我々の技術は様々な種類の実験に適しているが、私達のマウスモデルはダニを供給するために必要であり、容易な収集および監視のために囲まれた区域でダニを保つために必要である。この単純な方法の利点は、効率、短い期間、および実験のさまざまな時点でのティックを監視または収集する機能です。私たちのシステムは、ダニ生物学、宿主-ベクター病原体相互作用を研究したり、これらの医学的に重要な節足動物の異なる制御尺度を評価するのに適しています。
この方法は、未熟なダニの段階が小さく、マウスにそれらを供給するために、数日間マウスにしっかりと取り付けられるように封じられたカプセルを必要とするので、細部に正確さと注意が必要です。2ミリメートルEVAフォーム、接着剤二重粘着性の泡を一緒に貼り付けて開始します。直径20ミリメートルのレザーホールパンチを使用して、泡片から円をカットします。
その後、12ミリメートルの穴パンチを使用して内部をカットします。粘着状の二重粘着性の泡から保護紙のストリップを剥がし、20ミリメートル透明なプラスチックサークルを泡に取り付けます。幼虫を授乳する場合は、保護紙を粘着フォームから取り外せず、カプセルを取り付けて直接進んでください。
透明なプラスチックに1センチのスリットを作り、その後、実験中に水分蒸発のための少なくとも10の小さな穴を作成するために、内膜ピンを使用してください。マウスが麻酔された後、操作パッド上に置き、連続イオブルラン供給のために鼻コーンを取り付けます。イオブルランのレベルを調整して、呼吸数が毎分80回未満であることを確認します。
肩甲骨の後ろから、耳のすぐ後ろの部分までマウスの前部を剃り、カプセル表面よりも大きい剃った領域を作ります。カプセルのEVAフォームサイト全体に非刺激ラテックス接着剤を塗布し、1分間待ちます。マウスの背中にカプセルを置き、特にカプセルの左右に3分間一定の圧力を加えます。
カプセルを少し持ち上げて、皮膚への付着を視覚的に確認します。カプセルのしっかりとしたアタッチメントを確保するために、特にカプセルの左右に指でわずか3分間の一定圧力を加えます。アタッチされていない領域が見つかった場合は、へらでさらに接着剤を塗布し、さらに3分間押します。
実験中に添付ファイル以外の領域が形成される場合は、同じ方法で修正します。1センチのスリットを介してカプセルに個々のニンフを導入します。カプセルを両面から少し絞って透明なプラスチックを曲げ、カプセルの中にニンフを押します。
鉗子を90度回して引き出します。幼虫の侵入の場合は、付属のカプセルから紙のスリップを取り出し、注射器を幼虫と一緒に直接中に置きます。注射器プランジャーを押してダニを堆積させ、プランジャーを皮膚に向かってそっと回して残りの幼虫を取り除きます。
幼虫が皮膚に沈着したら、透明なプラスチック円を取り付けることでカプセルを閉じます。保護プラスチックバンドの3.5ミリメートルストリップをカットし、カプセルの周りに保護プラスチックバンドを適用し、ケージにマウスを返します。ダニを収集するには、メスでプラスチックに十字架のカットを作成し、ティックを収集するために鉗子を使用します。
必要に応じて、透明プラスチックに粘着プラスチックパッチを貼り付けてカプセルを再閉してください。複数のタイム ポイントでのティックの収集が必要な場合は、同じプラスチック パッチを使用できます。あるいは、マウスを安楽死させ、カチマを回収したり、カプセルを取り外した後に手動で取り外すことができます。
マウスの回復を成功させるために、さらに1週間ケージに入れておき、カプセルを自然に取り外します。カプセルがオフになったら、皮膚の異常な反応がないか確認します。刺激がある場合は、任意のエモリエントローションを適用します。
このプロトコルはマウスの背に適用されるEVA泡のカプセルの未熟な堅いダニを供給することを可能にする。速い乾燥および非刺激ラテックスの接着剤の使用は、カプセルが3分以内にしっかりと取り付けられ、少なくとも7日間取り付けられたままであることを保証する。2つのカプセルを取り付けると、同じ動物に2つの異なるダニのグループを供給することが可能になります。
さらに、実験後のマウスの完全な回復は、動物を再利用し、安楽死を避けることを可能にする。このシステムは、イコデス・リシヌス・ニンフを供給するために正常に使用されています。2種類の異なるマウス株で中程度から高いエングレージェント成功率が達成された。
両方の株では、すべてのニンフは4〜5日以内に給餌を終え、大多数は4日目に降板しました。このプロトコルを試みるとき、マウスの皮膚の十分な領域を剃り、実験中に偶発的な剥離を避けるためにカプセルを効果的に取り付けることが重要です。基本的なダニ生物学の研究に加えて、この方法は、ダニからホストまたはホストに病原体の伝達を探索するために使用することができます。
さらに、マウスを再利用するオプションは、免疫学的研究や異なるダニ媒介病原体の伝染を調査するのに有益であり得る複数の再出入の可能性を提供する。
