Nuestra técnica es adecuada para varios tipos de experimentos, pero nuestro modelo de ratón es necesario para alimentar las garrapatas y es necesario mantener las garrapatas en un área cerrada para facilitar la recolección y el monitoreo. El beneficio de este método simple es la eficiencia, la duración corta y la capacidad de monitorear o recoger ticks en diferentes puntos de tiempo de un experimento. Nuestro sistema es adecuado para estudiar la biología de las garrapatas, las interacciones entre patógenos huésped y vectores o para evaluar diferentes medidas de control de estos artrópodos de importancia médica.
Este método requiere precisión y atención al detalle, ya que las etapas de garrapatas inmaduras son pequeñas y alimentarlas con ratones requiere que la cápsula cerrada se adhire firmemente al ratón durante varios días. Comience por pegar una espuma de EVA de dos milímetros, una espuma adhesiva doble pegajosa. Utilice un punzón de agujero de cuero de 20 milímetros de diámetro para cortar un círculo de las piezas de espuma.
A continuación, utilice un punzón de 12 milímetros para cortar el interior. Pelar la tira de papel protector de la espuma adhesiva doble adhesiva adhesiva y fijar un círculo de plástico transparente de 20 milímetros a la espuma. Si alimenta larvas, no retire la tira protectora de papel de la espuma adhesiva y proceda directamente con la fijación de la cápsula.
Haga una hendidura de un centímetro en el plástico transparente y luego use un pasador entomológico para crear al menos 10 pequeños agujeros para la evaporación de la humedad durante el experimento. Después de que el ratón ha sido anestesiado colocarlo en la almohadilla de manipulación y fijar un cono de nariz para el suministro continuo de isoflurano. Asegúrese de que la frecuencia respiratoria sea inferior a 80 respiraciones por minuto ajustando el nivel de isoflurano.
Afeitar la parte anterior del ratón desde detrás de los omóplatos hasta el área justo detrás de las orejas creando un área afeitada que es mayor que la superficie de la cápsula. Aplicar pegamento de látex no irritante en todo el sitio de espuma de EVA de la cápsula y esperar un minuto. Coloque la cápsula en la parte posterior del ratón y aplique presión constante durante tres minutos, especialmente en el lado izquierdo y derecho de la cápsula.
Levante ligeramente la cápsula para comprobar visualmente su fijación a la piel. Para asegurar la fijación firme de la cápsula aplicar una ligera presión constante de tres minutos con los dedos especialmente en el lado izquierdo y derecho de la cápsula. Si se encuentran regiones no unidas, aplique más pegamento con una espátula y presione otros tres minutos.
Si se forma una región que no es de datos adjuntos durante el experimento, se corrige de la misma manera. Introducir ninfas individuales en la cápsula a través de la hendidura de un centímetro. Apriete ligeramente la cápsula de dos lados para permitir que el plástico transparente se doble y luego empuje la ninfa dentro de la cápsula.
Gire los fórceps 90 grados y sáquelos. Para la infestación por larvas, retire el trozo de papel de la cápsula adjunta y coloque la jeringa con las larvas directamente dentro. Deposite las garrapatas empujando el émbolo de la jeringa y luego gire suavemente el émbolo hacia la piel para eliminar las larvas que quedan unidas.
Una vez que las larvas se depositan sobre la piel, cierre la cápsula fijando el círculo plástico transparente. Cortar una tira de 3,5 milímetros de la banda de plástico protectora y aplicar la banda de plástico protector alrededor de la cápsula y luego devolver el ratón a la jaula. Para recoger las garrapatas, crea un corte en forma de cruz en el plástico con un bisturí y usa fórceps para recoger las garrapatas.
Si es necesario, vuelva a cerrar la cápsula pegando un parche de plástico adhesivo en el plástico transparente. el mismo parche de plástico se puede utilizar si se requiere la recolección de garrapatas en varios puntos de tiempo. Alternativamente, el ratón puede ser eutanizado y las garrapatas recogidas o separadas manualmente después de la eliminación de la cápsula.
Para una recuperación exitosa de los ratones, manténgalos en una jaula durante una semana adicional y deje que las cápsulas se desprenda naturalmente. Una vez que la cápsula esté apagada, compruebe si hay reacciones anormales en la piel. Aplique cualquier loción emoliente si hay alguna irritación.
Este protocolo permite alimentar garrapatas duras inmaduras en cápsulas de espuma de EVA aplicadas a la espalda de un ratón. El uso del pegamento de látex de secado rápido y no irritante asegura que la cápsula esté firmemente unida dentro de tres minutos y permanezca unida durante al menos siete días. La fijación de dos cápsulas permite alimentar dos grupos diferentes de garrapatas en el mismo animal.
Además, la recuperación completa de los ratones después de los experimentos, permite reutilizar a los animales y evitar la eutanasia. Este sistema se ha utilizado con éxito para alimentar ninfas de ricinus Ixodes. Se logró una tasa de éxito de engorgement moderada a alta en dos cepas de ratón diferentes.
En ambas cepas, todas las ninfas terminaron la alimentación dentro de cuatro a cinco días, mientras que la mayoría cayó en el cuarto día. Al intentar este protocolo, es importante afeitarse un área suficiente de la piel del ratón y fijar eficazmente la cápsula para evitar su desprendimiento accidental durante el experimento. Además del estudio de la biología básica de las garrapatas, este método se puede utilizar para explorar la transmisión de patógenos de garrapata a huésped o huésped a garrapatas.
Además, la opción de reutilizar el ratón ofrece la posibilidad de múltiples re-infestaciones que pueden ser beneficiosas para estudios inmunológicos o investigar diferentes transmisiones de patógenos transmitidos por garrapatas.
