Consideramos que este protocolo es importante porque demuestra un método no invasivo, sencillo y fácil de evaluar a lo largo del tiempo los indicadores clave para el diagnóstico de la enfermedad hepática. Esta metodología de imagen permite analizar a lo largo del tiempo los estados hepáticos, evaluar el volumen sanguíneo relativo, el diámetro de la vena porta, la intensidad de la red vascular, todos los parámetros importantes de la patología hepática. Comprender las adaptaciones de la red vascular hepática durante la progresión de la EHGNA y correlacionarlas con marcadores específicos como la esteatosis, la inflamación y la fibrosis puede ayudar a establecer nuevos esquemas terapéuticos eficientes.
Esta técnica ayuda en la identificación de dichos marcadores y también mejora el valor de los ratones en estudios preclínicos centrados en el desarrollo de nuevas terapias contra la progresión de la enfermedad. Para comenzar, coloque al animal anestesiado en la base del escáner de tomografía computarizada. Aplique ungüento oftálmico, asegure el cono de la nariz y configure los parámetros de exploración en el escáner de tomografía computarizada.
Prepare el catéter de la vena de la cola y coloque al ratón en una cama para calentar la cola en agua tibia. Insertar el catéter en la vena de la cola y administrar el primer agente de contraste mediante una inyección, realizada lenta y manualmente con una duración de uno a tres minutos. Luego, adquiera escáneres de todo el cuerpo y del hígado en diferentes momentos.
Seguir el mismo procedimiento para la administración del segundo agente de contraste, 10 días después de la lectura final con el primer agente de contraste. Después de cargar el archivo DICOM de la exploración previa al contraste, ajuste el contraste para ver claramente el hígado, el bazo y el tejido adiposo blanco. En la herramienta ROI 3D, seleccione agregar ROI para generar múltiples ROI para realizar muestreos en las áreas donde el hígado, el bazo y el tejido adiposo parecen claros sin vasos sanguíneos ni grasa aparentes.
En el modo de pintura, elija Esfera. Marque la casilla Solo 2D y seleccione un diámetro de ocho píxeles en el menú desplegable para pintar el ROI sobre los datos. En la entidad de dilatación de erosión, elija menos una erosión.
Realice el muestreo segmentando las ROI 2D en las áreas de interés utilizando la herramienta Esfera en el plano transversal. Vaya a la navegación y seleccione mostrar tabla para mostrar la tabla de cuantificación que contiene los valores de unidad de campo de sabuesos calculados para cada ROI. Luego, reemplaza los valores en esta ecuación.
Calcula el porcentaje de grasa hepática. Cargue el archivo DICOM de escaneo eXIA y ajuste el contraste para ver claramente el hígado, el bazo y el ventrículo izquierdo. En la herramienta ROI 3D, seleccione agregar ROI para segmentar varios ROI para el hígado.
En el modo de pintura, seleccione Solo 2D y elija Esfera para agregar un diámetro de ocho píxeles para pintar el ROI sobre los datos. En la entidad de dilatación de erosión, elija menos una erosión. Especifique un nombre y un color para cada ROI y seleccione mostrar tabla para mostrar la tabla de cuantificación que contiene los valores de HU calculados para cada ROI.
Después de repetir estos pasos para obtener el órgano PV t0, inserte los valores en la ecuación que se muestra en la pantalla para extraer el contraste porcentual correspondiente a la transferencia de lípidos de captación tisular funcional. Cargue el archivo DICOM de escaneo ExiTron y ajuste el contraste para ver claramente la red vascular hepática. Seleccione agregar ROI para generar un ROI 3D para el hígado.
Defina el ROI del hígado marcando el área deseada. A continuación, elija el ROI de fondo en el selector de ROI. Haga clic en el icono Realizar corte para eliminar el fondo sin cambiar el ROI del hígado.
Active el visor de proyección de máxima intensidad. A continuación, en los algoritmos de segmentación indicados por el icono de la varita mágica, seleccione el umbral conectado para resegmentar el ROI del hígado. Establezca los umbrales introduciendo los valores mínimo y máximo y obtenga la red vascular.
De nuevo, extirpa el tejido hepático de fondo para obtener una representación clara de la red vascular. Después de cargar el archivo DICOM de escaneo ExiTron, ajuste el contraste para ver claramente el hígado, el bazo y el ventrículo izquierdo. Seleccione agregar ROI y segmentar ROI para el hígado y un vaso sanguíneo grande.
Defina las capas de segmentación para generar ROI 2D para cada tejido. Repita los pasos para el archivo DICOM previo al contraste para obtener el brillo medio del hígado antes de la inyección del agente de contraste. Para el diámetro de la vena porta, ubique los planos transversales de tres a cuatro cortes por encima de la unión de las venas mesentéricas y esplénicas superiores, y luego vaya a navegación seguida de saneamiento a distancia, seleccione la línea para medir la distancia exacta entre dos puntos.
Los valores medios de contraste se presentan mediante estos datos agrupados. El ensayo de captación tisular funcional indicó una mayor acumulación y un aclaramiento más lento del agente de contraste eXIA en ratones con enfermedad del hígado graso no alcohólico en comparación con los controles sanos. Estos resultados representativos indican las diferencias en el porcentaje de grasa hepática, el volumen de la red vascular hepática, el diámetro de la vena porta y el volumen sanguíneo relativo hepático entre los ratones con enfermedad del hígado graso no alcohólico y los controles sanos.
Las imágenes de micro-TC sin ningún agente de contraste indicaron un mayor porcentaje de grasa hepática en ratones con enfermedad del hígado graso no alcohólico en comparación con los controles. Del mismo modo, se encontró un mayor volumen de la red vascular hepática, un volumen sanguíneo relativo hepático y un mayor diámetro de la vena porta en ratones con enfermedad del hígado graso no alcohólico en comparación con los controles sanos. Lo más importante que hay que recordar al intentar esta técnica es ser constantemente preciso en la región anatómica seleccionada.
Elegir el punto anatómico incorrecto puede dar lugar a resultados poco precisos. Siguiendo esta metodología y protocolo, se puede realizar una evaluación precisa de la estadificación de la enfermedad hepática. Por lo tanto, puede actuar como una plataforma específica para evaluar la eficiencia de nuevos fármacos.
Esta técnica allana el camino para formas nuevas, más fáciles y más precisas de evaluar patologías hepáticas e iniciar ensayos de desarrollo de fármacos relevantes.
