Nossa técnica é adequada para vários tipos de experimentos, mas nosso modelo de mouse é necessário para alimentar carrapatos e é necessário manter os carrapatos em área fechada para fácil coleta e monitoramento. O benefício deste método simples é a eficiência, a curta duração e a capacidade de monitorar ou coletar carrapatos em diferentes pontos de tempo de um experimento. Nosso sistema é adequado para estudar biologia do carrapato, interações de patógenos vetoriais hospedeiros ou avaliar diferentes medidas de controle desses artrópodes medicamente importantes.
Este método requer precisão e atenção aos detalhes, pois os estágios imaturos do carrapato são pequenos e alimentá-los em camundongos requer que a cápsula fechada seja firmemente ligada ao mouse por vários dias. Comece por colocar juntos uma espuma EVA de dois milímetros, uma espuma adesiva dupla pegajosa. Use um furo de couro de 20 milímetros de diâmetro para cortar um círculo das peças de espuma.
Em seguida, use um furo de 12 milímetros para cortar o interior. Retire a tira de papel protetor da espuma adesiva dupla pegajosa e conecte um círculo plástico transparente de 20 milímetros à espuma. Se alimentar larvas, não remova a tira de papel protetor da espuma adesiva e prossiga diretamente com a fixação da cápsula.
Faça uma fenda de um centímetro no plástico transparente e use um pino entomológico para criar pelo menos 10 pequenos orifícios para evaporação da umidade durante o experimento. Depois que o mouse tiver sido anestesiado coloque-o na almofada de manipulação e conecte um cone de nariz para fornecimento contínuo de isoflurane. Certifique-se de que a taxa de respiração é inferior a 80 respirações por minuto, ajustando o nível isoflurane.
Raspe a parte anterior do mouse por trás das omoplatas até a área logo atrás das orelhas criando uma área raspada que é maior que a superfície da cápsula. Aplique cola de látex não irritante em todo o local de espuma EVA da cápsula e espere por um minuto. Coloque a cápsula nas costas do mouse e aplique pressão constante por três minutos especialmente no lado esquerdo e direito da cápsula.
Levante ligeiramente a cápsula para verificar visualmente seu apego à pele. Para garantir que o acessório firme da cápsula aplique uma leve pressão constante de três minutos com os dedos especialmente no lado esquerdo e direito da cápsula. Se forem encontradas regiões não anexadas, aplique mais cola com uma espátula e pressione por mais três minutos.
Se uma região de não-anexação se formar durante o experimento fixá-la da mesma forma. Introduza ninfas individuais na cápsula através da fenda de um centímetro. Esprema ligeiramente a cápsula de dois lados para permitir que o plástico transparente dobre e empurre a ninfa dentro da cápsula.
Vire os fórceps 90 graus e puxe-os para fora. Para infestação de larvas, remova o papel da cápsula anexada e coloque a seringa com as larvas diretamente dentro. Deposite os carrapatos empurrando o êmbolo da seringa e gire suavemente o êmbolo em direção à pele para remover as larvas presas restantes.
Uma vez que as larvas são depositadas na pele feche a cápsula anexando o círculo plástico transparente. Corte uma tira de 3,5 milímetros da faixa de plástico protetora e aplique a faixa de plástico protetora ao redor da cápsula e, em seguida, devolva o mouse para a gaiola. Para coletar os carrapatos, crie um corte em forma de cruz no plástico com um bisturi e use fórceps para coletar os carrapatos.
Se necessário, recue a cápsula colocando um adesivo de plástico no plástico transparente. o mesmo patch de plástico pode ser usado se a coleta de carrapatos em vários pontos de tempo for necessária. Alternativamente, o mouse pode ser eutanizado e os carrapatos coletados ou isolados manualmente após a remoção da cápsula.
Para uma recuperação bem sucedida dos ratos, mantenha-os em uma gaiola por mais uma semana e deixe as cápsulas se soltarem naturalmente. Uma vez que a cápsula está desligada, verifique se há reações anormais na pele. Aplique qualquer loção emoliente se houver alguma irritação.
Este protocolo permite alimentar carrapatos duros imaturos em cápsulas de espuma EVA aplicadas nas costas de um rato. O uso da secagem rápida e da cola de látex não irritante garante que a cápsula esteja firmemente presa dentro de três minutos e permaneça presa por pelo menos sete dias. Anexar duas cápsulas torna possível alimentar dois grupos diferentes de carrapatos no mesmo animal.
Além disso, a recuperação completa dos camundongos após os experimentos, possibilita reutilizar os animais e evitar a eutanásia. Este sistema foi usado com sucesso para alimentar ninfas ixodes ricinus. Uma taxa de sucesso moderada a alta foi alcançada em duas cepas diferentes de camundongos.
Em ambas as cepas, todas as ninfas terminaram a alimentação dentro de quatro a cinco dias, enquanto a maioria caiu no quarto dia. Ao tentar este protocolo, é importante raspar uma área suficiente da pele do rato e efetivamente anexar a cápsula para evitar seu desprendimento acidental durante o experimento. Além do estudo da biologia básica do carrapato, este método pode ser usado para explorar a transmissão de patógenos do carrapato ao hospedeiro ou hospedeiro para carrapatos.
Além disso, a opção de reutilizar o camundongo oferece uma possibilidade de múltiplas re-infestações que podem ser benéficas para estudos imunológicos ou investigar diferentes transmissões de patógenos transmitidas por carrapatos.
