En las últimas décadas, la vida humana se extiende, debido a las mejoras en el nivel de vida y los avances en la ciencia médica. La edad es el mayor factor de riesgo para muchas enfermedades potencialmente mortales, como los trastornos neurodegenerativos, como la enfermedad de Alzheimer, el Parkinson y la enfermedad de Huntington. Aquí, demostramos metodologías que utilizan algunos modelos de métodos nuevos y versátiles, incluyendo necrosis inducida por canal iónico hiperactivo y agregados de proteínas que inducen neurotoxicidad, para monitorear y diseccionar el mecanismo molecular celular de la degeneración neuronal.
Pico larvas saludables de hacer cuatro y hacer tres nematodos Newton en la placa de medios de crecimiento del nematodo, tamizado con E. coli utilizando el microscopio estéreo diseccionado. Colocar diez y cuatro nematodos, placa enzimática parasitaria y cultivarlos a la temperatura estándar, de 20 grados centígrados. Cinco días más tarde, lavar la placa con 1 ml y 9 tampón y recoger los animales en tubo de 1,5 ml.
Centrifugar a 30.000 g durante 30 segundos y retire el sobrenadante. Añadir 0,5 ml de solución de chapado. La solución de chapado se almacena a temperatura ambiente.
Vórtice y monitoree periódicamente hasta que todos se hayan disuelto. Evite enchapar durante períodos superiores a cinco minutos. Centrifugar a 10.000 g durante 30 segundos y retire el sobrenadante.
Lave el doble de la paleta con 1 ml y nueve tampones. Centrifugar a 10000 g durante 30 segundos y retire el sobrenadante. Después de lavar, resuspender los huevos en 200 microlitros M9 tampón y incubarlos durante 25 minutos, a 34 grados Celsius en un baño de agua.
Mantener un grupo separado de huevos a 20 grados Centígrados. Pipetear 100 microlitros que contienen huevos tratados con control o choque térmico y colóquelos en una placa de 10 GN sin sellar. Cada plato contiene al menos 100 a 200 huevos.
Incubar los huevos a 20 grados centígrados hasta la eclosión. Use y Tampón M9 para lavar las placas y recoger la vida útil L1 y los nematodos en tubo de 1,5 ml. Centrifugar a 10.000 g durante 30 segundos.
Retire el sobrenadante y mantenga la paleta. Añadir 100 microlitros de 20 mililitros M9 tampón levangial para anestesiar los nematodos. Pipetear 10 microlitros de tampón levangial M9, que contienen reloj L1 y montarlos en 2%agar-ls spot colocar suavemente un cubreobjetos en la parte superior de la muestra.
Observe el reloj con la microscopía DIC. La degeneración de la exploración de las 630 neuronas receptoras mediante el conteo de células con una característica apariencia asistida virtual de ese nematodo. Sincronizar nematodos seleccionando y transfiriendo de 15 a 20 larvas L4 de cada una en cepa en primeras bacterias C y luego placas modificadas genéticamente.
Incubar y dejar que los nematodos crezcan a la temperatura estándar de 20 grados centígrados. Realice el preacondicionamiento diario durante 30 minutos transfiriendo las placas en una incubadora de 34 grados centígrados. A continuación, devuelva los nematodos preacoso a la temperatura estándar de 20 grados centígrados.
Añadir 10 microlitros de 20 mililitros M9 tampón de caída en el centro del punto de agar-ls. Escoja los respectivos nematodos transgénicos y transeúncialos en gota levangial M9. Coloque de 20 a 30 nematodos por gota.
Coloque suavemente el resbalón de la cubierta en la parte superior de la muestra. Selle el resbalón de la cubierta con esmalte de uñas para preservar la humedad durante todo el proceso de diagnóstico por imágenes. Usando un microscopio de fluorescencia combinado con una cámara, detecte y capture sus imágenes de estudio de la región de la cabeza con un aumento de 20 x.
Monitorear siete días de nematodos transgénicos para la muerte de células neuronales dopaminérgicas. Mida los agregados de policul neuronales en la región principal de animales transgénicos de cuatro días de edad que expresan 240 fusiones con personas vivas. La muerte celular necrótica indujo un canal de iones hiperactivos es el más importante en los nematodos que tienen huevos previos de choque térmico previos.
Preacondicionamiento por choque térmico, promoviendo una predicción contra la muerte celular inducida por alfa-sinucleína en hermafrodita adulta de siete días de edad y disminuye los agregados de proteínaS Q40 en la región de la cabeza de adultos de cuatro días de edad. El envejecimiento es una consecuencia del daño causado por la degeneración gradual de la homeostasis celular y tisular. Por lo tanto, la comprensión de la manipulación de la ruptura neuronal relacionada con la edad son prioridades de los primeros lugares.
Las técnicas presentadas combinadas con la genética y las pantallas farmacológicas podrían conducir a una notificación de moduladores normales de la muerte celular con un posible interés terapéutico.
