El objetivo general de este procedimiento es crear un modelo murino reproducible de la herida de quemadura de espesor completo reconstruida con un injerto de piel alérgico. La piel se divide en dos componentes la epidermis y la dermis. Debajo de la dermis hay grasa subcutánea, que cubre hueso, tendón o fascia.
La clasificación de espesor de la lesión por quemaduras se utiliza a menudo para definir la extensión de la profundidad de la lesión por quemaduras. Las quemaduras superficiales sólo implican epidermis, las quemaduras superficiales de espesor parcial implican epidermis y sólo la picota o la dermis superior. Las quemaduras profundas de espesor parcial dérmico implican epidermis y dermis, la dermis reticular que contiene vasos sanguíneos, folículos pilosos, aceite y glándulas sudoríparas.
Las quemaduras de espesor completo se caracterizan por la evidente afectación de todo el grosor de la piel y posiblemente del tejido subcutáneo. Este tipo de herida sólo puede sanar por contracción o con injerto de piel. El objetivo general de este procedimiento era crear una herida de quemadura de espesor completo y reconstruida con un injerto de piel de espesor completo.
Esto se logró poniendo un bloque circular de latón precalentado a 80 grados Celsius y aplicado a la piel de la boca durante 20 segundos. El tejido necrótico se extirpaba quirúrgicamente 24 horas después de la lesión por quemaduras. Los injertos de piel de espesor completo cosechados de la cola de un ratón donante fueron colocados sobre las heridas por quemaduras extirpadas.
Los injertos se asegurarán con un adhesivo quirúrgico. Tanto los animales donantes como los receptores provienen de la misma cepa endogádida de ratones. Los ratones de biopsia se utilizan durante el curso del estudio.
Sin embargo, también se puede utilizar cepa de ratones. Esto incluye ratones inmunocompetentes sin pelo, que son particularmente útiles en estudios de cicatrización de heridas. Como depilación e inflamación asociada, un vagabundo y el crecimiento del cabello no interfieren con el análisis digital de imágenes, cuando las mediciones de área y otros tipos de evaluación microscópica de la herida.
Esto es especialmente cierto en los modelos de infección, donde nuestra suspensión de bioorganismo y bacterias se aplica a esto su cara de la herida y la señal de bioorganismo se mide para indicar la tasa de crecimiento bacteriano. El dispositivo de lesión por quemadura térmica consiste en un bloque de latón circular hecho a medida de 10 milímetros de diámetro precalentado a 80 grados Celsius. La temperatura del bloque de latón se verifica mediante una cámara termográfica infrarroja.
Para crear una herida de quemadura de espesor completo, el bloque de latón se aplica durante 20 segundos utilizando una presión constante de 0,15 Newtons que es monitoreada por manómetro digital. La analgesia multimodal es la mejor práctica para el manejo del dolor en procedimientos de investigación animal invasivos. El régimen de administración ideal de analgesia incluye la administración analgésica preventiva o pre-procesal.
El paracetamol a tres miligramos por comida se añadió al agua potable y se suministró 12 horas antes y durante 72 horas después del procedimiento. La buprenorfina a 0,05 microgramos por gramo se administró por vía subcutánea 30 minutos antes del procedimiento y cada seis horas durante las primeras 72 horas después del procedimiento. La lidocaína a cinco miligramos por kilogramo se administró por vía subcutánea alrededor del dorso de cada ratón 15 minutos antes del procedimiento, se inyectó un volumen total de 200 microlitros de solución de ringers lactantes al 5% dextrosa antes del procedimiento, y seis horas después del procedimiento para prevenir la deshidratación.
Los ratones fueron niseridos usando una inyección intraperitoneal de Xylazine a 10 miligramos por kilogramo, y Ketamina a 100 miligramos por kilogramo. La profundidad anestésica se puede evaluar a través de un pellizco del dedo del dedo del de La anestesia abolió el reflejo de parpadeo, evitando el refresco de la película lagrimal necesaria para el mantenimiento de la hidratación corneal y los ojos continuamente expuestos al aire se deshidratan rápidamente, se aplicó un lubricante en los ojos para mantener la hidratación de la córnea.
El dorso de cada ratón se recorta y se aplica crema depilante durante un minuto para eliminar el vello. El animal de niserida se coloca propenso en una mesa plana y la quemadura térmica se crea mediante la aplicación de un bloque de latón circular precalentado a 80 grados Celsius durante 20 segundos. El ratón, se coloca de nuevo en la almohadilla de calentamiento para mantenerlo caliente y prevenir la hipotermia, un efecto secundario frecuente de los agentes anestésicos.
Una vez recuperado de la anestesia, el ratón puede ser colocado en una jaula individual. 24 horas después de la inducción de la lesión por quemaduras. El tejido necrótico excita quirúrgicamente.
Cuatro injertos de piel de enfermedad se cosechan de la cola de ratón del donante de eutanasia. Aunque otro lado por lo que hay debajo de la cola también puede estar utilizando el modelo de ratón. Por lo tanto, el grado de respuesta humana puede variar dependiendo del origen del injerto de piel del donante.
Por ejemplo, la piel de oído y espalda ya no tienen ventas en comparación con la piel de la cola y provocan una respuesta humana más robusta, lo que puede conducir al rechazo del injerto. También se puede tener en cuenta el grosor de los injertos de piel, ya que puede desempeñar un factor determinante en el injerto exitoso de la toma del injerto de piel. La piel segura como la de la espalda tiene una mayor probabilidad de fracaso debido a las mayores demandas metabólicas del tejido.
En consecuencia, el éxito reportado del injerto de injerto de piel alergénico para la piel de la espalda es menor que el éxito reportado para el injerto de piel de cola. La anestesia fue inducida por inhalación de 5%Isoflurano en 100% de oxígeno a un caudal de cuatro litros por minuto, seguido por el mantenimiento de la anestesia utilizando 2%Isoflurano a dos litros por minuto para el mantenimiento durante la cirugía. Buprenorfina se administró al inicio del procedimiento para proporcionar analgesia postoperatoria.
Las heridas de quemadura se pretrataron con povidona-yodo, seguido de 70%alcohol. Quemadura necrótica se extirpa con tijeras para eliminar el defecto circular de la piel de espesor completo, la capa de panniculus carnosus de la hipodermis se elimina para crear un lecho receptor de injerto de piel estable algunos autores sugieren preservar la capa de panniculus carnosus de la hipodermis, ya que se cree que es necesario para la revascularización del injerto. Sin embargo, en este caso, la movilidad de esta capa y las fuerzas de cizallamiento potenciales resultantes entre el injerto y el lecho receptor pueden llegar a ser problemáticas.
La eliminación de la capa de panniculus carnosus no afectó negativamente el éxito del procedimiento de injerto. Los injertos de espesor completo, se cosechan de la cola del ratón donante eutanizado. La cola está incisada longitudinalmente, permitiendo que la piel se separe del tejido blando subyacente.
La piel de la cola se extiende sobre un plato de Petri lleno de solución salina estéril y normal y se corta en parches circulares usando una regla. Los injertos se transfieren a un plato de Petri con una gasa estéril empapada en solución salina normal y mantienen los cuatro grados hasta que estén listos para ser injertados. Los injertos se fijan a la cama receptora con pegamento quirúrgico.
Los huecos entre el injerto de piel del donante y el lecho de la herida receptora se presionan suavemente para alinear los bordes de la piel. Las heridas se visten dentro de la gasa de parafina inerte y el apósito secundario adhesivo. Se tomaron fotografías digitales de heridas injertadas a uno, tres y siete días después de una lesión por quemaduras.
En la autopsia, las heridas por quemadura dorsal se extirparon quirúrgicamente a la fascia, las heridas se bisectaron con una mitad fijadas en formalina 10%amortiguada, y procesadas para histología e inmunohistoquímica. Los injertos de piel proporcionan un sistema de andamios para la migración celular. La integración exitosa del injerto depende de fibroblastos eficientes y migración de queratinocitos desde la oferta del receptor al injerto del donante que se degrada lentamente y se reemplaza por células capaces de producir la matriz extracelular.
La sección histológica de las heridas masivas fue sometida a manchas de hematoxilina y eosina. Imágenes representativas de hematoxilina y secciones teñidas de eosina de las heridas, mostraron que la longitud de la epidermis casi resaltada en amarillo aumenta significativamente el día siete, en comparación con el tercer día después de la lesión por quemaduras. Para estimar la tasa de ree epitelización, el área de la herida que se cubrió con una epidermis cercana se expresó como un porcentaje de toda la herida.
La matriz extracelular es el componente no celular de la piel, que proporciona andamios para los componentes celulares. La matriz extracelular se compone de proteínas fibrosas, como colágeno y fibronectina. Estas moléculas mejoran la madurez de las heridas y mantienen la integridad estructural de la inmunohistoquímica semicuántittiva de la piel para el colágeno tipo uno, y las manchas histológicas como el tricromo de Mason se pueden utilizar para ayudar a la integridad de la matriz extracelular a partir del microbógrafo.
Métodos más sofisticados como la microscopía de segunda generación armónica han surgido como una poderosa herramienta para el análisis cuantitativo de la estructura del colágeno. El injerto de piel murina proporciona un excelente modelo preclínico potencial para investigar la integración de gráficos en el lado receptor. Este estudio demuestra un método confiable para realizar con éxito injertos de piel en un modelo de ratón, así como la evaluación histológica de las heridas curativas.
