Este protocolo descreve uma técnica confiável para realizar e estudar a fratura do fêmur em camundongos adultos. Esta técnica é fácil, rápida e requer ferramentas mínimas para ser realizada. Permite a caracterização de diferentes estágios de cicatrização de fraturas.
Os indivíduos podem inicialmente lutar para alinhar adequadamente as extremidades da fratura e criar fraturas consistentes entre camundongos. Prestando muita atenção ao local da fratura, à inserção do pino e ao fechamento da ferida vai melhorar o sucesso desta cirurgia. Para começar, prepare o animal injetando 0,05 miligramas por quilograma de buprenorfina subcutânea.
Usando um aparador elétrico, raspe um quadrado de dois por dois centímetros em ambas as coxas correspondentes à localização do fêmur. Esterilize uma área raspada usando iodo e enxágue com solução de 70% de etanol. Faça uma incisão de cinco milímetros e exponha a fáscia subjacente.
Exponha o músculo que cobre o fêmur cortando a fáscia. Separe o músculo do fêmur sem danificar o tecido, em seguida, desprende o músculo do osso e fixe o fêmur para fazer um corte. Faça um corte transversal no meio do eixo do fêmur.
Insira uma agulha guia através da seção distal da cavidade da medula e empurre a rosca através da articulação do joelho. Em seguida, remova a agulha guia e realize um procedimento semelhante da extremidade proximal. Deixe a agulha na extremidade proximal com sua ponta emergindo acima da pele.
Insira um pino estabilizador dentro da ponta da agulha guia, empurrando-o para que entre na cavidade proximal à medida que a agulha guia é puxada para fora, em seguida, descarte a agulha guia. Alinhe a extremidade distal com a extremidade proximal para que a rosca passe pela cavidade da medula distal à medida que sai da articulação do joelho. Puxe a ponta do pino usando um grampo cirúrgico para que as seções proximais e distal sejam puxadas juntas.
Em seguida, dobre as extremidades do pino cirúrgico em direção ao local da fratura para realinhar as extremidades da fratura. O uso de cortadores de arame remove o plástico da base da agulha. Torça as extremidades do pino para evitar qualquer lesão interna do tecido.
Por fim, substitua os músculos do fêmur e feche a abertura da ferida, beliscando a pele com clipes. Realizar um procedimento semelhante sem a fratura do fêmur na outra perna e fechar a ferida. Após a cirurgia bem sucedida, imagens fluorescentes revelaram vários progenitores Messent-Kinal, como células periosteais prx1 positivas, que foram encontradas durante o processo de reparação da fratura do fêmur.
A coloração azul alciana do fêmur fraturado revelou a formação de calo macio. Além disso, também foi determinado o percentual da formação do calo ou da cartilagem. Ao utilizar microclima com aproximadamente 28 dias após a fratura, o processo de mineralização foi detectado juntamente com a lacuna calo e a fratura.
Observou-se também que se as extremidades da fratura não estavam alinhadas adequadamente ou presas com um pino, havia falta de formação insensível em todos ou em um lado da extremidade da fratura. Ao tentar este procedimento lembre-se de alinhar cuidadosamente as duas extremidades do fêmur quebrado e estabilizá-las com o pino para garantir a cura adequada. Após a cirurgia, a femora pode ser coletada para análise de imagem e molecular.
