Наша методика подходит для различных типов экспериментов, но наша модель мыши необходима для кормления клещей и необходима, чтобы держать клещей в закрытой области для легкого сбора и мониторинга. Преимущество этого простого метода заключается в его эффективности, короткой продолжительности и способности контролировать или собирать клещей в разные моменты эксперимента. Наша система подходит для изучения биологии клещей, взаимодействия патогенов-хост-векторов или оценки различных показателей контроля этих важных с медицинской точки зрения членистоногих.
Этот метод требует точности и внимания к деталям, как незрелые стадии клеща малы и кормления их на мышах требует прилагается капсулы должны быть прочно прикреплены к мыши в течение нескольких дней. Начните с слипания двухмиллиметровой пены EVA, клейкой двойной липкой пены. Используйте 20 миллиметров диаметром кожаное отверстие удар, чтобы вырезать круг из кусочков пены.
Затем используйте 12-миллиметровый удар отверстия, чтобы сократить интерьер. Очистите защитную полоску бумаги от клейкой двойной липкой пены и прикрепите к пене прозрачный пластиковый круг диаметром 20 миллиметров. При кормлении личинок не снимите защитную бумажную полоску с клея и проступить непосредственно с присоединением капсулы.
Сделайте одну сантиметровую щель в прозрачном пластике, затем используйте энтомологический штифт, чтобы создать по крайней мере 10 небольших отверстий для испарения влаги во время эксперимента. После того, как мышь была анестезирована место его на манипуляции площадку и прикрепить нос конус для непрерывного подачи изофлюран. Убедитесь, что частота дыхания составляет менее 80 вдохов в минуту, регулируя уровень изофлурана.
Бритье передней части мыши из-за лопатки до области сразу за ушами создания бритой области, которая больше, чем поверхность капсулы. Нанесите не раздражающий латексный клей на весь пенный участок капсулы EVA и подождите одну минуту. Поместите капсулу на спину мыши и применять постоянное давление в течение трех минут, особенно на левой и правой стороне капсулы.
Слегка поднимите капсулу, чтобы визуально проверить ее привязанность к коже. Для обеспечения твердого крепления капсулы нанесите небольшое трехминутное постоянное давление пальцами, особенно на левой и правой стороне капсулы. Если неприложенные области найдены, нанесите больше клея шпателем и нажмите еще на три минуты.
Если во время эксперимента образуется область неприкрепления, исправьте ее таким же образом. Введи отдельных нимф в капсулу через одну сантиметровую щель. Слегка сожмите капсулу с двух сторон, чтобы прозрачный пластик согнуть затем нажмите нимфы внутри капсулы.
Поверните типсы на 90 градусов и вытащите их. Для заражения личинок удалите лист бумаги из прикрепленной капсулы и поместите шприц с личинками прямо внутри. Депозит клещей, нажав шприц поршень затем осторожно поверните поршень к коже, чтобы удалить оставшиеся прилагается личинок.
После того, как личинки откладываются на кожу, закройте капсулу, прикрепив прозрачный пластиковый круг. Вырежьте 3,5-миллиметровую полоску защитной пластиковой полосы и нанесите защитную пластиковую полосу вокруг капсулы, затем верните мышь в клетку. Чтобы собрать клещей, создать крестообразный разрез в пластике скальпелем и использовать типсы для сбора клещей.
При необходимости, reclose капсулы, приклеив клей пластиковый патч на прозрачный пластик. тот же пластиковый патч может быть использован, если сбор клещей в нескольких точках времени не требуется. Кроме того, мышь может быть усыпана и клещей собраны или вручную отделены после удаления капсулы.
Для успешного восстановления мышей, держать их в клетке в течение еще одной недели, и пусть капсулы отсоединяются естественным путем. После того, как капсула выключена, проверьте на аномальные реакции на коже. Применить любой смягчающий лосьон, если есть раздражение.
Этот протокол позволяет кормить незрелых твердых клещей в капсулах пены EVA, натязвимых на спину мыши. Использование быстрой сушки и не раздражает латексный клей гарантирует, что капсула прочно прилагается в течение трех минут и остается прилагается, по крайней мере семь дней. Прикрепление двух капсул позволяет кормить двух разных групп клещей одним и тем же животным.
Кроме того, полное выздоровление мышей после экспериментов позволяет повторно использовать животных и избежать эвтаназии. Эта система была успешно использована для кормления Ixodes ricinus нимфы. Умеренный и высокий уровень успеха engorgement был достигнут в двух различных штаммов мыши.
В обоих штаммов, все нимфы закончили кормления в течение четырех-пяти дней, а большинство высадили на четвертый день. При попытке этого протокола, важно, чтобы побрить достаточную область кожи мыши и эффективно прикрепить капсулу, чтобы избежать его случайного отслоения во время эксперимента. Помимо изучения основной биологии клещей, этот метод может быть использован для изучения передачи патогенов от клеща к хозяину или хост клещей.
Кроме того, возможность повторного использования мыши предлагает возможность для нескольких повторного заражения, которые могут быть полезны для иммунологических исследований или исследования различных клещевого патогена передач.
