أسلوبنا هو مناسبة لأنواع مختلفة من التجارب ولكن لدينا نموذج الماوس مطلوب لتغذية القراد وضروري للحفاظ على القراد في منطقة مغلقة لجمع ورصد سهلة. والفائدة من هذه الطريقة البسيطة هي الكفاءة، والقصّر المدة، والقدرة على مراقبة أو جمع القراد في نقاط زمنية مختلفة من التجربة. نظامنا مناسب لدراسة بيولوجيا القراد ، والتفاعلات المسببة للأمراض المضيفة المتجهة أو تقييم مقياس التحكم المختلف لهذه المفصليات المهمة طبيًا.
تتطلب هذه الطريقة الدقة والاهتمام بالتفاصيل حيث أن مراحل القراد غير الناضجة صغيرة وإطعامها على الفئران يتطلب أن تكون الكبسولة المغلقة متصلة بالماوس لعدة أيام. تبدأ من خلال التمسك معا رغوة EVA 2 ملليمتر، لاصقة رغوة لزجة مزدوجة. استخدام 20 ملليمتر قطرها ثقب الجلود لكمة لقطع دائرة من القطع الرغوة.
ثم، استخدام لكمة حفرة 12 ملليمتر لقطع الداخلية. قشر شريط ورق واقية من لاصقة رغوة لزجة مزدوجة وإرفاق دائرة بلاستيكية شفافة 20 ملليمتر إلى الرغوة. إذا تغذية اليرقات، لا تقم بإزالة شريط ورق واقية من رغوة لاصقة والمضي قدما مباشرة مع كبسولة إرفاق.
جعل شق سنتيمتر واحد في البلاستيك الشفاف ثم استخدام دبوس الحشرات لخلق ما لا يقل عن 10 ثقوب صغيرة لتبخر الرطوبة خلال التجربة. بعد أن تم تخدير الماوس مكان على لوحة التلاعب ونرفق مخروط الأنف للحصول على isoflurane مستمر. تأكد من أن معدل التنفس أقل من 80 نفسًا في الدقيقة عن طريق ضبط مستوى الأيزوفلوران.
يحلق الجزء الأمامي من الفأرة من خلف شفرات الكتف إلى المنطقة خلف الأذن مباشرةً مما يخلق مساحة حليقة أكبر من سطح الكبسولة. تطبيق غير مزعجة الغراء اللاتكس إلى موقع رغوة إيفا كامل من الكبسولة وانتظر لمدة دقيقة واحدة. ضع الكبسولة على ظهر الماوس واطبق ضغطًا ثابتًا لمدة ثلاث دقائق خاصة على الجانب الأيسر والأيّني من الكبسولة.
ارفع الكبسولة قليلاً للتحقق من تعلقها بالبشرة بصرياً. لضمان وجود مرفق ثابت من الكبسولة تطبيق ضغط ثابت طفيف لمدة ثلاث دقائق مع الأصابع وخاصة على الجانب الأيسر والأيّني من الكبسولة. إذا تم العثور على المناطق غير المرفقة، وتطبيق المزيد من الغراء مع ملعقة واضغط لمدة ثلاث دقائق أخرى.
إذا كانت منطقة غير مرفقة النماذج أثناء التجربة إصلاحه بنفس الطريقة. أدخل الحوريات الفردية في الكبسولة عبر فتحة سنتيمتر واحد. اضغط قليلا على الكبسولة من جانبين للسماح للبلاستيك الشفاف بالانحناء ثم دفع الحورية داخل الكبسولة.
بدوره ملقط 90 درجة وسحبها. بالنسبة لعدوى اليرقات ، قم بإزالة زلة الورق من الكبسولة المرفقة ووضع الحقنة مع اليرقات داخلها مباشرة. إيداع القراد عن طريق دفع المكبس حقنة ثم تحويل بلطف المكبس نحو الجلد لإزالة اليرقات المرفقة المتبقية.
بمجرد أن يتم ترسيب اليرقات على الجلد إغلاق الكبسولة عن طريق ربط الدائرة البلاستيكية الشفافة. قطع شريط 3.5 ملليمتر من الشريط البلاستيك واقية وتطبيق الفرقة البلاستيكية الواقية حول الكبسولة ثم العودة الماوس إلى القفص. لجمع القراد، إنشاء قطع على شكل صليب في البلاستيك مع مشرط واستخدام ملقط لجمع القراد.
إذا لزم الأمر، إعادة غلق الكبسولة عن طريق التمسك رقعة من البلاستيك لاصق على البلاستيك الشفاف. ويمكن استخدام نفس التصحيح البلاستيك إذا كان جمع القراد في نقاط زمنية متعددة مطلوب. بدلا من ذلك، يمكن أن يكون الماوس القتل الرحيم والقراد التي تم جمعها أو فصل يدويا بعد إزالة كبسولة.
للشفاء الناجح للفئران، الاحتفاظ بها في قفص لمدة أسبوع إضافي واحد والسماح للكبسولات فصل بشكل طبيعي. بمجرد إيقاف الكبسولة، تحقق من وجود تفاعلات غير طبيعية على الجلد. تطبيق أي محلول المطرية إذا كان هناك أي تهيج.
هذا البروتوكول يجعل من الممكن لإطعام القراد الثابت غير ناضجة في كبسولات رغوة EVA المطبقة على ظهر الماوس. استخدام الغراء اللاتكس التجفيف السريع وغير مزعجة يضمن أن يتم تركيبها بحزم كبسولة في غضون ثلاث دقائق وتبقى تعلق لمدة سبعة أيام على الأقل. ربط كبسولتين يجعل من الممكن لإطعام مجموعتين مختلفتين من القراد على نفس الحيوان.
وعلاوة على ذلك، الانتعاش الكامل للفئران بعد التجارب، يجعل من الممكن إعادة استخدام الحيوانات وتجنب القتل الرحيم. وقد استخدم هذا النظام بنجاح لتغذية حوريات ريوس ريوس. تم تحقيق معدل نجاح متوسط إلى عالي في سلالات فأرة مختلفة.
في كل من السلالات، جميع الحوريات الانتهاء من التغذية في غضون أربعة إلى خمسة أيام في حين انخفض معظم قبالة في اليوم الرابع. عند محاولة هذا البروتوكول، من المهم أن يحلق مساحة كافية من جلد الماوس وأن نعلق على نحو فعال على الكبسولة لتجنب انفصالها العرضي أثناء التجربة. إلى جانب دراسة بيولوجيا القراد الأساسية ، يمكن استخدام هذه الطريقة لاستكشاف انتقال مسببات الأمراض من القراد إلى المضيف أو المضيف إلى القراد.
بالإضافة إلى ذلك، فإن خيار إعادة استخدام الماوس يوفر إمكانية لعدّة حالات إعادة الإصابة التي يمكن أن تكون مفيدة للدراسات المناعية أو التحقيق في مختلف انتقالات الأمراض التي تنتقل عن طريق القراد.
