Este estudio describe un modelo animal grande reproducible de lesión renal de la reperfusión de la isquemia, que se puede utilizar para estudiar la patofisiología de lesión de riñón aguda, y para explorar modalidades terapéuticas potenciales. Este método es altamente reproducible y minimiza el impacto de la respuesta inflamatoria al limitar la cantidad de insulto al cuerpo en comparación con un enfoque abierto. Este modelo preclínico imita escenarios clínicos, como el trasplante renal, la hipoperfusión renal tras shock cardiogénico, los procedimientos transcatéteres que dan lugar a isquemia renal y los procedimientos cardiovasculares con tiempos de parada cardio-circulatoria prolongados.
Para empezar, desinfecte el área lateral derecha del cuello aplicando betadina y luego etanol al 95% tres veces. Envolvía al animal de forma estéril. Realizar un corte para el cateterismo de la arteria carótida derecha y la vena yugular derecha.
Retraiga el músculo esternocleidomastoideo lateralmente y diseccionarlo hasta la arteria carótida derecha y la vena yugular derecha. Inserte una vatina de angiografía 5F tanto en la arteria como en la vena. Asegurarlo con una sutura de seda 2-0.
Inserte una vatina de angiografía 5F usando la técnica de Seldinger en la arteria femoral izquierda perforando la arteria con una aguja hueca. Inserte un alambre guía de punta blanda a través de la luz y avance hacia la arteria femoral. Sostenga el cable guía con una mano mientras retira la aguja.
Pase la vatina de angiografía sobre el alambre guía en la arteria femoral y retire el alambre guía usando la guía si es necesario. Administrar por vía intravenosa 200 UI por kilogramo de heparina sódica para lograr la anticoagulación sistémica. Para realizar la angiografía, inyecte un agente de contraste yodado bajo fluoroscopia para identificar las arterias renales.
Identifique las arterias renales y avance manualmente el alambre guía en el catéter guía. Coloque el catéter guía 5F JL4 en la arteria renal izquierda a través de la arteria carótida derecha. Coloque el segundo catéter guía 5F JL4 en la arteria renal derecha a través de la arteria femoral izquierda.
Utilice los cables guía para dirigir una angioplastia transluminal percutánea 5F, o catéter de dilatación PTA, en cada arteria renal. Coloque cada catéter con balón en su lugar y conecte una línea de presión a cada catéter. Compruebe la presencia de formas de onda de pulso arterial en el monitor de presión para asegurar el posicionamiento correcto del catéter.
Infle cada globo y apunte a una presión de aproximadamente 2,5 presiones atmosféricas dentro del globo. Para confirmar el cese del flujo sanguíneo a los riñones, observe el aplanamiento de la forma de onda del pulso en la punta del catéter con balón. Inyecte un medio de contraste yodado en una dilución 1:1 con solución salina y compruebe si hay opacificación de los vasos renales.
Después de 60 minutos de oclusión, desinflar cuidadosamente y retirar los catéteres con balón de las arterias renales. Realizar una angiografía utilizando un medio de contraste diluido 1:1 para confirmar la permeabilidad de la arteria renal y el establecimiento de reperfusión renal. Retire la vatina de la angiografía 5F de la arteria femoral izquierda.
Aplicar a presión en el sitio de cateterismo durante 30 minutos. Invertir el efecto de la heparina mediante la administración de tres miligramos por kilogramo de protamina hasta la normalización del tiempo de coagulación activa. Para tomar muestras de orina durante el período postoperatorio, asegure un tubo al catéter de Foley con una sutura de seda 2-0 usando una puntada interrumpida en la piel.
Para la toma de muestras de sangre, deje las vatinas de angiografía en la arteria carótida derecha y la vena yugular derecha en su lugar, y asegurarlas con una sutura de seda 2-0. administrar tres miligramos por kilogramo de bupivacaína en el sitio de la incisión para minimizar el dolor. Continuar hidratando al animal con 0,9 cloruro de sodio durante un total de dos horas después del final de la isquemia.
Cierre la incisión del cuello con una sutura de seda 2-0 usando una puntada interrumpida en dos capas. Coloque un parche de fentanilo de 25 a 50 microgramos por hora en la espalda del animal para minimizar el dolor postoperatorio, y vigile al animal en ventilación mecánica hasta que despierte. Recoja las muestras finales de sangre y orina y calcule la producción de orina.
Realice una incisión de laparotomía de la línea media usando una cuchilla de tamaño 10 desde la xifoidea hasta la pelvis media. Use un retractor lateral recto para retraer la piel abdominal. Diseccione los accesorios peritoneales laterales de la pared abdominal para exponer el retroperitoneo derecho e izquierdo.
Identificar y diseccionar sin rodeos tanto las arterias renales como las venas. Ligar tanto arterias renales como venas con una sutura de seda 2-0 y realizar nefrectomías bilaterales para recolectar muestras de tejido entero para su análisis histológico y metabólico. La función renal fue evaluada determinando la salida de la orina, el eGFR, la creatina del plasma, y el BOLLO.
Después de 60 minutos de obstrucción bilateral de la arteria renal, la salida de la orina fue disminuida y permanecía perceptiblemente esta manera en seis y 24 horas que seguían la reperfusión. Semejantemente, una disminución significativa fue observada de eGFR, que cayó de la línea de fondo con respecto al final de la isquemia en dos horas, seis horas, y 24 horas de reperfusión. La creatinina plasmática aumentó significativamente a las dos, seis y 24 horas de reperfusión en comparación con el valor basal.
El BOLLO fue aumentado con respecto a la línea de fondo en seis y 24 horas de reperfusión. Las áreas necróticas y hemorrágicas evidentes fueron distribuidas desigual en ambos riñones en el final de los 60 minutos de isquemia renal bilateral y de las 24 horas de la reperfusión. Masson' la coloración tricroma de s reveló la necrosis coagulativa confluente, que fue situada en los túbulos próximos de la corteza renal.
También se evaluaron las secciones embebidos en plástico. Todos masson' las diapositivas del tricromo de s fueron evaluadas para la necrosis de la célula, la pérdida de borde del cepillo, la formación del molde, y la dilatación del túbulo. La necrosis tubular aguda, o el atn que anotaba, demostró lesión significativa a la corteza y a la médula renales.
Al realizar este protocolo, compruebe la posición de los sitios del globo en la proximidad de RC, y ocluya totalmente el flujo al riñón. Asegúrese de que no se está enroscando en esa agua. Después de este procedimiento, las puntas de prueba endovasculares del flujo del catéter se pueden insertar en las arterias renales para evaluar el flujo de sangre renal, o las biopsias renales se pueden realizar para evaluar lesión renal del tejido.
