Questo metodo è affidabile per studiare la generazione di infarto miocardico e un'eccellente piattaforma da utilizzare per indagare il recupero cardiaco dopo, ad esempio, il trapianto di cellule staminali. Il vantaggio principale di questa procedura è che può essere utilizzato per generare dimensioni infare uniformi in modo rapido, facile e riproducibile. Nuovi interventi sperimentali, come farmacologici, o le strategie basate sui tessuti, possono essere testati in questo modello.
E testa con successo che le opzioni possono essere ulteriormente confermate nei grandi modelli animali. Dopo aver confermato una mancanza di risposta al riflesso del dolore in un topo anestetizzato di 27 grammi e 14 settimane, utilizzare un trimmer per capelli per rimuovere la pelliccia del petto e del collo dell'animale e posizionare il mouse in posizione supina su un tampone riscaldato. Rastrettare gli arti posteriori e anteriori in una posizione di aquila diffusa e utilizzare povidone-iodio sequenziale e scrub all'80% di etanolo per disinfettare la pelle esposta.
Fai un'incisione della pelle della linea mediana dal terzo inferiore dello sterno al mento e usa le forcep curve per separare accuratamente i muscoli intorno al collo per esporre la trachea. Utilizzare micro forbici per eseguire una tracheotomia tra il secondo e il terzo anello di cartilagine. E impostare il ventilatore su una frequenza di ventilazione di 110 al minuto con un volume di marea di 0,5 millilitri.
Quindi, inserire una cannula di plastica calibro 20 collegata al ventilatore nella trachea. Successivamente, utilizzare il cautery per staccare il muscolo pettorale destro dalla sua origine sternale tra la terza e la settima costola. E usa forbici a molla angolate laterali per tagliare la quarta o la sei costole il più vicino possibile allo sterno.
Sezionare il tessuto connettivo sottostante per ottenere una visione chiara nella cavità toracica, cauterizzando l'arteria mammaria per arginare il sanguinamento se necessario. Inserire un mini riavvolgitore a macchia d'oro per stendere le costole e tenere aperta la cavità toracica. E usa le forcep smussate per aprire il pericardio per esporre il cuore.
Utilizzare un'asta smussata per sollevare il cuore dalla cavità toracica e diminuire la tensione del riavvolgitore per ridurre l'apertura del torace e per evitare che il cuore cada di nuovo nella cavità addominale. Pre-raffreddare una crioprobe di tre millimetri di diametro per 10 secondi e applicare la crioprobe sulla parete del ventricolo sinistro interno per 10 secondi per generare un infarto ventricolare sinistro, crioinjury. Staccare la crioprobe dalla parete ventricolare sinistra con irrigazione salina a temperatura ambiente e riargare l'apertura del torace con il riavvolgitore.
Utilizzare l'asta per riportare delicatamente il cuore alla cavità toracica e rimuovere il riavvolgitore. Utilizzare una sutura 6-0 per collegare la sternotomia con un singolo nodo. E usa una sutura 6-0 in esecuzione per chiudere la cavità toracica.
Utilizzare una siringa da 10 millilitri per evacuare l'aria rimanente dal torace prima di legare il nodo e adattare la pelle sul bordo caudale prima di utilizzare una sutura 5-0 in esecuzione per chiudere il tessuto fino al punto dell'apertura tracheale. Dopo aver ridotto l'isoflurane e l'animale ottiene la respirazione spontanea rimuovere il catetere tracheale e chiudere l'incisione tracheale con un 8-0 Sutura. Sostituire i muscoli ventrali del collo nella loro posizione anatomica sopra la trachea e completare la sutura cutanea.
Quindi, aggiungere metamizolo all'acqua potabile per l'analgesia del dolore per tre giorni con monitoraggio quotidiano degli animali per otto settimane. Nei cuori crioinjured l'ecocardiografia rivela una frazione di espulsione significativamente ridotta e un cambiamento di area frazionata, con compromissione funzionale osservata dal settimo giorno dopo l'intervento chirurgico fino all'endpoint sperimentale a 56 giorni. Come valutato dall'analisi del loop pressione-volume, la crioinfrazione porta a una funzione ventricolare sinistra compromessa che si riflette come una diminuzione del volume dell'ictus, del lavoro di ictus, dell'uscita cardiaca e della potenza massima regolata pre-carico.
La mappatura ottica ex-vivo dei cuori tinti sensibili alla tensione fluorescente dimostra un blocco della conduzione elettrica al confine della lesione, indicando un disaccoppiamento elettrico locale. La colorazione istologica con il tricromo di Masson rivela la formazione di tessuto fibrotico transmurale nel sito della lesione. La dimensione dell'infarto può essere calcolata misurando l'area della cicatrice infarto o la lunghezza della cicatrice della linea mediana.
Inoltre, la colorazione immunofluorescente contro un marcatore di cardiomiociti e collagene-I conferma la presenza di rimodellamento fibrotico e la perdita di cardiomiociti nel sito della lesione. È importante mantenere la stessa durata di contatto del crioproblema di ogni animale in quanto una durata diversa può portare a dimensioni infartua incongruenti. Una volta padroneggiata, questa tecnica può essere eseguita in 20 minuti se viene eseguita correttamente.
Dopo aver visto questo video dovresti avere una buona comprensione di come eseguire il modello di crioinjury. Buona fortuna per i tuoi esperimenti.
