Este protocolo es capaz de producir aneurismas aórticos torácicos robustos de tamaño y ubicación constantes en ratones y sirve como guía para un acceso seguro al pecho murino. Este protocolo es un método sencillo y consistente para producir aneurismas de la aorta torácica en ratones durante una cantidad razonable de tiempo en comparación con otros modelos. Después de confirmar un nivel adecuado de sedación en un ratón de seis machos de ocho a 10 semanas de edad, coloque el ratón en la posición de decúbito lateral derecho y pegue el brazo derecho rostralmente para que la pata delantera esté alineada con la nariz.
Tire de la cola caudalmente para crear una línea de tensión entre el brazo derecho y la cola, produciendo la extensión de la columna vertebral, y pegue la pierna izquierda en su posición natural. A continuación, pegue el brazo izquierdo ventralmente sobre la gasa enrollada. Antes de comenzar el procedimiento, utilice pinzas para afeitar el flanco izquierdo desde el hombro izquierdo hasta el abdomen izquierdo.
Utilice un aplicador con punta de algodón para cepillar la primera solución de betadyne, luego 70% de etanol sobre el sitio quirúrgico. Cuando la piel esté seca, coloque una cortina estéril sobre el animal. Haz una incisión lateral de dos centímetros en el punto medio del hemotórax y usa electrocauterización manual para dividir las capas musculares hasta que las costillas sean visibles.
Bajo aumento de 10 a 15x, cauterizar directamente una porción de dos milímetros entre las costillas y utilizar un aplicador de punta de algodón fino humedecido con solución salina en el espacio de las costillas con el fin de diseccionar en el espacio pleural a través de la porción cauterizada. Coloca una esponja mojada con solución salina, de tres por dos milímetros en el tórax para ayudar a colapsar el pulmón. Luego, usa tijeras para ensanchar la toracotomía hasta que el diafragma sea visible ventralmente y la incisión esté a varios milímetros de distancia de los músculos paraspinos dorsalmente.
Para exponer la aorta, coloque los retractores de las costillas en la incisión de toracotomía y retire cuidadosamente la esponja de la superficie del pulmón. Cubre el pulmón con una esponja de seis por cuatro milímetros humedecida con los extremos apuntando rostral y caudalmente y coloca un retractor pulmonar ancho y plano en la esponja. Luego, deslice suavemente el retractor ventralmente hasta que la aorta torácica descendente esté expuesta y use el número siete fórceps para diseccionar una sección de aproximadamente cinco milímetros del tejido conectivo y la grasa de la aorta.
Para aplicar la elastasa, primero, utilice una micropipeta para saturar una esponja de 0,5 por un milímetro con 12 microlitros de elastasa pancreática porcina y coloque la esponja sobre la superficie expuesta de la aorta. Después de tres a cinco minutos, usa el número siete fórceps para extraer la esponja de elastasa y extraer el retractor pulmonar. Irrigar la cavidad torácica con aproximadamente la mitad de un mililitro de solución salina estéril.
Retire la esponja pulmonar y utilice una gasa enrollada de dos por dos pulgadas para absorber el riego salino restante. Retire los retractores de las costillas y deponga las costillas con tres suturas interrumpidas de seis ohes no absorbibles, atando un nudo suelto en cada sutura sin atar las suturas hacia abajo. Después de replantear el pulmón, ata las suturas y reaproxima las capas musculares con una sutura trenzada absorbible de cinco oh.
Cierre la piel con suturas no absorbibles de cinco a 10 de cinco oh interrumpidas. Luego, monitoree al animal hasta su completa reclinencia. En el punto final experimental apropiado, utilice tijeras para incitar la piel mediamente desde el flanco izquierdo hasta el abdomen central, teniendo cuidado de no entrar en el peritoneo.
Incitar la piel desde el flanco dorsal izquierdo rostralmente hasta el hombro izquierdo y hacer una incisión en un ángulo de 90 grados a través de la axila hasta el esternón. Usando cautería, diseccione el colgajo de la piel hacia el aspecto ventral del ratón para exponer el hemotórax izquierdo y use tijeras para entrar en el abdomen a lo largo del margen costal izquierdo desde la dirección ventral a dorsal para exponer la parte inferior del diafragma izquierdo. Si el borde lateral del diafragma no se abre, incíme el diafragma en su borde más lateral.
Colocando la punta del cauterme en este agujero, cauterizar el diafragma desde el margen costal hasta el proceso de xifoide y utilizar un aplicador húmedo, punta fina de algodón con puntas finas para liberar suavemente el pulmón de cualquier adherencia a la pared torácica. Mientras se asegura de que el pulmón está fuera del camino, utilice la electrocauterización para cortar a través de las costillas y la pared torácica desde el margen costal hasta la primera costilla, dorsal a la línea media axilar, pero al menos dos milímetros de la aorta. Corte a lo largo del margen superior de la primera costilla y refleje la caja torácica ventralmente para exponer el hemotórax.
Coloque los retractores en el pulmón y tire mediamente. Coloque un retractor o una gasa mojada con solución salina en el diafragma y dibuje caudal para exponer la mayor cantidad posible de la aorta. Utilice un aplicador seco con punta de algodón para eliminar cualquier adherencia del aneurisma de la aorta y un segmento distal no afectado y utilice la micrometría de vídeo para medir el diámetro del segmento de control no afectado y la porción más ancha del aneurisma tratado con la elastasa.
Para cosechar la aorta, agarre el recipiente con daños fórceps sólo distal al segmento tratado y utilice tijeras para cortar distal a los fórceps. Diseccione la aorta de la columna vertebral y corte el vaso proximal al segmento tratado para extraer el tejido aneurisma. A continuación, utilizando una jeringa de tuberculina y una aguja, lave el lumen aórtico con solución salina y procese la muestra de acuerdo con el análisis experimental descendente planificado.
Los aneurismas torácicos desarrollados como fusiformes en forma y se producen sólo en la porción tratada en la aorta. En esta medición representativa de la micrometría de vídeo, se determinó que la dilatación aórtica era del 130% en la cosecha de tejido. De hecho, mientras que los ratones tratados con el tipo de elastasa presentan un aumento significativo en la dilatación aórtica en los días tres, siete, 14 y 21 post-tratamiento con la dilatación máxima observada en el día 14 en comparación con el control de ratones de tipo salvaje.
El análisis histológico revela que los aneurismas de tipo salvaje tienen fibras de elastina delgadas y fragmentadas. También hay menos tinción de células musculares lisas con un aumento en el macrófago y la expresión de una beta entrelukin. El pulmón murino es extremadamente delicado, y la lesión suele ser mortal.
Tenga el máximo cuidado con la entrada inicial en el pecho y sólo manipule el pulmón con esponjas húmedas con solución salina. Este modelo ha ayudado a dilucidar el papel de la interluquina one-beta y la interluquina seis en la patogénesis de los aneurismas de la aorta torácica descendente y cómo su bloqueo podría facilitar el manejo no quirúrgico de estos aneurismas.
