Ce protocole décrit une technique fiable pour effectuer et étudier la fracture du fémur sur des souris adultes. Cette technique est facile, rapide et nécessite un minimum d’outils à effectuer. Il permet de caractériser différentes étapes de la cicatrisation des fractures.
Les individus peuvent d’abord avoir du mal à aligner correctement les extrémités de la fracture et à créer des fractures cohérentes entre les souris. En portant une attention particulière au site de fracture, à l’insertion de l’épingle et à la fermeture de la plaie améliorera le succès de cette chirurgie. Pour commencer, préparez l’animal en injectant 0,05 milligramme par kilogramme de buprénorphine par voie sous-cutanée.
À l’aide d’une tondeuse électrique, rasez un carré de deux centimètres sur deux sur les deux cuisses correspondant à l’emplacement du fémur. Stériliser une zone rasée à l’iode et rincer avec une solution d’éthanol à 70%. Faites une incision de cinq millimètres et exposez le fascia sous-jacent.
Exposez le muscle recouvrant le fémur en coupant le fascia. Séparez le muscle du fémur sans endommager le tissu, puis détachez le muscle de l’os et fixez le fémur pour faire une coupure. Faites une coupe transversale au milieu de la tige du fémur.
Insérez une aiguille guide à travers la section distale de la cavité de la moelle et poussez le fil à travers l’articulation du genou. Ensuite, retirez l’aiguille de guidage et effectuez une procédure similaire à partir de l’extrémité proximale. Laissez l’aiguille dans l’extrémité proximale avec sa pointe émergée au-dessus de la peau.
Insérez une broche stabilisatrice à l’intérieur de la pointe de l’aiguille de guidage, en la poussant de manière à ce qu’elle pénètre dans la cavité proximale lorsque l’aiguille de guidage est retirée, puis jetez l’aiguille de guidage. Alignez l’extrémité distale avec l’extrémité proximale de sorte que le fil soit passé à travers la cavité de la moelle distale lorsqu’il sort de l’articulation du genou. Tirez l’extrémité de la broche à l’aide d’une pince chirurgicale afin que les sections proximale et distale soient rapprochées.
Ensuite, pliez les extrémités de la broche chirurgicale vers le site de la fracture pour réaligner les extrémités de la fracture. À l’aide de coupe-fils, retirez le plastique de la base de l’aiguille. Tournez les extrémités de l’épingle pour éviter toute blessure aux tissus internes.
Enfin, remplacez les muscles sur le fémur et fermez l’ouverture de la plaie en pinçant la peau avec des clips. Effectuez une procédure similaire sans fracture du fémur sur l’autre jambe et fermez la plaie. Après la chirurgie réussie, l’imagerie fluorescente a révélé divers progéniteurs messent-kinaux, tels que les cellules périostées Prx1 positives, qui ont été trouvées au cours du processus de réparation de la fracture du fémur.
La coloration bleu Alcian du fémur fracturé a révélé la formation de callosités molles. En outre, le pourcentage de formation de callosité ou de cartilage a également été déterminé. En utilisant la micro-tomodensitométrie environ 28 jours après la fracture, le processus de minéralisation a été détecté ainsi que l’écart de callosité et l’écart de fracture.
Il a également été observé que si les extrémités de fracture n’étaient pas alignées correctement ou fixées avec une épingle, il y avait un manque de formation insensible sur tout ou un côté de l’extrémité de fracture. Lorsque vous tentez cette procédure, n’oubliez pas d’aligner soigneusement les deux extrémités du fémur cassé et de les stabiliser avec l’épingle pour assurer une bonne guérison. Après la chirurgie, le fémur peut être prélevé pour l’imagerie et l’analyse moléculaire.
