Das übergeordnete Ziel dieses Verfahrens ist es, ein reproduzierbares murines Modell der vollen Dicke Verbrennungwunde mit einem allergischen Hauttransplantat rekonstruiert zu erstellen. Die Haut ist in zwei Komponenten unterteilt, die Epidermis und die Dermis. Unter der Dermis befindet sich subkutanes Fett, das Knochen, Sehne oder Faszien bedeckt.
Die Dickenklassifizierung von Brandverletzungen wird häufig verwendet, um das Ausmaß der Verbrennungsverletzungstiefe zu definieren. Oberflächliche Verbrennungen beinhalten nur Epidermis, Oberflächliche partielle Dickenverbrennungen beinhalten Epidermis und nur Pranger oder obere Dermis. Tiefe dermale Teildickenverbrennungen beinhalten Epidermis und Dermis, die retikuläre Dermis, die Blutgefäße, Haarfollikel, Öl und Schweißdrüsen enthält.
Verbrennungen mit voller Dicke zeichnen sich durch die offensichtliche Beteiligung der gesamten Dicke der Haut und möglicherweise des Unterhautgewebes aus. Diese Art von Wunde kann nur durch Kontraktion oder mit Hauttransplantation heilen. Das übergeordnete Ziel dieses Verfahrens war es, eine volle Dicke Brennen Wunde zu schaffen und mit einer vollen Dicke Hauttransplantat rekonstruiert.
Dies wurde erreicht, indem ein kreisförmiger Messingblock auf 80 Grad Celsius vorgewärmt und für die Dauer von 20 Sekunden auf die Mundhaut aufgetragen wurde. Nekrotisches Gewebe wurde 24 Stunden nach der Verbrennungsverletzung operativ ausgeschnitten. Über die ausgeschnittenen Brandwunden wurden Hauttransplantate mit voller Dicke gelegt, die aus dem Schwanz einer Spendermaus geerntet wurden.
Die Transplantate werden dann mit einem chirurgischen Klebstoff gesichert. Sowohl Spender- als auch Empfängertiere stammen aus dem gleichen inzuchtigen Mäusestamm. Biopsiemäuse werden im Laufe der Studie verwendet.
Allerdings können auch Mäusestämme verwendet werden. Dazu gehören immunkompetente haarlose Mäuse, die besonders in Wundheilungsstudien nützlich sind. Als Haarentfernung und damit verbundene Entzündung enden ein Hobo und Haarwachstum stört nicht die digitale Bildanalyse, wenn Flächenmessungen und andere Arten der mikroskopischen Wundbewertung.
Dies gilt insbesondere für Infektionsmodelle, bei denen unsere Suspension von Bioorganismen und Bakterien darauf angewendet wird, dass Ihr Gesicht des Wund- und Bioorganismussignals gemessen wird, um die Rate des Bakterienwachstums anzuzeigen. Die thermische Brandverletzungbesteht besteht aus einem maßgeschneiderten kreisförmigen Messingblock mit einem Durchmesser von 10 Millimetern, der auf 80 Grad Celsius vorgeheizt ist. Die Temperatur des Messingblocks wird mit einer Infrarot-Wärmebildkamera überprüft.
Um eine Volldicke Brennen Wunde zu schaffen, wird der Messingblock für 20 Sekunden mit einem konstanten Druck von 0,15 Newton, die durch digitale Manometer überwacht wird angewendet. Multimodale Analgesie ist die beste Praxis für das Schmerzmanagement in invasiven Tierforschungsverfahren. Das ideale Verwaltungsregime der Analgesie umfasst die präventive oder vorverfahrensrechtliche schmerzlindernde Verabreichung.
Paracetamol mit drei Milligramm pro Mahlzeit wurde dem Trinkwasser zugesetzt und 12 Stunden vor und für 72 Stunden nach dem Eingriff versorgt. Buprenorphin mit 0,05 Mikrogramm pro Gramm wurde 30 Minuten vor dem Eingriff und alle sechs Stunden für die ersten 72 Stunden nach dem Eingriff subkutan verabreicht. Lidocain mit fünf Milligramm pro Kilogramm wurde subkutan um das Dorsum jeder Maus 15 Minuten vor dem Eingriff verabreicht, ein Gesamtvolumen von 200 Mikroliter lactated Ringers Solution bei 5%Dextrose wurde subkutan vor dem Eingriff injiziert, und sechs Stunden nach dem Verfahren, um Dehydrierung zu verhindern.
Mäuse wurden Nisertid mit einer intraperitonealen Injektion von Xylazin bei 10 Milligramm pro Kilogramm, und Ketamin bei 100 Milligramm pro Kilogramm. Die Anästhesietiefe kann über eine Zehenklemme beurteilt werden. Anästhesie beseitigt den Blinkreflex und verhindert die Erfrischung des Tränenfilms, der für die Aufrechterhaltung der Hornhauthydratation erforderlich ist und das Auge, das kontinuierlich der Luft ausgesetzt wird, schnell dehydriert wird, ein Schmiermittel wurde auf die Augen aufgetragen, um die Hydratation der Hornhaut aufrechtzuerhalten.
Das Dorsum jeder Maus ist abgeschnitten und Enthaarungscreme wird für eine Minute aufgetragen, um Haare zu entfernen. Das Nisertide-Tier wird anfällig auf einem flachen Tisch positioniert und thermische Verbrennung wird durch Auftragen eines kreisförmigen Messingblocks auf 80 Grad Celsius für die Dauer von 20 Sekunden erzeugt. Die Maus wird wieder auf das Heizkissen gelegt, um es warm zu halten und Hypothermie zu verhindern, eine häufige Nebenwirkung der Anästhetika.
Einmal aus der Anästhesie geborgen, kann die Maus in einen einzelnen Käfig gelegt werden. 24 Stunden nach der Induktion der Brandverletzung. Nekrotisches Gewebe ist chirurgisch begeistert.
Vier krankheitskranke Hauttransplantate werden aus der Euthane Spender Maus Schwanz geerntet. Obwohl auf der anderen Seite, so gibt es unter Schwanz kann auch mit dem Mausmodell. Der Grad der menschlichen Reaktion kann also je nach Herkunft des Spenderhauttransplantats variieren.
Zum Beispiel hat Ohren- und Rückenhaut im Vergleich zur Schwanzhaut keinen Umsatz mehr und provoziert eine robustere menschliche Reaktion, die zu einer Transplantatabstoßung führen kann. Hauttransplantatdicke kann auch berücksichtigt werden, da es einen entscheidenden Faktor für die erfolgreiche Transplantation von Hauttransplantat nehmen spielen kann. Sichere Haut wie die von hinten hat eine höhere Wahrscheinlichkeit des Versagens aufgrund der höheren metabolischen Anforderungen des Gewebes.
Folglich ist der gemeldete Erfolg der allergenen Hauttransplantattransplantation für die Rückenhaut geringer als der gemeldete Erfolg für das Schwanzhauttransplantat. Die Anästhesie wurde durch Einatmen von 5%Isofluran e in 100% Sauerstoff bei einer Durchflussrate von vier Litern pro Minute induziert, gefolgt von der Aufrechterhaltung der Anästhesie mit 2%Isofluran e bei zwei Litern pro Minute für die Wartung während der Operation. Buprenorphin wurde zu Beginn des Verfahrens zur postoperativen Analgesie verabreicht.
Verbrennungswunden wurden mit Povidone-Jod vorbereitet, gefolgt von 70% Alkohol. Necrotic Burn wird mit einer Schere ausgeschnitten, um den kreisförmigen Dickenhautdefekt zu entfernen, die Panniculus-Carnosusschicht der Hypodermis wird entfernt, um ein stabiles Hauttransplantat-Empfängerbett zu schaffen, einige Autoren schlagen vor, die Panniculus-Carnosusschicht der Hypodermis zu erhalten, da sie für die Revaskularisation des Transplantats notwendig ist. In diesem Fall kann jedoch die Beweglichkeit dieser Schicht und die daraus resultierenden potentiellen Scherkräfte zwischen Transplantat und Empfängerbett problematisch werden.
Die Entfernung der Panniculus-Carnosusschicht wirkte sich nicht negativ auf den Erfolg des Pfropfverfahrens aus. Volldicke Transplantate, werden aus dem Schwanz der eingeschläferten Spendermaus geerntet. Der Schwanz ist längs eingeschnitten, so dass die Haut vom darunter liegenden Weichgewebe getrennt werden kann.
Die Schwanzhaut wird dann auf einer Petrischale mit steriler, normaler Mittelsaline aufgestreu und mit einem Lineal in kreisförmige Flecken geschnitten. Die Transplantate werden dann in eine Petrischale mit einer sterilen Gaze in normaler Saline getränkt übertragen und die vier Grad bis zur Verpfropfte aufbewahrt. Die Transplantate werden dann mit chirurgischem Kleber am Empfängerbett befestigt.
Die Lücken zwischen Spenderhauttransplantat und Empfänger-Wundbett werden sanft drücken, um die Hautränder auszurichten. Die Wunden sind in inerter Paraffin Gaze und Klebstoff Sekundärdressing gekleidet. Digitale Fotos, von verpfropften Wunden wurden an einem, drei und sieben Tagen nach der Verbrennung Verletzungen gemacht.
Bei der Post-Mortem wurden die dorsalen Brandwunden chirurgisch auf die Faszien geschnitten, Wunden mit einer Hälfte in 10% gepuffertem Formalin fixiert und für histologische und immunhistochemische verarbeitet. Hauttransplantate bieten ein Gerüstsystem für die zelluläre Migration. Eine erfolgreiche Transplantatintegration hängt von effizienten Fibroblasten und Keratinozytenmigration vom Empfängergebot in das Spendertransplantat ab, das langsam abgebaut und durch Zellen ersetzt wird, die in der Lage sind, die extrazelluläre Matrix zu erzeugen.
Histologische Sektion der Massenwunden wurde Hämatoxylin und Eosin Färbung unterzogen. Repräsentative Bilder von Hämatoxylin und Eosin gefärbten Abschnitte von Wunden, zeigte, dass die Länge der nahen Epidermis in gelb hervorgehoben ist deutlich erhöht am tag sieben, im Vergleich zu Tag drei nach Verbrennung Verletzungen. Um die Rate der Reepithelisierung abzuschätzen, wurde der Bereich der Wunde, der mit nah epidermis bedeckt war, als Prozentsatz der gesamten Wunde ausgedrückt.
Die extrazelluläre Matrix ist die nicht zelluläre Komponente der Haut, die Gerüste für die zellulären Komponenten bereitstellt. Die extrazelluläre Matrix besteht aus faserigen Proteinen wie Kollagen und Fibronectin. Diese Moleküle verbessern die Reife von Wunden und erhalten die strukturelle Integrität der Haut semiquantitative Immunhistochemie für Kollagen Typ eins, und histologische Flecken wie Masontrichrom können verwendet werden, um die extrazelluläre Matrix Integrität aus Fotomikroskopie zu unterstützen.
Anspruchsvollere Methoden wie die Mikroskopie der zweiten harmonischen Generation haben sich zu einem leistungsfähigen Werkzeug für die quantitative Analyse der Kollagenstruktur entwickelt. Die murine Hauttransplantation bietet ein ausgezeichnetes präklinisches Potenzialmodell zur Untersuchung der Integration von Graphen in die Empfängerseite. Diese Studie zeigt eine zuverlässige Methode, um Hauttransplantate in einem Mausmodell erfolgreich durchzuführen, sowie die histologische Beurteilung der heilenden Wunden.
