このプロトコルはマウスの一貫したサイズおよび位置の強い胸部大動脈瘤を作り出すことができるし、マウスの胸部への安全なアクセスのためのガイドとして役立つ。このプロトコルは、他のモデルと比較して合理的な時間をかけてマウスで胸部大動脈瘤を産生するための簡単で一貫した方法です。8〜10週齢の雄c57黒6マウスで適切なレベルの沈着を確認した後、マウスを右横型の褥瘡の位置に置き、前足が鼻に合わせるように右腕をロストリーにテープで貼ります。
尾を引いて右腕と尾の間に緊張線を作り、背骨の延長を生み出し、左足を自然な位置にテープで貼ります。その後、ロールガーゼの上に左腕を腹腹腔にテープで貼ります。手順を開始する前に、バリカンを使用して左肩から左腹部まで左脇腹を剃ります。
コットンチップアプリケーターを使用して最初のベタダイン溶液をブラッシングし、次に手術部位で70%エタノールを磨きます。皮膚が乾燥したら、動物の上に無菌ドレープを置きます。ヘモトラックスの中間点で2センチメートルの横切開を行い、手持ちの電気コーサリーを使用して、肋骨が見えるまで筋肉層を分割します。
10~15倍の倍率の下で、リブ間の2ミリメートルの部分を直接焼灼し、焼灼部分を通して胸膜空間に解剖するために、リブ空間に生理食いした細かい綿チップアプリケーターを使用します。生理用水性を加えた3本の2ミリメートルスポンジを胸郭に入れ、肺を崩壊させる。その後、横隔膜が腹腔内に見え、切開がパラスピナスの筋肉から数ミリメートル離れるまで、はさみを使用して開口切開術を広げます。
大大通を露出させるために、胸部レトラクターを胸部切開部に入れ、肺の表面からスポンジを慎重に取り除きます。生理布地で肺を覆い、6本4ミリメートルのスポンジで端がロストリーとコードを指し示し、スポンジに広く平らな肺レトラクターを置きます。次に、下降胸部大動脈が露出するまでレトラクタ腹通りを静かにスライドさせ、7番鉗子を使用して大動脈から約5ミリメートルの結合組織と脂肪を解剖する。
エラスターゼを適用するには、まず、マイクロピペットを使用して、1ミリメートルのスポンジで0.5を1ミリメートルのスポンジで12マイクロリットルのブタ膵臓エラスターゼで飽和させ、大動脈の露出した表面にスポンジを置きます。3〜5分後、番号7鉗子を使用してエラスターゼスポンジを取り外し、肺リトラクタを取り外します。胸腔を約1ミリリットルの滅菌生理食塩水で灌漑する。
肺スポンジを取り出し、残りの生理的灌漑を吸収するために2/2インチのガーゼを巻いて使用します。リブレトラクタを取り外し、3つの中断された6oh非吸収性縫合糸で肋骨を処分し、縫合糸を縛らずに各縫合糸の緩い結び目を結びます。肺を再膨張させた後、縫合糸を結び、ランニング5oh吸収性編組縫合糸で筋肉層を再近似します。
7〜10の中断5oh非吸収性縫合糸で皮膚を閉じます。その後、完全な債務まで動物を監視します。適切な実験終点では、はさみを使用して、腹腔に入らないので、左側面から中央腹部に皮膚の内側を切開する。
背側左脇腹から左肩に皮膚を切開し、腋窩から胸骨まで90度の角度で切開します。焼灼器を使用して、マウスの腹側に向かって皮膚のフラップを解剖して左の眼窩を露出させ、ハサミを使用して腹側から下側方向に左肋骨に沿って腹部に入り、左横隔膜の下側を露出させます。ダイヤフラムの最も外側の端が開かない場合は、最も外側の端に横隔膜を切開します。
この穴に焼灼の先端を置き、肋骨マージンからxiphoidプロセスに横隔膜を焼灼し、湿った細かい先端の綿チップアプリケーターを使用して、肺を任意の癒着から胸壁に静かに解放します。肺が邪魔にならないようにしながら、電気焼灼器を使用して肋骨と胸壁を肋骨と胸壁を最初の肋骨まで、後ろ線から腋窩半ばまで切り取りますが、大口から少なくとも2ミリメートルです。最初の肋骨の上縁に沿って切り、胸郭を露出させるために腹通から肋骨のケージを反射する。
肺にレトラクターを置き、内側を引っ張ります。横隔膜にリトラクターまたは生理食音を濡らしたガーゼを置き、できるだけ大高を露出させるために尾を描きます。乾燥した綿先端のアプリケーターを使用して、大動脈瘤と影響を受けない遠位セグメントから接着を取り除き、ビデオミクロメトリーを使用して、影響を受けない制御セグメントの直径とエラスターゼ処理動脈瘤の最も広い部分を測定します。
大間を収穫するには、治療されたセグメントに遠位するだけで傷ついて容器をつかみ、はさみを使って鉗子に遠位を切ります。大動脈を脊柱から解剖し、治療したセグメントに近位の血管を切り取って動脈瘤組織を取り除く。次に、結核注射器と針を用いて、大動脈腔を生理食音で洗浄し、計画下流実験分析に従って試料を処理する。
開発された胸部動脈瘤は、形状がフシフォームとして、大動脈上の処理部分にのみ発生する。この代表的なビデオミクロメトリー測定では、大動脈拡張は組織収穫時に130%であると判断した。実際、エラスターゼ処理マウスは、対照野生型マウスと比較して14日目に観察された最大拡張を用いて3日目、7日目、14日目、21日目の治療後に大動脈拡張の有意な増加を示す。
組織学的分析は、野生型動脈瘤が薄く断片化したエラスチン繊維を有することを明らかにした。マクロファージおよびインタールキン1-β発現の増加に伴う平滑筋細胞染色も少ない。ネズミの肺は非常に繊細であり、傷害は通常致命的である。
胸への最初のエントリで細心の注意を払って、生理的に濡れたスポンジで肺を操作するだけです。このモデルは、下降性胸部大動脈瘤の病因におけるインタールキン1ベータおよびインタールキン6の役割と、それらの遮断がこれらの動脈瘤の非外科的管理を促進する方法を解明するのに役立った。
