Этот метод является надежным для изучения генерации инфаркта миокарда и отличной платформой для изучения восстановления сердца после, например, трансплантации стволовых клеток. Основным преимуществом этой процедуры является то, что она может быть использована для создания однородных размеров инфаркта в быстрой, легкой и воспроизводимой манере. Новые экспериментальные вмешательства, такие как фармакологические, или ткани инженерии на основе стратегий, могут быть протестированы в этой модели.
И успешно проверить, что варианты могут быть дополнительно подтверждены в крупных моделей животных. После подтверждения отсутствия реакции на болевой рефлекс в анестезированы 27 грамм, 14 недель мышь, использовать триммер для волос, чтобы удалить мех груди и шеи животного и поместить мышь в положение на спине на подогретой площадке. Лента задние и протяжаемые конечности в положении распространения орла и использовать последовательные povidone-йод и 80% этанол скрабы для дезинфекции открытой кожи.
Сделайте разрез кожи средней линии от нижней трети грудины до подбородка, и используйте изогнутые миппы, чтобы тщательно отделить мышцы вокруг шеи, чтобы разоблачить трахею. Используйте микро ножницы для выполнения трахеотомии между вторым и третьим кольцами хряща. И установите вентилятор на частоту вентиляции 110 в минуту с приливным объемом 0,5 миллилитров.
Затем вставьте пластик, 20 калибровочных канюле, подключенных к вентилятору в трахею. Далее используйте прижигать правую мышцу пекторали от ее стернального происхождения между третьим и седьмым ребрами. И использовать боковые угловые пружинные ножницы, чтобы сократить четвертый до шести ребер как можно ближе к грудине.
Вскрыть основные соединительной ткани, чтобы получить четкое представление в грудной полости, прижигание молочной артерии, чтобы остановить кровотечение по мере необходимости. Вставьте мини-золото пятно ретрактор для распространения ребер и держать грудную полость открытой. И использовать тупые типсы, чтобы открыть перикард, чтобы разоблачить сердце.
Используйте тупой стержень, чтобы поднять сердце из грудной полости и уменьшить напряжение ретрактора, чтобы уменьшить отверстие груди и сохранить сердце от падения обратно в брюшную полость. Предварительно охладить криопроб диаметром три миллиметра в течение 10 секунд, и применить криопробе на внутренней стенке левого желудочка в течение 10 секунд для создания левого желудочка, криоинжурии инфаркт. Отсоедините криопробе от левой желудочковой стенки с комнатной температурой солевого орошения и reenlarge груди открытия с втягивателем.
Используйте стержень, чтобы аккуратно вернуть сердце в грудную полость и удалить ретрактор. Используйте 6-0 шов, чтобы соединить стернотомию с одним узлом. И использовать работает 6-0 шов, чтобы закрыть грудную полость.
Используйте 10 миллилитров шприц для эвакуации любого оставшегося воздуха из груди, прежде чем связывать узел и адаптировать кожу на хвостовой кромке перед использованием работает 5-0 шва, чтобы закрыть ткани до точки трахеи открытия. После уменьшения изофлюран и животное получает спонтанное дыхание удалить трахеальный катетер и закрыть трахеи разрез с одним 8-0 Шов. Замените мышцы брюшной шеи обратно в анатомическое положение над трахеей и завершите шов кожи.
Затем добавьте метамизол в питьевую воду для боли анальгезии в течение трех дней с ежедневным мониторингом животных в течение восьми недель. В криоинъюдных сердцах эхокардиография показывает значительно уменьшенную фракцию выброса и изменение дробной области, при этом функциональные нарушения наблюдаются с седьмого дня после операции до экспериментальной конечной точки в 56 дней. По оценке анализа цикла громкости давления, криоинфракция приводит к нарушению функции левого желудочка, что отражается как уменьшение объема инсульта, инсульта, сердечного выброса и предварительной нагрузки скорректированной максимальной мощности.
Экс-виво оптическое картирование флуоресцентного напряжения чувствительных окрашенных сердец демонстрирует блокировку электрической проводимости на границе травмы, указывая на местное электрическое разогретость. Гистологическое окрашивание трихромом Массона выявляет образование трансмуральной фиброзной ткани в месте травмы. Размер инфаркта может быть рассчитан путем измерения области шрама или средней линии рубцовой длины.
Кроме того, иммунофлюоресцентное окрашивание против маркера кардиомиоцитов и коллагена-I подтверждает наличие фиброзной ремоделирования и потерю кардиомиоцитов в месте травмы. Важно поддерживать одинаковую продолжительность контакта криопроблама каждого животного, так как разная продолжительность может привести к несочетаемым размеров. После освоения этот метод может быть выполнен в течение 20 минут, если он выполняется должным образом.
После просмотра этого видео вы должны иметь хорошее понимание того, как выполнить модель криоинджурии. Удачи в ваших экспериментах.
