온라인 성장 측정 및 사용자 정의 가능한 조명 체계를 갖춘 실험실 광생물 반응기 운영

이 프로토콜은 사용자 입력이 거의 없는 복제된 미세 조류 실험을 가능하게 합니다. 기술적이고 값비싼 상업용 사진 바이오 반응기를 구매하지 않고 수동 모니터링에서 벤치탑 플라스크로 업그레이드하려는 연구원을 위해 설계되었습니다. 이 광 바이오 반응기는 광비와 유연성, 지속적인 성장 모니터링 및 삼중 복제를 가능하게 합니다.

시작하려면 데이터 수집 소프트웨어를 엽니다. 구성 페이지를 채우고 교정 파일을 해당 센서에 할당합니다. 디렉토리 파일 이름 아래에서 해당 디지털 입력 모듈 포트 번호 폴더를 선택합니다.

현재 폴더를 클릭하고 모든 포트에 대해 반복합니다. 그런 다음 확인을 클릭하여 로깅 페이지로 이동합니다. 다음으로, 배양 배지로 원하는 부피로 유리 병을 채우고 3 개의 균형 잡힌 50 밀리리터 튜브에서 스톡 배양 물을 원심 분리하여 3 개의 펠릿을 수득합니다.

혈청학적 피펫과 신선한 배지를 사용하여 각 병에 하나의 펠릿을 추가합니다. 그런 다음 고무 마개와 나사산 조리개 나사 캡으로 병 입구를 밀봉하기 전에 25 x 8mm 마그네틱 교반기를 각 병에 떨어 뜨립니다. 옵션 샘플링 포트가 설치되어 있으면 밸브를 닫습니다.

PVC 파이프 내부의 각 가스 라인 끝을 찾은 후 밸브의 메일 루어 포트에 바늘을 부착합니다. 각 고무 마개를 해당 바늘로 뚫어 각 병을 가스 센서에 연결합니다. 그런 다음 화면 왼쪽의 확인란을 선택하고 시작을 클릭한 다음 파일 이름을 입력하여 각 가스 센서를 개별적으로 실행합니다.

확인을 클릭하고 모든 센서에 대해 반복합니다. 다음으로 포토 바이오 리액터를 켜고 디지털 멀티플렉스 조명 컨트롤러가 전원 공급 장치에 연결되어 있는지 확인합니다. 디지털 멀티플렉스 컨트롤러의 버튼을 사용하여 도우미 장면과 사용자 지정된 조명 장면 사이를 전환하여 장치가 올바르게 작동하는지 확인합니다.

병 샘플링의 경우 실험을 시작하기 전에 500ml의 새로운 배지를 추가로 준비하십시오. 샘플을 수집하려면 가스 라인의 밸브를 닫고 10 밀리리터 주사기를 샘플링 포트 밸브에 연결하십시오. 주사기를 연결 한 후 샘플링 포트 밸브를 열고 8 밀리리터의 배양 물을 회수합니다.

그런 다음 샘플링 포트 밸브를 닫고 주사기를 분리하십시오. 그런 다음 8 밀리리터의 신선한 배지가 들어있는 주사기에 샘플링 포트 밸브에 연결합니다. 그런 다음 밸브를 열고 새 매체를 주입하십시오.

마지막으로 샘플링 포트 밸브를 닫고 주사기를 분리합니다. 데이터를 내보내려면 파일 및 오프라인 데이터를 선택합니다. 모든 관련 로그 파일을 선택한 후 데이터를 스프레드시트 소프트웨어로 내보내고 저장합니다.

성공적인 실험은 밀접하게 복제 된 일주 산소 생산 패턴을 특징으로합니다. 산소 유량은 배양물의 성장 속도에 대한 대용물 역할을 합니다. 조명 시간 동안 가스 생산은 꾸준히 증가하고 조명이 없는 시간에는 가스 생산이 중단됩니다.

4 일 동안 생성 된 산소의 총량은 처리 A에서 316 밀리리터에서 처리에서 902 밀리리터 범위였으며 초당 미터 제곱 당 300 마이크로 몰 C.In 하루 동안 온도가 최대 섭씨 1.4도 증가했습니다. 배양 온도는 밤새 기준선으로 돌아왔습니다. 초기 바이오매스 농도의 차이에도 불구하고, 처리 B와 C는 동일한 양의 총 바이오매스를 생성하여 중간 pH에서 동일한 변화를 일으켰다.

온라인 산소 유량 데이터에 따르면 각 처리의 일일 성장률은 다양했으며 이는 매일 두 번 pH 측정에도 반영되었습니다. 첫째 날, 처리 B의 성장률은 치료 C의 성장률보다 낮았습니다.반면 3일째에는 처리 B의 성장률이 치료 C의 성장률을 능가했습니다.산소 유량 데이터에 따르면 총 측정 산소를 기반으로 한 성장 추정치는 7가지 예 중 5가지에 유효한 바이오매스 성장을 약간 과소평가할 것으로 예상되었습니다. 두 가지 예가 성장을 과대 평가했습니다.

이것은 밤이 끝날 때 결정되는 실험의 영향을 받았을 수 있습니다. 상당한 야간 호흡은 산소 소비를 향상시키고 병 헤드 공간 진공을 생성하며 가스 센서의 액체로 팩을 빨아들입니다. 호흡이 높을 수 있으면 밤새 머리 공간을 엽니 다.