L'obiettivo generale di questa procedura è quello di creare un modello murino riproducibile di ferita da ustione a pieno spessore ricostruito con un innesto cutaneo allergico. La pelle è divisa in due componenti l'epidermide e il derma. Sotto il derma c'è grasso sottocutaneo, che copre ossa, tendini o fascia.
La classificazione dello spessore delle lesioni da ustione viene spesso utilizzata per definire l'entità della profondità delle lesioni da ustione. Le ustioni superficiali coinvolgono solo epidermide, ustioni superficiali a spessore parziale coinvolgono epidermide e solo gogna o derma superiore. Ustioni profonde di spessore parziale dermico coinvolgono epidermide e derma, il derma reticolare contenente vasi sanguigni, follicoli piliferi, olio e ghiandole sudoripare.
Le ustioni a pieno spessore sono caratterizzate da un evidente coinvolgimento dell'intero spessore della pelle e possibilmente del tessuto sottocutaneo. Questo tipo di ferita può guarire solo per contrazione o con innesto cutaneo. L'obiettivo generale di questa procedura era quello di creare una ferita da ustione a pieno spessore e ricostruita con un innesto cutaneo a pieno spessore.
Ciò è stato ottenuto mettendo un blocco di ottone circolare preriscaldato a 80 gradi Celsius e applicato sulla pelle della bocca per la durata di 20 secondi. Il tessuto necrotico è stato asportato chirurgicamente 24 ore dopo la lesione da ustione. Gli innesti cutanei a pieno spessore raccolti dalla coda di un topo donatore sono stati posati sulle ferite da ustione asportate.
Gli innesti saranno quindi fissati con un adesivo chirurgico. Sia gli animali donatori che gli animali ricevente provengono dallo stesso ceppo inbred di topi. I topi biopsia vengono utilizzati durante il corso dello studio.
Tuttavia, può essere utilizzato anche un ceppo di topi. Ciò include topi immunocompetenti senza peli, che sono particolarmente utili negli studi di guarigione delle ferite. Come la depilazione e l'infiammazione associata ha fatto un hobo e la ricrescita dei capelli non interferisce con l'analisi digitale dell'immagine, quando le misurazioni dell'area e altri tipi di valutazione microscopica delle ferite.
Questo è particolarmente vero nei modelli di infezione, dove la nostra sospensione di bio-organismo e batteri viene applicata a questo il tuo viso della ferita e il segnale del microrganismo viene misurato per indicare il tasso di crescita batterica. Il dispositivo di lesione termica da ustione è costituito da un blocco circolare di ottone su misura che misura 10 millimetri di diametro preriscaldato a 80 gradi Celsius. La temperatura del blocco di ottone viene verificata utilizzando una termocamera a infrarossi.
Per creare una ferita da ustione a pieno spessore, il blocco di ottone viene applicato per 20 secondi utilizzando una pressione costante di 0,15 Newton che viene monitorata dal manometro digitale. L'analgesia multimodale è la migliore pratica per la gestione del dolore nelle procedure di ricerca sugli animali invasivi. Il regime amministrativo ideale dell'analgesia comprende l'amministrazione analgesica preventiva o pre-procedurale.
Il paracetamolo a tre milligrammi per pasto è stato aggiunto all'acqua potabile e fornito 12 ore prima e per 72 ore dopo la procedura. La buprenorfina a 0,05 microgrammi per grammo è stata somministrata per via sottocutanea 30 minuti prima della procedura e ogni sei ore per le prime 72 ore dopo la procedura. La lidocaina a cinque milligrammi per chilogrammo è stata somministrata per via sottocutanea attorno al dorsum di ciascun topo 15 minuti prima della procedura, un volume totale di 200 microlitri di soluzione di suoneria lattata al 5%di destrosio è stato iniettato per via sottocutanea prima della procedura e sei ore dopo la procedura per prevenire la disidratazione.
I topi erano nisertide usando un'iniezione intraperitoneale di xiazina a 10 milligrammi per chilogrammo e ketamina a 100 milligrammi per chilogrammo. La profondità anestetica può essere valutata tramite un dito del dito del piedi. L'anestesia abolisce il riflesso del battito di ciglia, impedendo il ristoro del film lacrimale necessario per il mantenimento dell'idratazione corneale e l'occhio continuamente esposto all'aria diventa rapidamente disidratato, un lubrificante è stato applicato sugli occhi per mantenere l'idratazione della cornea.
Il dorsum di ogni topo viene tagliato e la crema di depilazione viene applicata per un minuto per rimuovere i capelli. L'animale nisertide è posizionato soggetto a un tavolo piatto e l'ustione termica viene creata applicando un blocco di ottone circolare preriscaldato a 80 gradi Celsius per la durata di 20 secondi. Il topo, viene riposto sul riscaldante per tenerlo caldo e prevenire l'ipotermia, un frequente effetto collaterale degli agenti anestetici.
Una volta recuperato dall'anestesia, il topo può essere posto in una singola gabbia. 24 ore dopo l'induzione della ferita da ustione. Il tessuto necrotico è eccita chirurgicamente.
Quattro innesti cutanei di malattia vengono raccolti dalla coda del topo del donatore eutanasia. Anche se l'altro lato, quindi c'è sotto la coda, potrebbe anche usare il modello di mouse. Quindi il grado di risposta umana può variare a seconda dell'origine dell'innesto cutaneo del donatore.
Ad esempio, la pelle dell'orecchio e della schiena non ha più vendite rispetto alla pelle della coda e provoca una risposta umana più robusta, che può portare al rifiuto dell'innesto. Lo spessore degli innesti cutanei può anche essere preso in considerazione in quanto può svolgere un fattore determinante nell'innesto riuscito dell'innesto cutaneo. La pelle sicura come quella dalla schiena ha una maggiore probabilità di fallimento a causa delle più elevate esigenze metaboliche del tessuto.
Di conseguenza, il successo riportato dell'innesto allergenico della pelle per la pelle posteriore è inferiore al successo riportato per l'innesto cutaneo della coda. L'anestesia è stata indotta dall'inalazione del 5% di isoflurane in ossigeno al 100% a una portata di quattro litri al minuto, seguita dal mantenimento dell'anestesia utilizzando il 2%Isoflurane a due litri al minuto per la manutenzione durante l'intervento chirurgico. La buprenorfina è stata somministrata all'inizio della procedura per fornire analgesia postoperatoria.
Le ferite da ustione sono state predisposte con Povidone-iodio, seguito dal 70% di alcol. Necrotic Burn viene asportato con forbici per rimuovere il difetto circolare della pelle a pieno spessore, lo strato panniculus carnoso dell'ipodermide viene rimosso per creare un letto ricevente stabile per l'innesto cutaneo che alcuni autori suggeriscono di preservare lo strato panniculus carnoso dell'ipodermide in quanto si ritiene necessario per la rivascolarizzazione dell'innesto. Tuttavia, in questo caso, la mobilità di questo strato e le forze di taglio potenziali risultanti tra l'innesto e il letto ricevente possono diventare problematiche.
La rimozione dello strato di panniculus carnosus non ha influito negativamente sul successo della procedura di innesto. Gli innesti a pieno spessore, vengono raccolti dalla coda del topo donatore eutanasiato. La coda è incisa longitudinalmente, permettendo alla pelle di essere separata dal tessuto molle sottostante.
La pelle della coda viene quindi distribuita su una piastra di Petri piena di soluzione salina sterile e normale e tagliata in macchie circolari usando un righello. Gli innesti vengono quindi trasferiti in una piastra di Petri con una garza sterile imbevuta di soluzione salina normale e hanno mantenuto i quattro gradi fino a quando non sono pronti per essere innestati. Gli innesti vengono quindi fissati al letto ricevente con colla chirurgica.
Gli spazi tra l'innesto cutaneo del donatore e il letto della ferita ricevente vengono delicatamente premuti per allineare i bordi della pelle. Le ferite sono vestite all'interno di garza di paraffina inerte e medicazione secondaria adesiva. Fotografie digitali, di ferite innesate sono state scattate in uno, tre e sette giorni dopo la ferita da ustione.
Al post mortem le ferite da ustione dorsale sono state chirurgicamente asportate alla fascia, le ferite sono state bisette con una metà fissata in formalina tamponata al 10% ed elaborate per istologia e immunoistochimica. Gli innesti cutanei forniscono un sistema di impalcature per la migrazione cellulare. Il successo dell'integrazione dell'innesto dipende da un'efficiente migrazione di fibroblasti e cheratinociti dall'offerta del ricevente nell'innesto donatore che viene lentamente degradato e sostituito da cellule in grado di produrre la matrice extracellulare.
La sezione istologica delle ferite di massa è stata sottoposta a colorazione ematossilina ed eosina. Immagini rappresentative di sezioni di ferite macchiate di ematossilina ed eosina, hanno mostrato che la lunghezza dell'epidermide vicina evidenziata in giallo è significativamente aumentata il settimo giorno, rispetto al terzo giorno dopo la lesione da ustione. Per stimare il tasso di ro epitelizzazione, l'area della ferita coperta da epidermide vicina è stata espressa come percentuale dell'intera ferita.
La matrice extracellulare è la componente non cellulare della pelle, che fornisce impalcature per i componenti cellulari. La matrice extracellulare è composta da proteine fibrose, come collagene e fibronectina. Queste molecole migliorano la maturità delle ferite e mantengono l'integrità strutturale dell'immunoistochimica semiquantitativa della pelle per il collagene di tipo uno, e macchie istologiche come il tricromo di Mason possono essere utilizzate per aiutare l'integrità della matrice extracellulare dalla foto micrografia.
Metodi più sofisticati come la microscopia di seconda generazione armonica sono emersi come un potente strumento per l'analisi quantitativa della struttura del collagene. L'innesto cutaneo murino fornisce un eccellente modello preclinico potenziale per indagare l'integrazione dei grafici nel lato ricevente. Questo studio dimostra un metodo affidabile per eseguire con successo gli innesti cutanei in un modello di topo e la valutazione istologica delle ferite curative.
