Seccionamiento automatizado de vibratomo de tejido pulmonar incluido en agarosa para obtener imágenes de fluorescencia multiplex

Este protocolo es especialmente útil en modelos animales grandes de trasplante y regeneración pulmonar, como los cerdos, donde podemos tomar muestras de pequeñas piezas a lo largo del tiempo. Esta técnica puede ayudarnos a comprender mejor la biología espacial en juego en estos modelos. Esta técnica produce cortes pulmonares mínimamente procesados adecuados para la obtención de imágenes de inmunofluorescencia sin necesidad de recuperación de antígenos, y ha sido eficaz con todos los anticuerpos probados hasta la fecha.

Este procedimiento se puede adaptar para cortar secciones ligeramente más gruesas, digamos alrededor de un milímetro, que luego se pueden usar en microscopía de fluorescencia de lámina de luz para estudiar la expresión espacial de proteínas en un volumen más tridimensional. Nuestra investigación está investigando los factores que influyen en el rechazo del trasplante de pulmón y desarrollando terapias para reducir el rechazo utilizando nuestro modelo porcino. Esta técnica ayuda a comprender los cambios espaciales en las proteínas que afectan los resultados del trasplante después de la cirugía.

Actualmente estamos utilizando esta técnica para explorar el panorama espacial de la expresión de proteínas en nuestro modelo de trasplante de pulmón de cerdo. Esperamos que nos ayude a comprender mejor los mecanismos que subyacen a nuestras terapias experimentales. La clave para tener éxito aquí radica en los avistamientos de vibrátomos, las altas amplitudes de las cuchillas y las velocidades de fuerza más bajas son cosas clave a tener en cuenta si el seccionamiento sale mal.