このプロトコールは、成体マウスで大腿骨骨折を実行および研究するための信頼できる技術を記載している。このテクニックは簡単で高速で、実行するツールは最小限で済みます。これは、骨折治癒の異なる段階の特徴付けを可能にする。
個体は、最初に骨折端を適切に整列させ、マウス間で一貫した骨折を作り出すことに苦労するかもしれない。骨折部位に細心の注意を払って、ピンの挿入および創傷の閉鎖は、この手術の成功を改善する。まず、ブプレノルフィン1kgあたり0.05ミリグラムを皮下に注射して動物を準備します。
電動トリマーを用いて、大腿骨の位置に対応する両大腿部に2×2センチメートル四方を剃る。ヨウ素を使用して剃った部分を滅菌し、70%エタノール溶液ですすいでください。5ミリメートルの切開を行い、下層の筋膜を露出させる。
筋膜を切断して大腿骨を覆う筋肉を露出させる。組織を傷つけることなく筋肉を大腿骨から分離し、筋肉を骨から切り離し、大腿骨を固定して切り込みを入れます。大腿骨シャフトの中央に横方向の切断を行います。
骨髄腔の遠位部にガイド針を挿入し、膝関節に糸を押し込みます。次に、ガイド針を取り外し、近位端から同様の手順を実行します。針を近位端に残し、その先端が皮膚の上に浮かび上がった。
ガイド針の先端に安定化ピンを挿入し、ガイド針を引き抜くと近位腔に入るように押し込み、ガイド針を捨てます。遠位端を近位端に合わせ、糸が膝関節を出るときに遠位骨髄腔を通過するようにします。外科用クランプを使用してピンの先端を引っ張り、近位部と遠位部が一緒に引っ張られるようにします。
次に、手術ピンの端部を骨折部位に向かって折り畳み、骨折端を再調整する。ワイヤーカッターを使用して、針の付け根からプラスチックを取り外します。ピンの端をひねって、内部組織の損傷を防ぎます。
最後に、筋肉を大腿骨に交換し、クリップで皮膚をつまんで創傷口を閉じる。もう一方の脚に大腿骨骨折を起こさずに同様の手順を実行し、創傷を閉じる。手術の成功後、蛍光イメージングにより、大腿骨骨折修復プロセス中に発見されたPrx1陽性骨膜細胞などの様々なメッセントキナル前駆細胞が明らかになった。
骨折した大腿骨のアルシアンブルー染色は、軟質カルスの形成を明らかにした。さらに、カルスまたは軟骨形成の割合も決定した。破断後約28日目にMicro-CTを採用することで、カルスギャップ、フラクチャギャップとともに石灰化過程を検出しました。
また、骨折端が適切に整列されていないか、ピンで固定されていない場合、骨折端の全部または片側に無神経な形成がないことも観察された。この手順を試みるときは、壊れた大腿骨の両端を慎重に整列させ、ピンで安定させて適切な治癒を確実にすることを忘れないでください。手術後、大腿骨を画像化および分子分析のために収集することができる。
