatómica sobre la tráquea y complete la sutura cutánea.
Luego, agregue metamizole al agua potable para la analgesia del dolor durante tres días con monitoreo diario de animales durante ocho semanas. En la ecocardiografía de corazones crioinjurados revela una fracción de eyección significativamente reducida y un cambio de área fraccionaria, con deterioro funcional observado desde el día siete después de la cirugía hasta la variable experimental a los 56 días. Según lo evaluado por el análisis de bucle de volumen de presión, la crioinfraction conduce a una función del ventrículo izquierdo deteriorada que se refleja como una disminución en el volumen de la carrera, el trabajo de carrera, la salida cardíaca y la potencia máxima ajustada previa a la carga.
El mapeo óptico ex-vivo de corazones teñidos sensibles al voltaje fluorescente demuestra un bloqueo de la conducción eléctrica en el borde de la lesión, lo que indica un desacoplamiento eléctrico local. La tinción histológica con el tricromo de Masson revela la formación de tejido fibroso transmuros en el lugar de la lesión. El tamaño del infarto se puede calcular midiendo el área de la cicatriz de infarto o la longitud de la cicatriz de línea media.
Además, la tinción inmunofluorescente contra un marcador de cardiomiocitos y colágeno-I confirman la presencia de remodelación fibrosa y la pérdida de cardiomiocitos en el lugar de la lesión. Es importante mantener la misma duración de contacto del crioproblema de cada animal, ya que una duración diferente puede conducir a tamaños de infarto incongruentes. Una vez masterada esta técnica se puede realizar en 20 minutos si se realiza correctamente.
Después de ver este video usted debe tener una buena comprensión de cómo realizar el modelo de crioinjurio. Buena suerte con tus experimentos.
