İnsan Nötrofillerinde Nötrofil Hücre Dışı Tuzakların Oluşumunu Ölçmek için Gerçek Zamanlı Yüksek Verim Tekniği

Araştırmamız, bağışıklık sisteminde temel ilk müdahale ekipleri olan ve çeşitli hastalıklarda önemli bir rol oynayan nötrofillere odaklanmaktadır. Son yirmi yılda, nötrofillerin immün regülasyonu bozarak kanser, otoimmün hastalıklar ve diğer enflamatuar durumların gelişimine katkıda bulunduğu ortaya çıkmıştır. Bu, nötrofilik hücre dışı tuzaklar, ağlar, iltihaplanmaya yanıt veren ve bu hastalıklarda tedavi için hedeflenebilecek ağ benzeri yapılar oluşturmayı içerir.

Bununla birlikte, ağları hedef alan bazı umut verici moleküllere rağmen, geliştirme aşamasında hala bu mekanizmayı spesifik olarak etkileyen onaylanmış bir tedavi yoktur. Bu, en azından kısmen, net oluşum için nesnel, tarafsız, tekrarlanabilir ve yüksek verimli bir niceleme yönteminin eksikliğine atfedilebilir. Protokolümüz, hassas net oluşum takibi için membran geçirgen ve geçirimsiz boyalar kullanarak nötrofil davranışını analiz etmek için çift renkli canlı hücre görüntüleme kullanır.

Bu yöntem, membran bütünlüğüne dayalı olarak net oluşturan ve sağlıklı nötrofiller arasında ayrım yapar ve faz kontrast görüntülemede emilen morfolojik değişiklikler yoluyla hücre ölüm tiplerinin net bir şekilde ayırt edilmesini sağlar. Bu yöntem, net oluşumu ölçmek için daha önce bildirilen tekniklerin sorunlarının üstesinden gelir ve otomatik bir şekilde verimli, tekrarlanabilir ve doğru bir net miktar belirleme sağlar. Bu yöntem, yüksek verimli bir şekilde net oluşumuna karşı çoklu terapötik hedefleri tarama yeteneği vererek nötrofil hedefli ilaç geliştirmeye yardımcı olacaktır.