Riteniamo che questo protocollo sia significativo perché dimostra un metodo non invasivo, semplice e facile per valutare nel tempo gli indicatori chiave per la diagnosi di malattia epatica. Questa metodologia di imaging consente l'analisi nel tempo degli stati epatici, la valutazione del volume ematico relativo, il diametro della vena porta, l'intensità della rete vascolare, tutti parametri importanti della patologia epatica. Comprendere gli adattamenti della rete vascolare epatica durante la progressione della NAFLD e correlarli con marcatori specifici come la steatosi, l'infiammazione e la fibrosi può aiutare a stabilire nuovi schemi terapeutici efficienti.
Questa tecnica aiuta nell'identificazione di tali marcatori e migliora anche il valore dei topi negli studi preclinici incentrati sullo sviluppo di nuove terapie contro la progressione della malattia. Per iniziare, posizionare l'animale anestetizzato nella culla dello scanner CT. Applicare un unguento oftalmico, fissare l'ogiva nasale e impostare i parametri di scansione sullo scanner CT.
Preparare il catetere della vena caudale e posizionare il topo su un letto per riscaldare la coda in acqua tiepida. Inserire il catetere nella vena caudale e somministrare il primo mezzo di contrasto tramite iniezione, eseguita lentamente e manualmente con una durata da uno a tre minuti. Quindi, acquisisci scansioni di tutto il corpo e del fegato in diversi momenti.
Seguire la stessa procedura per la somministrazione del secondo mezzo di contrasto, 10 giorni dopo la lettura finale con il primo mezzo di contrasto. Dopo aver caricato il file DICOM della scansione pre-contrasto, regolare il contrasto per vedere chiaramente il fegato, la milza e il tessuto adiposo bianco. Nello strumento ROI 3D, seleziona aggiungi ROI per generare più ROI per eseguire il campionamento nelle aree in cui il fegato, la milza e il tessuto adiposo appaiono chiari senza vasi sanguigni e grasso apparenti.
In modalità disegno, scegli Sfera. Seleziona la casella Solo 2D e seleziona un diametro di otto pixel dal menu a discesa per dipingere il ROI sui dati. Dalla funzione di dilatazione dell'erosione, scegliere meno un'erosione.
Eseguire il campionamento segmentando le ROI 2D sulle aree di interesse utilizzando lo strumento Sfera sul piano trasversale. Vai alla navigazione e seleziona mostra tabella per visualizzare la tabella di quantificazione contenente i valori dell'unità di campo dei segugi calcolati per ogni ROI. Quindi, inserisci i valori in questa equazione.
Calcola la percentuale di grasso del fegato. Caricare il file DICOM di scansione eXIA e regolare il contrasto per vedere chiaramente il fegato, la milza e il ventricolo sinistro. Sotto lo strumento ROI 3D, seleziona aggiungi ROI per segmentare più ROI per il fegato.
In modalità disegno, seleziona Solo 2D e scegli Sfera aggiungi un diametro di otto pixel per dipingere il ROI sui dati. Dalla funzione di dilatazione dell'erosione, scegliere meno un'erosione. Specificare un nome e un colore per ogni ROI e selezionare mostra tabella per visualizzare la tabella di quantificazione contenente i valori HU calcolati per ogni ROI.
Dopo aver ripetuto questi passaggi per ottenere l'organo PV t0, inserire i valori nell'equazione mostrata a video per estrarre il contrasto percentuale corrispondente al trasferimento lipidico funzionale di captazione tissutale. Caricare il file DICOM di scansione ExiTron e regolare il contrasto per vedere chiaramente la rete vascolare epatica. Seleziona Aggiungi ROI per generare un ROI 3D per il fegato.
Definisci il ROI del fegato segnando l'area desiderata. Quindi scegli il ROI in background dal selettore ROI. Fare clic sull'icona Esegui taglio, per rimuovere lo sfondo senza modificare il ROI del fegato.
Attivare il visualizzatore di proiezione di massima intensità. Quindi, sotto gli algoritmi di segmentazione indicati dall'icona della bacchetta magica, seleziona la soglia connessa per risegmentare il ROI del fegato. Impostare le soglie inserendo i valori minimo e massimo e ottenere la rete vascolare.
Anche in questo caso, rimuovere il tessuto epatico di fondo per ottenere una chiara rappresentazione della rete vascolare. Dopo aver caricato il file DICOM di scansione ExiTron, regolare il contrasto per vedere chiaramente il fegato, la milza e il ventricolo sinistro. Seleziona aggiungi ROI e segmenta ROI per il fegato e un vaso sanguigno di grandi dimensioni.
Definisci i livelli di segmentazione per generare ROI 2D per ogni tessuto. Ripetere i passaggi per il file DICOM pre-contrasto per ottenere la luminosità media del fegato prima dell'iniezione del mezzo di contrasto. Per il diametro della vena porta, individuare i piani trasversali di tre o quattro fette sopra la giunzione delle vene mesenterica e splenica superiore, quindi passare alla navigazione seguita dalla sanificazione della distanza, selezionare la linea per misurare la distanza esatta tra due punti.
I valori medi di contrasto sono presentati da questi dati raggruppati. Il test di captazione funzionale del tessuto ha indicato un maggiore accumulo e una clearance più lenta dell'agente di contrasto eXIA nei topi con steatosi epatica non alcolica rispetto ai controlli sani. Questi risultati rappresentativi indicano le differenze nella percentuale di grasso epatico, nel volume della rete vascolare epatica, nel diametro della vena porta e nel volume ematico relativo epatico tra i topi con steatosi epatica non alcolica e i controlli sani.
L'imaging micro-CT senza alcun mezzo di contrasto, ha indicato una percentuale più elevata di grasso epatico nei topi con steatosi epatica non alcolica rispetto ai controlli. Allo stesso modo, un volume di rete vascolare epatica più elevato, un volume di sangue relativo epatico e un diametro della vena porta più grande sono stati trovati nei topi con steatosi epatica non alcolica rispetto ai controlli sani. La cosa più importante da ricordare quando si tenta questa tecnica è di essere costantemente precisi sulla regione anatomica selezionata.
La scelta del punto anatomico sbagliato può portare a risultati non accurati. Seguendo questa metodologia e protocollo, è possibile eseguire una valutazione accurata della stadiazione della malattia epatica. Pertanto, può fungere da piattaforma specifica per valutare l'efficacia di nuovi farmaci.
Questa tecnica apre la strada a modi nuovi, più semplici e più accurati per valutare le patologie epatiche e avviare saggi di sviluppo di farmaci pertinenti.
