Этот протокол описывает надежную технику для выполнения и изучения перелома бедренной кости на взрослых мышах. Эта техника проста, быстра и требует минимального количества инструментов. Это позволяет охарактеризовать различные этапы заживления переломов.
Люди могут первоначально бороться с правильным выравниванием концов переломов и созданием последовательных переломов между мышами. Уделяя пристальное внимание месту перелома, вставлению штифта и закрытию раны, вы улучшите успех этой операции. Для начала подготовьте животное, введя 0,05 миллиграмма на килограмм бупренорфина подкожно.
С помощью электрического триммера сбриваем квадрат размером два на два сантиметра на обоих бедрах, соответствующий расположению бедренной кости. Стерилизовать бритую область с помощью йода и промыть 70% раствором этанола. Сделайте пятимиллиметровый разрез и обнажите подлежащую фасцию.
Обнажите мышцу, покрывающую бедренную кость, разрезав фасцию. Отделите мышцу от бедренной кости, не повреждая ткань, затем отделите мышцу от кости и закрепите бедренную кость, чтобы сделать разрез. Сделайте поперечный разрез в середине бедренного стержня.
Вставьте направляющую иглу через дистальный отдел полости костного мозга и протолкните нить через коленный сустав. Затем снимите направляющую иглу и выполните аналогичную процедуру с проксимального конца. Оставьте иглу в проксимальном конце с ее кончиком, появившимся над кожей.
Вставьте стабилизирующий штифт в кончик направляющей иглы, толкая его так, чтобы он входил в проксимальную полость, когда направляющая игла вытягивается, затем отбросьте направляющую иглу. Выровняйте дистальный конец с проксимальным концом так, чтобы нить проходила через дистальную полость костного мозга при выходе из коленного сустава. Потяните кончик штифта с помощью хирургического зажима так, чтобы проксимальный и дистальный отделы были стянуты вместе.
Затем сложите концы хирургического штифта к месту перелома, чтобы выровнять концы перелома. С помощью проволочных резаков удалите пластик с основания иглы. Скрутите концы штифта, чтобы избежать повреждения внутренних тканей.
Наконец, замените мышцы на бедренной кости и закройте раневое отверстие, зажав кожу вместе с зажимами. Выполните аналогичную процедуру без перелома бедренной кости на другой ноге и закройте рану. После успешной операции флуоресцентная визуализация выявила различных мессент-кинальных предшественников, таких как Prx1-положительные периостальные клетки, которые были обнаружены в процессе восстановления перелома бедренной кости.
Альциановое синее окрашивание перелома бедренной кости выявило образование мягкой мозоли. Кроме того, был также определен процент образования мозоли или хряща. При использовании микро-КТ примерно через 28 дней после перелома процесс минерализации был обнаружен вместе с разрывом мозоли и разрывом трещины.
Было также отмечено, что если концы перелома не были выровнены должным образом или закреплены штифтом, то на всей или одной стороне конца перелома отсутствовало черствое образование. При попытке этой процедуры не забудьте тщательно выровнять два конца сломанной бедренной кости и стабилизировать их с помощью штифта, чтобы обеспечить правильное заживление. После операции бедренная кость может быть собрана для визуализации и молекулярного анализа.
