Ce protocole est capable de produire des anévrismes aortiques thoraciques robustes de taille et d’emplacement constants chez la souris et sert de guide pour un accès sûr à la poitrine murine. Ce protocole est une méthode simple et cohérente pour produire des anévrismes aortiques thoraciques chez la souris sur une quantité raisonnable de temps par rapport à d’autres modèles. Après avoir confirmé un niveau approprié de sedation chez un mâle de huit à dix semaines c57 noir six souris, placez la souris dans la position latérale droite de decubitus et tapez le bras droit rostrally ainsi la patte avant est en ligne avec le nez.
Tirez la queue caudally pour créer une ligne de tension entre le bras droit et la queue, produisant l’extension de la colonne vertébrale, et tapez la jambe gauche dans sa position naturelle. Ensuite, tapez le bras gauche ventrally sur gaze roulée. Avant de commencer l’intervention, utilisez des tondeuses pour raser le flanc gauche de l’épaule gauche à l’abdomen gauche.
Utilisez un applicateur à pointe de coton pour brosser d’abord la solution betadyne, puis 70% d’éthanol sur le site chirurgical. Lorsque la peau est sèche, placez un drapé stérile sur l’animal. Faire une incision latérale de deux centimètres au milieu de l’hémothorax et utiliser l’électrocauterie tenue à la main pour diviser les couches musculaires jusqu’à ce que les côtes soient visibles.
Sous 10 à 15x grossissement, cautériser directement une partie de deux millimètres entre les côtes et utiliser un applicateur salin mouillé, à pointe de coton fin dans l’espace des côtes afin de disséquer dans l’espace pleural à travers la partie cautérisée. Placez une éponge saline mouillée de trois par deux millimètres dans le thorax pour aider à l’effondrement du poumon. Ensuite, utilisez des ciseaux pour élargir la thoracotomie jusqu’à ce que le diaphragme soit visible ventrally et l’incision est à plusieurs millimètres des muscles paraspinus dorsalement.
Pour exposer l’aorte, placez les rétracteurs de nervures dans l’incision thoracotomie et retirez soigneusement l’éponge de la surface du poumon. Couvrez le poumon d’une éponge saline mouillée de six par quatre millimètres avec les extrémités pointant vers rostrally et caudally et placez un rétracteur large et plat de poumon sur l’éponge. Ensuite, faites glisser doucement le rétracteur ventrally jusqu’à ce que l’aorte thoracique descendante soit exposée et utilisez le nombre sept forceps pour disséquer une section d’environ cinq millimètres de tissu conjonctif et de graisse de l’aorte.
Pour appliquer l’élastre, d’abord, utilisez une micropipette pour saturer une éponge de 0,5 par millimètre avec 12 microlitres d’élastase pancréatique porcine et placer l’éponge sur la surface exposée de l’aorte. Après trois à cinq minutes, utiliser le numéro sept forceps pour enlever l’éponge d’élasstase et enlever le rétracteur de poumon. Irriguer la cavité thoracique avec environ un demi-millilitre de solution saline stérile.
Retirer l’éponge pulmonaire et utiliser un morceau roulé de deux par deux pouces de gaze pour absorber l’irrigation saline restante. Retirez les rétracteurs des côtes et déposez les côtes avec trois sutures interrompues de six oh non absorbables, en lissant un nœud lâche dans chaque suture sans léter les sutures vers le bas. Après avoir regonflé le poumon, attachez les sutures et rééchez les couches musculaires avec une suture tressée absorbable de cinq oh en cours d’exécution.
Fermez la peau avec sept à dix sutures interrompues de cinq oh non absorbables. Ensuite, surveillez l’animal jusqu’à la pleine récumbence. Au point d’extrémité expérimental approprié, utilisez des ciseaux pour inciser la peau de façon médiocre du flanc gauche à l’abdomen central, en prenant soin de ne pas entrer dans le péritoine.
Incise la peau du flanc gauche dorsal rostrally à l’épaule gauche et faire une incision à un angle de 90 degrés à travers l’axilla au sternum. À l’aide de la cautérisation, disséquer le rabat cutané vers l’aspect ventral de la souris pour exposer l’hémothorax gauche et utiliser des ciseaux pour pénétrer dans l’abdomen le long de la marge costale gauche du ventral à la direction dorsale pour exposer le dessous du diaphragme gauche. Si le bord latéral le plus latéral du diaphragme ne s’ouvre pas, incisez le diaphragme à son bord le plus latéral.
En plaçant la pointe de la cautérisation dans ce trou, cautériser le diaphragme de la marge costale au processus xiphoïde et utiliser un applicateur humide à pointe fine à bout de coton pour libérer doucement le poumon de toute adhérence à la paroi thoracique. Tout en s’assurant que le poumon est à l’extérieur, utilisez l’électrocauttérie pour couper à travers les côtes et la paroi thoracique de la marge costale à la première côte, dorsale à la ligne médiane, mais au moins deux millimètres de l’aorte. Couper le long de la marge supérieure de la première côte et de refléter la cage thoracique ventrally pour exposer l’hémothorax.
Placez les rétracteurs sur le poumon et tirez médiocrement. Placez un rétracteur ou une gaze saline mouillée sur le diaphragme et dessinez caudally pour exposer autant d’aorte que possible. Utilisez un applicateur sec à bout de coton pour éliminer les adhérences de l’anévrisme aortique et d’un segment distal inchangé et utilisez la micrométrie vidéo pour mesurer le diamètre du segment de contrôle inchangé et la partie la plus large de l’anévrisme traité à l’élasstase.
Pour récolter l’aorte, saisissez le navire avec des forceps harmons juste distal au segment traité et utilisez des ciseaux pour couper distal aux forceps. Disséquer l’aorte de la colonne vertébrale et couper le vaisseau proximal au segment traité pour enlever le tissu anévrisme. Ensuite, à l’aide d’une seringue et d’une aiguille de tuberculine, lavez le lumen aortique avec de la solution saline et traiter l’échantillon selon l’analyse expérimentale prévue en aval.
Les anévrismes thoraciques développés comme forme fusiforme et se produisent seulement dans la partie traitée sur l’aorte. Dans cette mesure représentative de micrométrie vidéo, la dilatation aortique a été déterminée pour être 130% à la récolte de tissu. En effet, tandis que les souris traitées de type elastase présentent une augmentation significative de la dilatation aortique aux jours trois, sept, 14, et 21 post-traitement avec la dilatation maximale observée au jour 14 comparée à la souris de type sauvage de contrôle.
L’analyse histologique révèle que les anévrismes de type sauvage ont des fibres d’élastine minces et fragmentées. Il y a également la coloration moins lisse de cellules de muscle avec une augmentation du macrophage et de l’expression uni-bêta d’interlukin. Le poumon murin est extrêmement délicat, et les blessures sont généralement mortelles.
Prenez le plus grand soin avec l’entrée initiale dans la poitrine et ne manipulez le poumon qu’avec des éponges salines mouillées. Ce modèle a aidé à élucider le rôle de l’interlukin un-bêta et interlukin six dans la pathogénie des aneurysms aortiques thoraciques descendants et comment leur blocus pourrait faciliter la gestion non chirurgicale de ces anévrismes.
