우리의 기술은 다양한 유형의 실험에 적합하지만 마우스 모델은 진드기를 먹이기 위해 필요하며 쉽게 수집 및 모니터링을 위해 밀폐 된 영역에 진드기를 유지하는 데 필요합니다. 이 간단한 방법의 장점은 효율성, 짧은 기간 및 실험의 다른 시점에서 진드기를 모니터링하거나 수집하는 기능입니다. 우리의 시스템은 진드기 생물학, 호스트 벡터 병원체 상호 작용을 연구하거나 이 의학적으로 중요한 절지동물의 다른 통제 측정을 평가하기에 적합합니다.
이 방법은 미숙한 진드기 단계가 작기 때문에 세부 사항에 대한 정확성과 주의가 필요하며 마우스에 먹이를 주려면 밀폐 된 캡슐을 며칠 동안 마우스에 단단히 부착해야합니다. 접착제 이중 끈적 끈적한 거품인 2밀리미터 EVA 폼을 한데 모으세요. 직경 20mm의 가죽 구멍 펀치를 사용하여 폼 조각에서 원을 자른다.
그런 다음 12mm 홀 펀치를 사용하여 내부를 잘라냅니다. 접착제 이중 끈적 끈적한 거품에서 보호 용지 스트립을 껍질을 벗기고 20mm 투명 플라스틱 원을 폼에 부착합니다. 유충을 먹이는 경우 접착제 폼에서 보호 용지 스트립을 제거하고 캡슐 부착으로 직접 진행하십시오.
투명 플라스틱에 1센티미터 슬릿을 만든 다음 곤충 학적 핀을 사용하여 실험 중에 수분 증발을 위해 적어도 10 개의 작은 구멍을 만듭니다. 마우스가 마취된 후 조작 패드에 배치하고 연속 이소플루란 공급을 위해 코 콘을 부착한다. 호흡 속도가 분당 80회 미만인지 확인하여 이소플루란 수준을 조정합니다.
어깨 블레이드 뒤에서 마우스의 앞쪽 부분을 면도하여 귀 바로 뒤에 있는 영역까지 면도하여 캡슐 표면보다 더 큰 면도 부위를 만듭니다. 캡슐의 전체 EVA 폼 부위에 자극적이지 않은 라텍스 접착제를 바르고 1분 동안 기다립니다. 캡슐을 마우스 뒷면에 놓고 캡슐의 왼쪽과 오른쪽에 3 분 동안 일정한 압력을 가하십시오.
캡슐을 약간 들어 올려 피부에 부착된 것을 시각적으로 확인합니다. 캡슐의 단단한 부착을 보장하기 위해 특히 캡슐의 왼쪽과 오른쪽에 손가락으로 약간의 3 분 일정한 압력을 가합니다. 부착되지 않은 영역이 발견되면 주걱으로 더 많은 접착제를 바르고 3분 동안 누릅니다.
실험 중에 첨부되지 않은 영역이 형성되면 동일한 방식으로 수정합니다. 1센티미터 슬릿을 통해 캡슐에 개별 님프를 소개합니다. 투명 플라스틱이 구부러지는 다음 캡슐 내부의 님프를 밀어 넣을 수 있도록 캡슐을 양면에서 약간 짜냅니다.
집게를 90도 돌리고 꺼냅니다. 유충 감염의 경우 부착된 캡슐에서 종이 전표를 제거하고 주사기를 애벌레와 함께 직접 내부에 놓습니다. 주사기 플런저를 밀어 진드기를 데우고 플런저를 피부쪽으로 부드럽게 돌려 나머지 부착된 애벌레를 제거합니다.
애벌레가 피부에 증착되면 투명한 플라스틱 원을 부착하여 캡슐을 닫습니다. 보호 플라스틱 밴드의 3.5 밀리미터 스트립을 자르고 캡슐 주위에 보호 플라스틱 밴드를 적용한 다음 마우스를 케이지로 돌려줍니다. 진드기를 수집하려면 메스가 있는 플라스틱에 십자가 모양의 컷을 만들고 집게를 사용하여 진드기를 수집합니다.
필요한 경우 투명 플라스틱에 접착제 플라스틱 패치를 부착하여 캡슐을 다시 닫습니다. 여러 시간 지점에서 진드기를 수집해야 하는 경우 동일한 플라스틱 패치를 사용할 수 있습니다. 또는, 마우스는 캡슐 제거 후 수집되거나 수동으로 분리된 진드기를 안락사시킬 수 있다.
마우스의 성공적인 회복을 위해, 1 주일 동안 케이지에 보관하고 캡슐이 자연스럽게 분리할 수 있도록하십시오. 캡슐이 꺼지면 피부에 비정상적인 반응을 확인하십시오. 자극이 있는 경우 연화제로션을 바르는다.
이 프로토콜을 사용하면 마우스 뒷면에 적용되는 EVA 폼 캡슐에서 미숙한 하드 틱을 공급할 수 있습니다. 빠른 건조 및 자극적이지 않은 라텍스 접착제를 사용하면 캡슐이 3 분 이내에 단단히 부착되어 적어도 7 일 동안 부착 되어 있습니다. 두 캡슐을 부착하면 동일한 동물에 두 개의 서로 다른 진드기 그룹을 공급할 수 있습니다.
더욱이, 실험 후 마우스의 완전한 회복은 동물을 재사용하고 안락사를 피할 수 있게 한다. 이 시스템은 성공적으로 익소드 리시누스 님프를 공급하는 데 사용되었습니다. 중등도에서 높은 engorgement 성공률은 두 개의 다른 마우스 균주에서 달성되었다.
두 균주에서, 모든 님프는 4 ~ 5 일 이내에 먹이를 완료하고 대다수는 네 번째 날에 떨어졌다. 이 프로토콜을 시도할 때, 마우스의 피부의 충분한 영역을 면도하고 효과적으로 실험 도중 우발적인 분리를 피하기 위하여 캡슐을 붙이는 것이 중요합니다. 기본적인 진드기 생물학의 연구 이외에, 이 방법은 진드기에서 호스트또는 진드기에 호스트에 병원체 전송을 탐구하기 위하여 이용될 수 있습니다.
또한 마우스를 재사용하는 옵션은 면역 학적 연구 또는 다른 진드기 매개 병원체 전달에 도움이 될 수있는 다중 재 감염가능성을 제공합니다.
