Este protocolo describe una técnica confiable para realizar y estudiar la fractura de fémur en ratones adultos. Esta técnica es fácil, rápida y requiere herramientas mínimas para ser realizada. Permite la caracterización de diferentes etapas de curación de fracturas.
Los individuos pueden inicialmente tener dificultades para alinear adecuadamente los extremos de la fractura y crear fracturas consistentes entre ratones. Prestar mucha atención al sitio de la fractura, la inserción del pasador y el cierre de la herida mejorarán el éxito de esta cirugía. Para comenzar, prepare al animal inyectando 0.05 miligramos por kilogramo de buprenorfina por vía subcutánea.
Usando un recortador eléctrico afeitado un cuadrado de dos por dos centímetros en ambos muslos correspondiente a la ubicación del fémur. Esterilizar un área afeitada con yodo y enjuagar con una solución de etanol al 70%. Haga una incisión de cinco milímetros y exponga la fascia subyacente.
Exponga el músculo que cubre el fémur cortando la fascia. Separe el músculo del fémur sin dañar el tejido, luego separe el músculo del hueso y asegure el fémur para hacer un corte. Haga un corte transversal en el medio del eje del fémur.
Inserte una aguja guía a través de la sección distal de la cavidad de la médula y empuje el hilo a través de la articulación de la rodilla. Luego, retire la aguja guía y realice un procedimiento similar desde el extremo proximal. Deje la aguja en el extremo proximal con su punta emergida por encima de la piel.
Inserte un pasador estabilizador dentro de la punta de la aguja guía, empujándola para que entre en la cavidad proximal a medida que se extrae la aguja guía, luego deseche la aguja guía. Alinee el extremo distal con el extremo proximal para que el hilo pase a través de la cavidad de la médula distal a medida que sale de la articulación de la rodilla. Tire de la punta del pasador con una pinza quirúrgica para que las secciones proximal y distal se junten.
Luego doble los extremos del pasador quirúrgico hacia el sitio de la fractura para realinear los extremos de la fractura. Usando cortadores de alambre retire el plástico de la base de la aguja. Gire los extremos del pasador para evitar cualquier lesión en el tejido interno.
Finalmente, reemplace los músculos en el fémur y cierre la abertura de la herida pellizcando la piel junto con clips. Realice un procedimiento similar sin la fractura de fémur en la otra pierna y cierre la herida. Después de la cirugía exitosa, las imágenes fluorescentes revelaron varios progenitores de Messent-Kinal, como las células periósticas Prx1 positivas, que se encontraron durante el proceso de reparación de la fractura del fémur.
La tinción azul alciana del fémur fracturado reveló la formación de callo blando. Además, también se determinó el porcentaje de formación de callos o cartílagos. Al emplear Micro-CT aproximadamente 28 días después de la fractura, se detectó el proceso de mineralización junto con la brecha de callo y la brecha de fractura.
También se observó que si los extremos de la fractura no estaban alineados correctamente o asegurados con un alfiler, había una falta de formación insensible en todo o un lado del extremo de la fractura. Al intentar este procedimiento, recuerde alinear cuidadosamente los dos extremos del fémur roto y estabilizarlos con el pasador para garantizar una curación adecuada. Después de la cirugía, el fémur se puede recolectar para imágenes y análisis molecular.
