Utilizando este protocolo de modelo de rata de silicosis, es posible imitar de cerca el proceso patológico de la silicosis humana. Esta técnica es fácil de realizar de manera rentable con buena repetibilidad y no hay trauma para el animal. El modelo de rata establecido en este estudio contribuye a la identificación temprana, el diagnóstico preciso y el tratamiento de la silicosis.
Para comenzar, coloque las partículas de sílice en un mortero de ágata y muela durante 1,5 horas antes de cada exposición animal. Luego pesa 30 gramos de sílice molida en una balanza electrónica y colócala en un recipiente de vidrio. Hornee a 180 grados centígrados durante seis horas en un secador de aire con calefacción eléctrica para eliminar los patógenos de la superficie de las partículas de sílice.
Configure el controlador de exposición a la sílice conectando los sistemas de inyección y generador. Luego coloque la sílice pesada en el generador y confirme que la conexión de la tubería sea la adecuada. El cable de alimentación está conectado y la fuente de alimentación es normal.
Después de asegurarse de que las válvulas de la cámara de inhalación estén cerradas, encienda el dispositivo de descarga de gases de escape y la fuente de aire para confirmar que el interior del gabinete de protección esté en un estado de presión negativa. Compruebe la concentración de sílice en el armario con un muestreador atmosférico calibrado siguiendo las instrucciones del fabricante. Para la determinación gravimétrica, utilice una balanza analítica digital de un solo plato y pese la sílice.
Coloque la rata en la jaula, luego coloque 10 ratas en la cámara de inhalación y cierre el compartimiento de inhalación y las puertas del gabinete con mosquitero. A continuación, proceda con el experimento de inhalación de sílice según lo planeado. Al finalizar el experimento, cierre la válvula de control de flujo de gas mezclado y abra la válvula de flujo de gas puro para inyectar el gas en la cámara de inhalación.
Después de 20 minutos, cierre la válvula de flujo de aire puro. Abra la puerta y saque la jaula de la cámara de inhalación. Luego saca a las ratas de la jaula y llévalas de regreso a la habitación libre de patógenos.
A continuación, retire la rejilla para ratas y los componentes de la tubería de derivación en secuencia y colóquelos en el fregadero para limpiarlos. Después del enjuague, cierre la válvula de limpieza automática y abra la escotilla. Luego limpie la pared interior con un paño limpio para secar el tanque.
Finalmente, desinfecte el tanque con etanol al 75% y cierre la compuerta de escape. A continuación, abra rápidamente la puerta de la cabina de inhalación para evaporar la humedad y que el interior de la cabina de inhalación permanezca seco. Las ratas expuestas a sílice durante dos y 24 semanas revelaron un engrosamiento de la pared alveolar después de dos semanas de inhalación de sílice, mientras que la estructura alveolar desapareció y se formaron grandes áreas de fibrosis después de 24 semanas.
Además, las partículas de sílice se observaron atrapadas en los macrófagos de los lóbulos pulmonares observados a través de un microscopio de luz polarizada. La tinción inmunohistoquímica de CD 68 en el pulmón reveló la evolución dinámica de los nódulos silicosicos de dos a 24 semanas. A medida que aumentaba el tiempo de exposición, el área de los nódulos también aumentaba gradualmente, y los nódulos silicóticos adyacentes se fusionaban en nódulos más grandes.
Se formaron múltiples lesiones fibróticas de diferentes tamaños en los pulmones de las ratas expuestas a sílice en comparación con las ratas de control. Sin embargo, no se encontraron diferencias significativas en el riñón, el hígado y el bazo entre las ratas con silicosis y el control. Pero, curiosamente, se observó pérdida ósea en ratas con silicosis.
Lo más importante en este protocolo es asegurarse de que la sílice esté bien molida y que la concentración sea constante antes de comenzar el procedimiento.
