Questo protocollo descrive una tecnica affidabile per eseguire e studiare la frattura del femore su topi adulti. Questa tecnica è facile, veloce e richiede strumenti minimi da eseguire. Permette la caratterizzazione di diverse fasi di guarigione delle fratture.
Gli individui possono inizialmente lottare con il corretto allineamento delle estremità della frattura e la creazione di fratture coerenti tra i topi. Prestare molta attenzione al sito di frattura, all'inserimento del perno e alla chiusura della ferita migliorerà il successo di questo intervento chirurgico. Per iniziare, preparare l'animale iniettando 0,05 milligrammi per chilogrammo di buprenorfina per via sottocutanea.
Usando un trimmer elettrico radere un quadrato di due per due centimetri su entrambe le cosce corrispondenti alla posizione del femore. Sterilizzare un'area rasata usando iodio e risciacquare con una soluzione di etanolo al 70%. Fai un'incisione di cinque millimetri ed esponi la fascia sottostante.
Esporre il muscolo che copre il femore tagliando la fascia. Separare il muscolo dal femore senza danneggiare il tessuto, quindi staccare il muscolo dall'osso e fissare il femore per fare un taglio. Fai un taglio trasversale nel mezzo dell'albero del femore.
Inserire un ago guida attraverso la sezione distale della cavità midollare e spingere il filo attraverso l'articolazione del ginocchio. Quindi, rimuovere l'ago guida ed eseguire una procedura simile dall'estremità prossimale. Lasciare l'ago nell'estremità prossimale con la sua punta emersa sopra la pelle.
Inserire un perno stabilizzatore all'interno della punta dell'ago guida, spingendolo in modo che entri nella cavità prossimale mentre l'ago guida viene estratto, quindi scartare l'ago guida. Allineare l'estremità distale con l'estremità prossimale in modo che il filo venga fatto passare attraverso la cavità distale del midollo mentre esce dall'articolazione del ginocchio. Tirare la punta del perno usando un morsetto chirurgico in modo che le sezioni prossimale e distale siano tirate insieme.
Quindi piegare le estremità del perno chirurgico verso il sito di frattura per riallineare le estremità della frattura. Usando tagliafili rimuovere la plastica dalla base dell'ago. Ruotare le estremità del perno per evitare qualsiasi lesione del tessuto interno.
Infine, sostituire i muscoli sul femore e chiudere l'apertura della ferita pizzicando la pelle insieme alle clip. Eseguire una procedura simile senza la frattura del femore sull'altra gamba e chiudere la ferita. Dopo il successo dell'intervento chirurgico, l'imaging fluorescente ha rivelato vari progenitori Messent-Kinal, come le cellule periosteali Prx1-positive, che sono state trovate durante il processo di riparazione della frattura del femore.
La colorazione blu alciana del femore fratturato ha rivelato la formazione di callo morbido. Inoltre, è stata determinata anche la percentuale della formazione del callo o della cartilagine. Impiegando la Micro-TC a circa 28 giorni dopo la frattura, il processo di mineralizzazione è stato rilevato insieme al gap del callo e al gap di frattura.
È stato anche osservato che se le estremità della frattura non erano allineate correttamente o fissate con un perno, c'era una mancanza di formazione insensibile su tutto o un lato dell'estremità della frattura. Quando si tenta questa procedura, ricordarsi di allineare attentamente le due estremità del femore rotto e stabilizzarle con il perno per garantire una corretta guarigione. Dopo l'intervento chirurgico, il femore può essere raccolto per l'imaging e l'analisi molecolare.
