Cees Verlaan, Joyce Visser, Merel Schurink, y Grace Croft son amablemente reconocidos por su excelente asistencia técnica con los experimentos con animales.

Todos los experimentos in vivo se realizaron de conformidad con la Guía para el Cuidado y Uso de Animales de Laboratorio elaborados por el Instituto de Recursos Animales de Laboratorio. Los experimentos fueron aprobados por el Comité de Experimentación Animal local. 1. Los medicamentos, anestesia, acceso venoso, y la intubación <ol><li> La medicación y anestesia <ol><li> La premedicación <ol><li> Iniciar la amiodarona 150 mg / kg 10 días antes de la cirugía para prevenir arritmias. Continuar amiodarona en una dosis de 100 mg / kg desde el día del procedimiento hasta el día 28. Reducir la dosis a 50 mg / kg el día 29 y continúe hasta el final del estudio. </li><li> Iniciar la terapia antiplaquetaria, 1 mg / kg de clopidogrel día 3 antes de la cirugía y 4,5 mg / kg de ácido acetilsalicílico 1 día antes de la cirugía. Continuar clopidogrel 1 mg / kg por día y ácido acetilsalicílico 80 mg / día. </li><li> Comience medicamentos para el dolor 1 día antes de la cirugía por el parche de fentanilo, 25g / h para los cerdos ~ 70 kg. Continuar el uso de parches de fentanilo durante 24 horas después de la operación para garantizar la medicación del dolor adecuado. Asimismo, monitorear diariamente para detectar signos de malestar putativo (es decir, el comportamiento, la respiración, la marcha, movilidad, etc) para aumentar la medicación para el dolor. </li><li> Fast del animal durante 12 horas, mantener el acceso ilimitado al agua. </li></ol></li><li> Anestesia <ol><li> Para prevenir el estrés y molestias innecesarias, sedar al cerdo en su estable por inyección intramuscular de una mezcla de midazolam 0,4 mg / kg, la ketamina 10 mg / kg, y atropina 0,014 mg / kg. </li><li> Obtener acceso venoso por canulación de la vena del oído con una cánula iv 18 G. Inducir la anestesia mediante la administración intravenosa de 5 mg / kg sodiumthiopental, y dar 1,000 / 100 mg de amoxicilina / ácido clavulánico para prevenir las infecciones. El cerdo recibirá 1000/100 mg de amoxicilina / ácido clavulánico el día después de la cirugía como el tratamiento antibiótico. </li><li> Intube el cerdo usando un endotrachtubo eal (tamaño 8.5 para cerdos de ~ 70 kg). Si es necesario realizar globo de ventilación con una frecuencia de 12/min y transportar el cerdo a la sala de operaciones. </li><li> A la llegada a la sala de operaciones, comience inmediatamente la ventilación mecánica con presión positiva con FiO 2 0,50, 10 ml / kg de volumen corriente, y una frecuencia de 12/min bajo continúa capnografía. </li><li> Iniciar la anestesia equilibrada por continúa la infusión intravenosa de una combinación de midazolam 0,5 mg / kg / h, sufentanilo 2,5 microgramos / kg / h y bromuro de pancuronio 0.1 mg / kg / h. Durante toda la operación, controlar continuamente el ECG, la presión arterial sanguínea, la temperatura y la capnografía para medir la profundidad de la anestesia. Por ejemplo, si una taquicardia sinusal está presente, comprobar si medicamentos para el dolor y / o anestesia son adecuados. </li><li> Infundir 4,3 mg / kg de amiodarona en 500 ml venofundin 6% por vía intravenosa. </li><li> Monitorear el ritmo cardiaco por un 5 conduce ECG. </li><li> Afeitado y limpiar el cuello y trasera limzona b. </li><li> Insertar un catéter de Foley. </li></ol></li></ol></li></ol> 2. Ecocardiografía transtorácica <ol><li> Colocar el animal en decúbito lateral derecho. En cerdos Landrace como cerdos Dalland, sólo paraesternal (eje largo y corto) pueden obtenerse. Debido a la forma del tórax, la adquisición vista apical no es factible. </li><li> Oriente y obtener paraesternal eje largo en 2D (modo B). Determine las dimensiones del VI en diástole y sístole final en modo-M. </li><li> Girar la sonda de eco 90 ° en sentido horario, mientras que el mantenimiento de su posición paraesternal para adquirir los puntos de vista de eje corto LV en los niveles de la válvula mitral, el músculo papilar y el ápice. El eje corto del músculo papilar y el ápice puede requerir la colocación de la sonda del eco de uno o dos espacios intercostales inferiores respecto a la posición a corto en eje de la válvula mitral. </li></ol> 3. Quirúrgica Acceso Preparación y Vascular <ol><li> Disinfect las áreas quirúrgicas con yodo 2% y usar paños quirúrgicos estériles para cubrir las partes no estériles de la de cerdo. </li><li> Haga una incisión medial en el cuello. Pasar la línea alba para minimizar el daño muscular y sin rodeos acercarse a la arteria carótida y la vena yugular interna junto a la tráquea. </li><li> Aislar cuidadosamente la arteria carótida y la vena yugular interna. Asegúrese de que el nervio vago está en buen estado. Coloque suturas Vicryl 2-0 alrededor de ambos buques para ganar el control de buques. Lograr el acceso arterial mediante canulación de la arteria carótida interna con una vaina 8F utilizando la técnica de Seldinger. Fijar la funda a la arteria, asegúrese de que la arteria no está totalmente ocluida por la sutura. El acceso venoso puede ser adquirido por canulación de la vena yugular con una vaina 9F también usando la técnica de Seldinger. Antes de fijar la vaina asegúrese de que la vena se liga. Alternativamente, la arteria femoral también puede utilizarse para el acceso arterial. </li><li> Administrar 100 IE / kg de heparina inmediatamente después de la inserción de la vainaHs para inhibir la formación de trombos. </li><li> Para una medición de la presión arterial estable y constante, canular una de las arterias más pequeñas en una de las extremidades posteriores haciendo una pequeña incisión encima de la arteria. La arteria se encuentra justo debajo de la piel, las pulsaciones se puede sentir a través de la piel. Aislar la arteria de su tejido circundante. Coloque 2 suturas Vicryl 2-0 alrededor del barco, 1 proximal y distal 1. Ligar el lado distal e insertar una cánula iv 18 G y asegure firmemente conectar la presión. </li></ol> 4. Presión Invasiva Análisis del bucle de volumen <ol><li> Insertar un catéter Swann-Ganz (SG) a través de la vaina previamente colocado en la vena yugular interna. </li><li> Conecte un dispositivo de gasto cardíaco a la parte de la SG, que culmina en el lumen proximal. </li><li> Inyectar 5 ml de solución salina 0,9% en el lumen proximal de la SG y medir el gasto cardíaco; repetir esto tres veces y promediar los índices. </li><li> Calibre el sistema PV utilizando la anteriormentedeterminado el gasto cardíaco. </li><li> Inserte el catéter 7F conductancia a través de la arteria carótida en el ventrículo izquierdo bajo guía fluoroscópica. </li><li> Seleccione el segmento más grande presente en la LV para mediciones de volumen y realizar una línea de base escanear bajo apnea. </li><li> Una vez completada la calibración del volumen, ficha 10 a 15 latidos bajo apnea. </li><li> Retire la SG y colocar un catéter de balón en la vena cava inferior a nivel de la membrana bajo guía fluoroscópica. </li><li> Realice una reducción de la precarga mediante el inflado del globo bajo la apnea y registrar las correspondientes PV-Loops. </li></ol> 5. Intracoronaria de presión y medida del caudal <ol><li> Diluir la nitroglicerina en una concentración de 100 g / ml y diluir la adenosina en una concentración de 30 mg / ml. </li><li> Colocar un catéter guía 8F en el ostium de la arteria coronaria izquierda. </li><li> Coloque el cable de presión / flujo combinado en la parte proximal de la coronaria izquierda ArterY. </li><li> Administrar 200 mg de nitroglicerina intracoronaria y normalizar la presión distal (Pd), medido por el alambre, con la presión arterial. </li><li> Coloque el cable en la parte media de la arteria descendente anterior izquierda (LAD). </li><li> Inicie la medición de presión de la línea de base y el flujo. Inducir hiperemia administrando 60 mg de adenosina intracoronaria, enjuague con 2 ml de solución salina y medir la presión y el flujo hiperémico. Espere a que el flujo de restaurar a los valores basales. Repita la medición dos veces. </li><li> Infundir otra nitroglicerina intracoronaria 200 mg y repita los pasos 1,6 y 1,7 para la arteria coronaria circunfleja izquierda. </li></ol> 6. Inducción de MI <ol><li> Coloque el catéter desfibrilación intracardiaca en el ventrículo derecho utilizando la vaina venosa. Los electrodos distales deben estar en el ápex del ventrículo, los electrodos proximales en la aurícula y / o en la vena cava superior. Conecte el catéter al desfibrilador y ponerlo a 50J. </li><li> Medir el diámetro de la LAD distal de la segunda diagonal (D2) en AP y LAO 30 ° vista. </li><li> Elija un balón de angioplastia con un diámetro de acuerdo con el diámetro de la parte distal de la LAD D2 (Figura 1). </li><li> Coloque un alambre guía a través del catéter guía distal de la ADA. </li><li> Haga avanzar el catéter de globo sobre el alambre guía. Coloque el globo distal del D2. </li><li> Administrar 30 IE / kg de heparina. </li><li> Inflar el globo hasta que la presión coincida con el diámetro adecuado de la LAD. </li><li> Verifique la oclusión total de la LAD por angiografía (Figura 1). </li><li> Cubra el campo de trabajo estéril y la herida en el cuello con telas oscuras estériles. Libere el pecho de cualquier cobertura para que esté disponible para las compresiones en el pecho o la desfibrilación transtorácica. </li><li> Comprobar la presión en el globo durante los próximos 90 min y restaurar la presión si es necesario. </li><li> En caso de fibrilación ventricular:<ol><li> Comenzar inmediatamente las compresiones torácicas con una frecuencia de 100/min. </li><li> Administrar 300 mg de amiodarona por vía intravenosa como un bolo rápido (~ 1 min). </li><li> Comience desfibrilación intracardiaca, dar choques de 50 J. </li><li> Después de 5 choques sin éxito, reinicie las compresiones torácicas. Cambie la desfibrilación intracardiaca a la desfibrilación transtorácica y choque con 150 J. En caso de shock sin éxito, cambiar a 200 J. </li><li> Si es necesario, administrar otra dosis de 150 mg amiodaron y / o 1 mg de adrenalina. Repita adrenalina dos veces con intervalos de 3-5 minutos, cuando sea necesario. </li><li> Continúe las compresiones torácicas, intercalados con desfibrilación transtorácica </li></ol></li></ol> Terminando el procedimiento quirúrgico (para seguimiento a largo plazo) <ol><li> Después de 90 min cheque por angiografía si el LAD es todavía totalmente ocluida. </li><li> Administrar otro 30 IE / kg de heparina y desinflar el globo. Compruebe si la reperfusión. Quite el globo desinflado con la orientacióning catéter de la vaina de la carótida. </li><li> Retire con cuidado la vaina arterial y sujeta la arteria carótida inmediatamente con una pinza de anastomosis (Figura 1). Uso continúa puntos (6-0 prolene) para cerrar la arteria carótida. Retire la abrazadera y compruebe si hay fugas. </li><li> Retire el catéter desfibrilación interna y quitar la funda de la vena yugular interna. Ligar proximal de la entrada de la vaina. </li><li> Cierre el tejido subcutáneo y la piel del cuello en dos capas usando Vicryl 2-0. </li></ol> 7. Imagen de Resonancia Magnética Cardiaca <ol><li> Colocar el animal en la cabeza camilla por primera vez en la posición supina con anestesia continua. </li><li> Coloque un phased-array bobina cardíaca dedicado sobre el pecho del animal. </li><li> Para la planificación de imagen obtener imágenes de scouts en el eje corto y de dos cámaras eje largo. </li><li> Adquirir ECG-gated-estado de equilibrio precesión libre (SSFP) cine de eje corto (desde el ápice hasta la base de LV) y dos chamber vistas largo de los ejes. </li><li> Realce tardío de gadolinio (RTG) se puede adquirir mediante una recuperación de la inversión 3D-turbo-gradiente-eco-técnica de 15 minutos después de la dosis doble inyección de un bolo iv de un agente de contraste gadolinio basada. </li><li> Realizar análisis fuera de línea con el software validado de los parámetros funcionales. Evaluar la fracción de eyección ventricular izquierda (FEVI), masa del VI, el volumen diastólico final, el volumen sistólico final, el volumen sistólico, el gasto cardíaco y la masa de la cicatriz. </li></ol> 8. Final del Estudio y tamaño del infarto <ol><li> Al final del estudio, seguir los protocolos 1-5 y 7 para adquirir el seguimiento de las mediciones. </li><li> Hacer una mediana de 30-40 cm incisión justo debajo de la horquilla esternal a un punto justo debajo del apéndice xifoides. Avanza a través de la línea alba hasta el esternón. Dividir el xifoides y usar tijeras Klinkenberg para separar el esternón posterior del pericardio con precaución. Después de usar las tijeras sin rodeos continuar aún más la separación. Realice una esternotomía by por ejemplo, utilizando un martillo y un cuchillo Lebsch. Sangrado de la médula ósea se reduce al mínimo por el roce de cera de hueso en la médula ósea. Abra el tórax con un retractor de esternón. </li><li> Introduzca el espacio pleural tercera y localizar la vena cava inferior en el mediastino. </li><li> Humanamente eutanasia al animal cortando la vena cava inferior bajo anestesia profunda. Eliminar la sangre con un dispositivo de succión. Coloque una batería de 9 V en el ápice para inducir la fibrilación ventricular. </li><li> Después de la escisión del corazón, cortar el derecho y el ventrículo izquierdo en cinco rebanadas de base hasta el ápice y se incubaron en 1% de cloruro de trifenil-tetrazolio disuelto en 0,9% de solución salina a 37 ° C durante 15 min. A continuación, lavar las rebanadas en 0,9% de solución salina y fotografiar las rebanadas de ambos lados. </li></ol>

<ol>
	<li>Roger, V. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heart+disease+and+stroke+statistics-2012+update:+a+report+from+the+American+Heart+Association.">Heart disease and stroke statistics-2012 update: a report from the American Heart Association.</a> Circulation. 125 (1), (2012).</li><li>Mosterd, A., Hoes, A. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinical+epidemiology+of+heart+failure.">Clinical epidemiology of heart failure.</a> Heart. 93 (9), 1137-1146 (1136).</li><li>vander Spoel, T. I. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+relevance+of+pre-clinical+studies+in+stem+cell+therapy:+systematic+review+and+meta-analysis+of+large+animal+models+of+ischaemic+heart+disease.">Human relevance of pre-clinical studies in stem cell therapy: systematic review and meta-analysis of large animal models of ischaemic heart disease.</a> Cardiovasc. Res. 91 (4), 649-658 (2011).</li><li>Crick, S., Sheppard, M., Ho, S., Gebstein, L., Anderson, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anatomy+of+the+pig+heart+:+comparisons+with+normal+human+cardiac+structure.">Anatomy of the pig heart : comparisons with normal human cardiac structure.</a> J. Anat. 193 (1), 105-119 (1998).</li><li>Stubhan, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+cardiovascular+and+ECG+parameters+in+the+normal,+freely+moving+G&#246;ttingen+Minipig.">Evaluation of cardiovascular and ECG parameters in the normal, freely moving G&#246;ttingen Minipig.</a> J. Pharmacol. Toxicol. Methods. 57 (3), 202-211 (2008).</li><li>Heusch, G., Skyschally, A., Schulz, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+in-situ+pig+heart+with+regional+ischemia/reperfusion+-+ready+for+translation.">The in-situ pig heart with regional ischemia/reperfusion - ready for translation.</a> J. Mol. Cell Cardiol. 50 (6), 951-963 (2011).</li><li>Skyschally, A., van Caster, P., Iliodromitis, E. K., Schulz, R., Kremastinos, D. T., Heusch, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ischemic+postconditioning:+experimental+models+and+protocol+algorithms.">Ischemic postconditioning: experimental models and protocol algorithms.</a> Basic Res Cardiol. 104 (5), 469-483 (2009).</li><li>Iekushi, K., Seeger, F., Assmus, B., Zeiher, A. M., Dimmeler, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+cardiac+microRNAs+by+bone+marrow+mononuclear+cell+therapy+in+myocardial+infarction.">Regulation of cardiac microRNAs by bone marrow mononuclear cell therapy in myocardial infarction.</a> Circulation. 125 (14), 1765-1773 (2012).</li><li>Sijbesma, R. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reversible+polymers+formed+from+self-complementary+monomers+using+quadruple+hydrogen+bonding.">Reversible polymers formed from self-complementary monomers using quadruple hydrogen bonding.</a> Science. 278 (5343), 1601-1604 (1997).</li><li>van Slochteren, F. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Advanced+measurement+techniques+of+regional+myocardial+function+to+assess+the+effects+of+cardiac+regenerative+therapy+in+different+models+of+ischaemic+cardiomyopathy.">Advanced measurement techniques of regional myocardial function to assess the effects of cardiac regenerative therapy in different models of ischaemic cardiomyopathy.</a> Eur. Heart J. Cardiovasc. Imaging. 13 (10), 808-818 (2012).</li><li>McCall, F. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Myocardial+infarction+and+intramyocardial+injection+models+in+swine.">Myocardial infarction and intramyocardial injection models in swine.</a> Nature Protoc. 8 (7), 1479-1496 (2012).</li><li>Roussi, J., Andre, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Platelet+functions+and+haemostasis+parameters+in+pigs:+absence+of+side+effects+of+a+procedure+of+general+anaesthesia.">Platelet functions and haemostasis parameters in pigs: absence of side effects of a procedure of general anaesthesia.</a> Thromb Res. 81 (3), 297-305 (1996).</li></ol>

Este trabajo fue apoyado por el HGG Group BV (SK), el &quot;Wijnand M. Pon Stichting&quot; (CS, SK). Esta investigación forma parte del Proyecto P1.04 SMARTCARE del Biomédica Materiales instituto, cofinanciado por el Ministerio holandés de Asuntos Económicos, Agricultura e Innovación (SJL, JG). Todos los autores han informado de que no tienen relaciones a revelar.

Oclusión con balón intracoronario de la LAD proporciona un modelo preclínico MI reproducible y consistente en los cerdos que se puede utilizar para investigar la seguridad y la eficacia de nuevas terapias cardiovasculares que imita estrechamente la situación humana. Como se muestra en la Figura 5, el modelo de infarto de isquemia / reperfusión presentado proporciona la plataforma que se puede adaptar aún más para investigar diferentes fases de MI y la remodelación post-IM, mientras que la lesión inicial isquemia / reperfusión es idéntico para ambos. El éxito del protocolo descrito aquí descrito depende de la isquemia miocárdica como la fase más crítica del protocolo. La correcta colocación del globo distal a la segunda rama diagonal de la LAD es crucial para alcanzar el tamaño del infarto adecuada garantizando al mismo tiempo una alta tasa de supervivencia. Sobre la base de este modelo MI, se observó un ~ 15% la tasa de mortalidad, mientras extensa segmentos medio y apical del anterior, septal y de inferior calidado paredes estaban infartado como se ve en la CMR y la tinción TTC (Figuras 2A y 2B). La duración de la isquemia se puede adaptar de acuerdo con el tamaño del infarto deseada. Aunque hemos utilizado los cerdos Landrace en este protocolo, cerdos enanos (es decir, cerdos minipigs Göttingen) por lo general requieren mayor duración de la isquemia miocárdica (por ejemplo, 150 min oclusión). Resultados de análisis en los estudios preclínicos y clínicos MI se basa a menudo en la FEVI. Aunque menor FEVI ha sido firmemente asociado con un mayor riesgo de mortalidad cardiovascular, que sigue dependiendo de los parámetros hemodinámicos como la precarga 9. Podría decirse que, dado que en promedio se infartado sólo el 10-15% de la LV, varias limitaciones conceptuales y prácticas están relacionadas con FEVI ser una medida global de la función sistólica del VI en lugar de reflejar la mejora local de 10. Por lo tanto, las medidas propuestas de resultado utilizada en este modelo arrojan luz sobre diferentes aspectos de la<html> MI y post-MI remodelación proporcionando así a los investigadores los medios para evaluar con precisión la eficacia de las nuevas terapias en varios niveles. Para optimizar la traducción de los modelos preclínicos para la práctica clínica, elegimos utilizar grandes cerdos en lugar de cerdos enanos. Mediciones hemodinámicas, las dosis de medicamentos y dispositivos quirúrgicos pueden ser fácilmente intercambiados con la práctica clínica. En comparación con los cerdos enanos, cerdos grandes ganan relativamente mucho peso. Esto puede causar un problema en el largo plazo de seguimiento, con respecto a la comparabilidad de los resultados de serie. Femenino cerdos Landrace Dalland pesan aproximadamente 70 kg a una edad de 6 meses. Para evitar el aumento de peso abundantes durante el periodo de seguimiento, los animales se mantienen en una dieta restringida. Los cerdos reciben 750 g de encargo alimento bajo en calorías (que contiene: proteínas 15,6%, grasa 2.0%, las fibras de 14,8%, cenizas 8,8%, 0,9% de calcio, fósforo 0,57%, magnesio 0,29%, y el potasio 0,18%) dos veces al día y ganar alrededor de 10 kg de peso en 4 semanas. e_content &quot;&gt; McCall y colaboradores han publicado previamente un protocolo similar para el infarto de miocardio en los cerdos 11. existe solapamiento considerable entre este protocolo y la de ellos, haciendo hincapié en la preferencia por la DA en lugar de la arteria circunfleja izquierda (LCX) o de la arteria coronaria derecha (RCA ). En nuestra experiencia, hay una menor medida, del tamaño del infarto del ventrículo total de izquierda usando la LCX mientras que el infarto de RCA se acompaña con una mayor probabilidad de trastornos de la conducción no deseados (es decir, disfunción del nodo sinusal, disfunción nódulo AV). Una diferencia entre los dos protocolos se refiere al uso de una mayor inhibición plaquetaria farmacológico en este protocolo, como hemos observado tasas más altas de no reflujo en base a la formación de trombos, como resultado de 90 min de la hemostasia en la arteria coronaria ocluida. Esta observación está en consonancia con hipercoagulabilidad conocido observó en los cerdos 12. Aunque McCall propuso la utilización de un solo, a dosis altas, en bolo de heparina, thiprotocolo de s se basa en el uso de heparina en múltiples dosis más bajas repartidas durante toda la cirugía para minimizar las complicaciones trombóticas. En resumen, presentamos un modelo MI porcino que permite a los investigadores a hacer uso de un modelo de gran práctica efectiva, reproducible y sobre todo animal de la enfermedad humana para estudiar nuevas terapias como un paso esencial hacia un primer ensayo clínico en humanos.

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Sanne Jansen of Lorkeers
to:
Sanne J. Jansen of Lorkeers

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The middle initial J. has been added to author Sanne Jansen of Lorkeers.

Erratum: Myocardial Infarction and Functional Outcome Assessment in Pigs

El infarto agudo de miocardio (IAM) y sus secuelas a largo plazo como la insuficiencia cardíaca crónica (ICC) afectan profundamente el pronóstico y la calidad de vida del paciente, por no hablar de las restricciones impuestas a los altos costos de nuestros recursos sanitarios disponibles 1. La prevalencia de ICC en el mundo occidental se estima en 1.2%, de los cuales ~ 60% de los casos son consecuencia de IAM como causa primaria 2. Sólo en los EE.UU., alrededor de 5,7 millones de pacientes sufren de CHF que representa aproximadamente $ 30 mil millones en costos anuales de atención médica en el año 2008, con un triplicado predicho en los costos se elevan a $ 97 mil millones al año en 2030 1. Tomados en conjunto, estos números tienen un fuerte argumento a favor de la desarrollo de nuevos tratamientos cardioregenerative que, para la traducción rápida, se basan en un modelo animal de gran tamaño reproducible y fiable infarto de miocardio que imita con precisión el escenario humano. Los cerdos (Sus scrofa) se utilizan cada vez en cardiovascuinvestigación lar para las pruebas farmacológicas y toxicológicas 3. Uno de los rasgos responsables de este éxito como herramienta de investigación translacional es su similitud en la función cardíaca y la anatomía con el corazón humano de 4,5. Por ejemplo, la relación de cerdo de corazón a peso corporal, el tamaño cardíaco y distribución de la anatomía de las arterias coronarias han demostrado ser muy similar al hombre 4. Por otra parte, se ha informado de metabolismo de los cardiomiocitos, las propiedades electrofisiológicas y respuesta a un insulto isquémico, tales como IAM para mostrar altos niveles de acuerdo con la situación humana 6,7. En última instancia, para cumplir con los criterios anteriormente descritos, un MI-protocolo estandarizado que produce robusto y sostenible MI para el ensayo de nuevos fármacos en investigación (IND) es necesario. A continuación, presentamos un modelo de este tipo estandarizado que utiliza un 90 min a tórax cerrado oclusión coronaria con balón de la arteria descendente anterior izquierda (LAD), seguido de reperfusión, creando así el infarto reproducible enmiocardio que cubre el anteroapical, septal y paredes inferoseptal del ventrículo izquierdo.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="726">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:216px;">0.9% Saline</td>
			<td style="width:224px;">Braun</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:216px;">6-0 Prolene</td>
			<td style="width:224px;">Ethicon</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:216px;">Acetylsalicylic acid</td>
			<td style="width:224px;">80 mg (Ratiopharm)</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:216px;">Adenosine</td>
			<td style="width:224px;">3mg/ml apotheek UMCU</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:216px;">AdVantage PV loop system</td>
			<td style="width:224px;">Transonic Scisence</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="43" rowspan="2" style="height:43px;width:216px;">Amiodarone</td>
			<td style="width:224px;">Cordarone I.V. (Sanofi)</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:224px;">Amiodaron HCl (PCH)</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Amoxicilline/ clavulaanzuur</td>
			<td style="width:224px;">500/50mg (Sandoz)</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:216px;">Atropinesulfaat</td>
			<td style="width:224px;">0,5 mg/ml (PCH)</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:216px;">Bone Marrow Wax</td>
			<td style="width:224px;">Syneture</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:216px;">Cardiac Defibrillator</td>
			<td style="width:224px;">Philips</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:216px;">Clopidogrel</td>
			<td style="width:224px;">Clopidrogel 75A (Apothecon B.V.)</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:216px;">Contrast agent</td>
			<td style="width:224px;">Telebrix</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:216px;">Endotracheal tube</td>
			<td style="width:224px;">Covidien</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Fentanyl patch</td>
			<td style="width:224px;">Durogesic&#174; 25 mcg/h (Janssen-Cilag)</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:216px;">Fogarty catheter</td>
			<td style="width:224px;">Edwards Lifesciences</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:216px;">Gadolinium</td>
			<td style="width:224px;">Gadovist</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:216px;">Guidewire</td>
			<td style="width:224px;">Abbott</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:216px;">Heparin</td>
			<td style="width:224px;">Leo</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:216px;">I.V. cannula</td>
			<td style="width:224px;">Abbocath&#174; (Hospira venisystems)</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:216px;">Iodine</td>
			<td style="width:224px;">Jodiumtictuur 2% (Eurovet)</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:216px;">Ketamine</td>
			<td style="width:224px;">Narketan&#174; 10 V&#233;toquinol</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:216px;">Midazolam</td>
			<td style="width:224px;">5mg/ml (Actavis)</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:216px;">Nitroglycerin</td>
			<td style="width:224px;">1mg/ml Pohl Boskamp</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:216px;">Pancuronium bromide</td>
			<td style="width:224px;">2mg/ml</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:216px;">Seldinger vascular sheath 8F</td>
			<td style="width:224px;">Arrow</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:216px;">Sufentanil&#160;</td>
			<td style="width:224px;">50 mcg/ml (Sufentanil-hameln)</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:216px;">Swann-Ganz catheter</td>
			<td style="width:224px;">Criticath ref 680078 (Argon)</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:216px;">Synolux</td>
			<td style="width:224px;">250 mg (Pfizer)</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:216px;">Tetra-polar catheter</td>
			<td style="width:224px;">Transonic Scisence</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:216px;">Thiopental</td>
			<td style="width:224px;">0,5 g (Inresa)</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:216px;">Triphenyl-tetrazolium chloride</td>
			<td style="width:224px;">Merck</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:216px;">Venofundin</td>
			<td style="width:224px;">Braun</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:216px;">Vicryl 2-0</td>
			<td style="width:224px;">Ethicon</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:216px;">Volcano ComboMap system</td>
			<td style="width:224px;">Volcano</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

myocardial infarction and functional outcome assessment in pigs

Introducción de la terapéutica cardiovascular recién descubiertos en los ensayos de primera en-hombre depende de un plan de trabajo ético y jurídico estrictamente regulado. Un requisito importante es una buena comprensión de todos los aspectos de seguridad y eficacia obtenidos en un modelo animal de gran tamaño que válidamente refleja el escenario humano de infarto de miocardio (IM). Los cerdos son ampliamente utilizados en este respecto, ya que su tamaño cardiaco, la hemodinámica, y la anatomía coronaria están cerca de la de los humanos. A continuación, presentamos un protocolo eficaz para utilizar el modelo MI porcina utilizando un tórax cerrado oclusión coronaria con balón de la arteria descendente anterior izquierda (LAD), seguido de reperfusión. Este enfoque se basa en 90 min de isquemia miocárdica, la inducción de gran miocardio del ventrículo izquierdo de la anterior, septal y paredes inferoseptal. Por otra parte, se presentan los protocolos para diferentes medidas de resultado que proporcionan una amplia gama de información sobre el corazón, como la cardiaca sistólica y diastólica, hemodynamics, la velocidad del flujo coronario, la resistencia microvascular, y el tamaño del infarto. Este protocolo se puede adaptar fácilmente para satisfacer los requisitos específicos de estudio para la validación de nuevos productos biológicos cardioregenerative en diferentes etapas (es decir, inmediatamente después de la lesión isquémica aguda, en el entorno subaguda o incluso en el MI crónica vez la formación de cicatrices se ha completado). Por tanto, este modelo proporciona una herramienta útil para el estudio de la traducción MI, remodelado adverso posterior, y el potencial de los agentes cardioregenerative novedosos.

Mortalidad y tamaño del infarto En nuestro centro, de 32 cerdos (Mujer Dalland Landrace, 6 meses de edad, ~ 70 kg) que fueron sometidos a este protocolo MI, cinco (15,6%) fallecieron debido a la fibrilación ventricular refractaria durante la isquemia. Este protocolo crea un infarto que cubre aproximadamente el 10-15% del ventrículo izquierdo, situado en el anteroseptal, septal y paredes inferoseptal (Figura 2A). Si se justifica la evaluación no invasiva de serie del tamaño del infarto, realce tardío de gadolinio (RTG) en CMR se puede utilizar para seguir el área de infarto no viable con el tiempo (Figura 2B). La función cardiaca y Remodelación Cuatro semanas después de MI, los parámetros globales y regionales que reflejan la función cardíaca deben ser disminuidos en comparación con los valores basales saludables. Específicamente, la fracción de eyección del VI (FEVI) debería disminuir a aproximadamente ~ 35-45% las cuatro semanas después-MI. Además de la función sistólica global,varios parámetros que reflejan post-IM remodelado adverso también se pueden medir, tales como LV morfología y diámetros con CMR y la ecocardiografía (Figuras 3A y 3B). Cuatro semanas después de un IM, un aumento de volumen diastólico final (EDV) como un signo de remodelado adverso se puede esperar (figuras 3A y 3B). Parámetros de flujo y de presión coronarias La angiogénesis y la formación de nuevos capilares a menudo son considerados como objetivos importantes del tratamiento en la enfermedad isquémica del corazón 8. Evaluación de la resistencia microvascular puede basarse indirectamente en la medición combinada de la presión intracoronaria y la velocidad del flujo. Se muestra la presión Representante y medición de la velocidad de flujo en condiciones e hiperemia máxima normal en la figura 4. Cuatro semanas después de MI, la resistencia microvascular hiperémica debe aumentar en la arteria coronaria relacionada con el infarto (LAD) en comparacióncon la situación inicial 8. <img alt="Figura 1" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/51269/51269fig1highres.jpg" src="/files/ftp_upload/51269/51269fig1.jpg" /> . Figura 1 modelo MI basa en la oclusión con balón LAD (A) equipo quirúrgico estándar con:. 1) pinzas de toallas; 2) los mosquitos; 3) pinzas de disección; 4) recipiente redondo; 5) los titulares de aguja (fina y rugosa); 6) Klinkenberg tijera; 7) tijeras de disección (recto y curvo); 9) pinzas (De-Bakey, fina y rugosa); 10) abrazadera de la manguera; 11) pinza de anastomosis; 12) gasas; 13) el lápiz electro; 14) Soporte de bisturí; 15) Dreesman (succión); 16) de retracción; 17) los portalámparas. (B) anterior izquierda vista fluoroscópica oblicua de la LAD y LCX. (C) Después de visualizar la segunda rama diagonal, coloque los dos marcadores radiopacos (ver recuadro, puntas de flecha negras) del balón justo distal del D2. Inflatcorreo y asegúrese de que el flujo sanguíneo coronario se bloquea con éxito mediante la inyección de contraste (ver asterisco). Plomo desfibrilador intracardíaco se puede ver en el ventrículo derecho (ver la punta de flecha blanca). LAD denota arteria descendente anterior; LCX denota la arteria circunfleja izquierda; LAO denota oblicua anterior izquierda; AP denota anterior vista posterior; D1 denota primera rama diagonal; D2 denota segunda rama diagonal. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/51269/51269fig1highres.jpg" target="_blank">Haz clic aquí para ver la imagen más grande.</a> <img alt="Figura 2" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/51269/51269fig2highres.jpg" src="/files/ftp_upload/51269/51269fig2.jpg" /> Figura 2. El tamaño del infarto después de un IM. (A) La oclusión con balón de 90 min de la DA lleva a daño extenso del miocardio y la formación de cicatrices (color blanco), visualizado por tinción TTC a 1 mes de seguimiento.(B) la distribución del infarto Esquema muestra que el infarto se encuentra en la parte anterior, los segmentos anteroseptal y inferoseptal del corazón. (C, D) mejoradas de eje corto y largo tardía de gadolinio imágenes CMR muestran la extensa cicatriz del infarto (señal blanca, ver puntas de flecha negras) localizada en la zona anterior, los segmentos anteroseptal y inferoseptal del corazón. LGE-CMR denota tarde gadolinio resonancia magnética cardiaca. La barra de escala indica 3 cm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/51269/51269fig2highres.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver la imagen más grande.</a> <img alt="Figura 3" fo:content-width="4in" src="/files/ftp_upload/51269/51269fig3highres.jpg" width="400" /> Figura 3. Evaluación de la función cardiaca en modelos de isquemia MI. (A) Representante CMR imágenes cine-loop al final de diástole y sístole final que presentan un deterioro funcional de la infsegmentos de la cicatriz del CRAT. (B) Imagen M-Modo de 2D eje largo paraesternal por ecocardiografía, que muestra dilatación del ventrículo izquierdo (aumento de LVIDd) 1 mes después de un IM, así como el deterioro funcional (ausencia de engrosamiento septal). EDV denota el volumen diastólico final; ESV denota el volumen sistólico final; LVIDd denota ventricular izquierda diámetro interno en la diástole y LVIDs denota diámetro interno del ventrículo izquierdo en sístole. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/51269/51269fig3highres.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver la imagen más grande.</a> <img alt="Figura 4" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/51269/51269fig4highres.jpg" src="/files/ftp_upload/51269/51269fig4.jpg" /> Figura 4. Intracoronaria de presión y velocidad de flujo derivado parámetros. Presión intracoronaria y grabaciones de velocidad de flujo utilizando el Combowire mostrando valores (A) de referencia anteriores al MI con altos response hiperemia (punta de flecha negro). (B) 1 mes después de un IM, la arteria del infarto (LAD) tiene una respuesta hiperémica disminución en la velocidad de flujo coronario (puntas de flecha negras). Como resultado, la presión y la velocidad del flujo se reducen parámetros derivados (HMR) o el flujo de reserva de velocidad (CFR) en comparación con la línea base. BAPV denota la velocidad pico media basal; pAPV denota la velocidad pico pico promedio; CFR denota la reserva de flujo coronario; HMR denota resistencia microvascular hiperémica. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/51269/51269fig4highres.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver la imagen más grande.</a> <img alt="La figura 5" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/51269/51269fig5highres.jpg" src="/files/ftp_upload/51269/51269fig5.jpg" /> Figura 5. Presentación de las diferentes diseños de estudio. (A) Esquema de varios posibles diseños de estudios para validar los nuevos fármacos en investigación(IND) en diversas etapas de MI que utilizan este modelo de cerdo LAD MI. Dependiendo de la fase elegida de MI que se encuentra bajo investigación, el análisis funcional puede realizarse justo antes de la asignación al tratamiento como el valor de la línea de base y la evaluación de la zona de riesgo. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/51269/51269fig5highres.jpg" target="_blank">Haz clic aquí para ver la imagen más grande.</a>

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Myocardial Infarction and Functional Outcome Assessment in Pigs

Este protocolo describe el modelo porcino infarto de miocardio (IM) con un 90 min a tórax cerrado oclusión coronaria con balón de la arteria descendente anterior izquierda (LAD), seguido de reperfusión. Por otra parte, el protocolo para varios parámetros de resultado, como la función cardiaca, hemodinámica, la resistencia microvascular, y el tamaño del infarto, también se presentan.

Infarto de miocardio y la evaluación de resultados funcionales en los cerdos

Introduction of newly discovered cardiovascular therapeutics into first-in-man trials depends on a strictly regulated ethical and legal roadmap. One ...

myocardial-infarction-and-functional-outcome-assessment-in-pigs

Research

JoVE Journal

Medicine

27.6K vistas.  University Medical Center Utrecht.  Este protocolo describe el modelo porcino infarto de miocardio (IM) con un 90 min a tórax cerrado oclusión coronaria con balón de la arteria descendente anterior izquierda (LAD), seguido de reperfusión. Por otra parte, el protocolo para varios parámetros de resultado, como la función cardiaca, hemodinámica, la resistencia microvascular, y el tamaño del infarto, también se presentan. 