Questo protocollo è in grado di produrre robusti aneurismi aortici toracici di dimensioni e posizione costanti nei topi e funge da guida per un accesso sicuro al petto murino. Questo protocollo è un metodo semplice e coerente per produrre aneurismi aortici toracici nei topi per un periodo di tempo ragionevole rispetto ad altri modelli. Dopo aver confermato un adeguato livello di sedazione in un topo nero c57 nero c57 di otto-10 settimane, posizionare il mouse nella posizione di decubito laterale destro e rastremare il braccio destro rostralmente in modo che la zampa anteriore sia in linea con il naso.
Tirare la coda caudally per creare una linea di tensione tra il braccio destro e la coda, producendo estensione della colonna vertebrale, e nastro la gamba sinistra nella sua posizione naturale. Quindi, nastro il braccio sinistro ventralmente sopra garza arrotolata. Prima di iniziare la procedura, utilizzare i tosaerba per radere il fianco sinistro dalla spalla sinistra all'addome sinistro.
Utilizzare un applicatore con punta di cotone per spazzolare prima la soluzione di betadine, quindi il 70% di etanolo sul sito chirurgico. Quando la pelle è asciutta, posizionare un drappo sterile sull'animale. Fare un'incisione laterale di due centimetri nel punto centrale dell'emotorace e utilizzare l'elettrocauteria detenuta per dividere gli strati muscolari fino a quando le costole non sono visibili.
Sotto l'ingrandimento da 10 a 15x, cauterizzare direttamente una porzione di due millimetri tra le costole e utilizzare un applicatore a punta di cotone fine bagnato di salina nello spazio delle nervature per sezionare nello spazio pleurico attraverso la porzione cauterizzata. Posizionare una spugna salina bagnata da tre per due millimetri nel torace per aiutare a collassare il polmone. Quindi, usa le forbici per allargare la toracotomia fino a quando il diaframma è visibile ventralmente e l'incisione è a diversi millimetri di distanza dai muscoli paraspinus dorsalmente.
Per esporre l'aorta, posizionare i retrattili delle costole nell'incisione della toracotomia e rimuovere con cura la spugna dalla superficie del polmone. Coprire il polmone con una spugna salina bagnata da sei per quattro millimetri con le estremità rivolte rostralmente e caudally e posizionare un ampio retrattile polmonare piatto sulla spugna. Quindi, far scorrere delicatamente il riavvolgitore ventricolare fino a quando l'aorta toracica discendente è esposta e utilizzare le forcelle numero sette per sezionare una sezione di circa cinque millimetri di tessuto connettivo e grasso dall'aorta.
Per applicare l'elastasi, in primo luogo, utilizzare una micropipetta per saturare una spugna di 0,5 per un millimetro con 12 microlitri di elastasi pancreatica suina e posizionare la spugna sulla superficie esposta dell'aorta. Dopo tre o cinque minuti, utilizzare le forcep numero sette per rimuovere la spugna di elastasi e rimuovere il riavvolgitore polmonare. Irrigare la cavità toracica con circa la metà di un millilitro di soluzione salina sterile.
Rimuovere la spugna polmonare e utilizzare un pezzo di garza arrotolato da due a due pollici per assorbire l'irrigazione salina rimanente. Rimuovere i retrattili delle nervature e deporre le costole con tre suture non assorbibili a sei ore interrotte, legando un nodo sciolto in ogni sutura senza legare le suture. Dopo aver rigonfiato il polmone, legare le suture e riapprossimare gli strati muscolari con una sutura intrecciata assorbibile a cinque ore.
Chiudere la pelle con da sette a 10 suture non assorbibili interrotte da cinque a 10. Quindi, monitorare l'animale fino alla piena recumbency. Nel punto finale sperimentale appropriato, utilizzare le forbici per incidere la pelle medialmente dal fianco sinistro all'addome centrale, facendo attenzione a non entrare nel peritoneo.
Incidere la pelle dal fianco sinistro dorsale rostralmente alla spalla sinistra e fare un'incisione con un angolo di 90 gradi attraverso l'ascella fino allo sterno. Usando il cautery, sezionare il lembo cutaneo verso l'aspetto ventrale del topo per esporre l'emotorace sinistro e utilizzare le forbici per entrare nell'addome lungo il margine costale sinistro dalla direzione ventrale a quella dorsale per esporre la parte inferiore del diaframma sinistro. Se il bordo più laterale del diaframma non si apre, incise il diaframma sul bordo più laterale.
Posizionando la punta del cautery in questo foro, cauterizzare il diaframma dal margine costale al processo xifoide e utilizzare un applicatore umido con punta di cotone a punta fine per liberare delicatamente il polmone da eventuali aderenze alla parete toracica. Mentre si assicura che il polmone sia fuori mano, utilizzare l'elettrocauteria per tagliare le costole e la parete toracica dal margine costale alla prima costola, dalla linea dorsale a quella medio ascellare, ma ad almeno due millimetri dall'aorta. Tagliare lungo il margine superiore della prima costola e riflettere ventralmente la gabbia toracica per esporre l'emotorace.
Posizionare i retrattiri sul polmone e tirare medialmente. Posizionare un riavvolgitore o una garza bagnata di salina sul diaframma e disegnare caudally per esporre il maggior numero possibile di aorta. Utilizzare un applicatore asciutto con punta di cotone per rimuovere eventuali aderenze dall'aneurisma aortico e da un segmento distale non influenzato e utilizzare la micrometria video per misurare il diametro del segmento di controllo non influenzato e la parte più ampia dell'aneurisma trattato con elastasi.
Per raccogliere l'aorta, afferrare il vaso con le forcep danneggiate appena distale al segmento trattato e utilizzare le forbici per tagliare distale alle forcep. Sezionare l'aorta dalla colonna vertebrale e tagliare il vaso prossimale al segmento trattato per rimuovere il tessuto aneurismatico. Quindi, utilizzando una siringa e un ago tubercolina, lavare il lume aortico con soluzione salina ed elaborare il campione secondo l'analisi sperimentale a valle pianificata.
L'aneurisma toracico sviluppato è di forma fusiforme e si verifica solo nella porzione trattata sull'aorta. In questa misurazione rappresentativa della micrometria video, la dilatazione aortica è stata determinata al 130% al momento della raccolta dei tessuti. Infatti, mentre i topi trattati con elastasi di tipo mostrano un aumento significativo della dilatazione aortica nei giorni tre, sette, 14 e 21 post-trattamento con la massima dilatazione osservata al giorno 14 rispetto al controllo dei topi di tipo selvatico.
L'analisi istologica rivela che gli aneurismi di tipo selvaggio hanno fibre di elastina sottili e frammentate. C'è anche una colorazione cellulare muscolare meno liscia con un aumento del macrofago e dell'espressione un-beta interlugine. Il polmone murino è estremamente delicato e la lesione è solitamente fatale.
Prestare la massima attenzione con l'ingresso iniziale nel torace e manipolare il polmone solo con spugne bagnate da saline. Questo modello ha contribuito a chiarire il ruolo dell'interluigine one-beta e interlukin six nella patogenesi degli aneurismi aortici toracici discendenti e come il loro blocco potrebbe facilitare la gestione non chirurgica di questi aneurismi.
