Técnica de alto rendimiento en tiempo real para cuantificar la formación de trampas extracelulares de neutrófilos en neutrófilos humanos

Nuestra investigación se centra en los neutrófilos, que son los primeros en responder en el sistema inmunitario y desempeñan un papel importante en diversas enfermedades. En las últimas dos décadas, ha quedado claro que los neutrófilos contribuyen al desarrollo del cáncer, las enfermedades autoinmunes y otras afecciones inflamatorias al interrumpir la inmunorregulación. Esto incluye la formación de trampas extracelulares neutrofílicas, redes, estructuras en forma de red que responden a la inflamación y podrían ser objeto de terapia en estas enfermedades.

Sin embargo, a pesar de algunas moléculas prometedoras dirigidas a los mosquiteros, todavía no existe una terapia aprobada que afecte específicamente a este mecanismo. Esto se puede atribuir, al menos en parte, a la falta de un método de cuantificación objetivo, imparcial, reproducible y de alto rendimiento para la formación de redes. Nuestro protocolo emplea imágenes de células vivas de dos colores para analizar el comportamiento de los neutrófilos utilizando tintes impermeables y permeables a la membrana para un seguimiento preciso de la formación de redes.

Este método distingue entre neutrófilos formadores de red y sanos en función de la integridad de la membrana y proporciona una clara diferenciación de los tipos de muerte celular a través de los cambios morfológicos absorbidos en las imágenes de contraste de fase. Este método supera los problemas de las técnicas previamente informadas para cuantificar la formación de redes y proporciona una cuantificación neta eficiente, reproducible y precisa de manera automatizada. Este método ayudará en el desarrollo de fármacos dirigidos a neutrófilos al brindar la capacidad de evaluar múltiples objetivos terapéuticos contra la formación de redes de una manera de alto rendimiento.